Disponibilidad metabólica de metionina en los frijoles mungos

Las evaluaciones previas al estudio incluirán la medición de la tasa metabólica basal (TMB) / gasto energético en reposo (REE) mediante calorimetría indirecta de circuito abierto y composición corporal (masa grasa y libre de grasa) mediante técnica de dilución de óxido de deuterio.

El protocolo de estudio es un protocolo experimental de 3 días (2 días de adaptación más 1 día de estudio), con un intervalo de ≥1 semana para garantizar el lavado completo del trazador.

Cada participante se adapta a las dietas de prueba durante dos días para proporcionarles la energía y proteínas adecuadas (dieta isonitrogenada) y estabilizar su reserva metabólica. La energía durante el período de adaptación se proporciona con un gasto energético en reposo (REE/TMB) x 1,7 y proteína 1,0 g.kg-1.d-1. Durante este período, se espera que cada participante consuma 4 comidas por día que consisten en una bebida líquida proteica y galletas sin proteínas y/o harina de frijol mungo cocida, que proporcionarán los investigadores.

El día del estudio, después de un ayuno nocturno de 10 a 12 h, los participantes vendrán a la unidad de investigación durante 8 a 9 h y recibirán 9 comidas isonitrogénicas e isocalóricas por hora, cada una de las cuales representa una décima parte de la proteína diaria total del participante (1 g.kg-1.d-1) y requerimiento energético (1,5 x REE/BMR).

La proteína se suministra como mezcla de aminoácidos de referencia o como una combinación de la mezcla de aminoácidos de referencia y las proteínas de prueba. La cantidad de cada proteína de prueba proporcionada en cada nivel de ingesta de AIA seleccionado debe calcularse en función de la concentración de todas las fuentes.

Indicador AA, fenilalanina se proporciona a 30 mg.kg-1.d -1 en todas las dietas del estudio (a partir de proteínas e isótopos alimentarios). La cantidad de fenilalanina proporcionada por el aminoácido cristalino debe deducirse dependiendo del contenido de fenilalanina natural en la proteína de prueba.

La energía no proteica en las dietas de prueba se proporciona a través de una bebida con sabor a azúcar y aceite y galletas de almidón de trigo sin proteínas.

La mezcla de aminoácidos de referencia, fenilalanina cristalina no marcada, tirosina y AIA seleccionados se añaden y se mezclan con la bebida de aceite y azúcar antes de administrar las minicomidas cada hora. Las proteínas de prueba se administran por separado a los participantes con cada mini comida.

Se recolectan muestras de aliento antes de comenzar la primera mini comida, al inicio (antes del protocolo de seguimiento; se produce un estado de alimentación estable en el aliento con abundancia de fondo de 13CO2 después de 4 mini comidas cada hora) y cada 15 minutos durante el estado estable isotópico (aproximadamente 2,5 h después iniciando el isótopo). Se deben recolectar tres muestras de aliento en tubos de 10 ml sin revestimiento de silicona utilizando un mecanismo de recolección que permita la eliminación del aire del espacio muerto en cada momento. Cuando la recolección de aliento coincide con una comida cada hora, se debe recolectar primero la muestra de aliento, seguida de la comida. Luego, todas las muestras de aliento se almacenan a temperatura ambiente, en espera de su análisis.

El enriquecimiento de 13C en el aliento se analiza mediante un espectrómetro de masas de relación isotópica de flujo continuo. El enriquecimiento de 13CO2 en las muestras de aliento debido a la administración isotópica durante el estado de alimentación se expresa como % de exceso de átomos (APE) con respecto al valor inicial. Luego se calcula la fracción de 13CO2 (F13CO2) procedente del trazador de oxidación de fenilalanina en relación a la cantidad administrada.

Las pendientes de respuesta de la IAAO de referencia y de prueba se calculan a partir de las mediciones de F13CO2 y las respectivas ingestas de IAA utilizando un modo de regresión lineal de efectos mixtos, con un origen común de la respuesta de F13CO2 en la ingesta de IAA de prueba base. La disponibilidad metabólica (MA) del aminoácido de prueba en la comida de prueba se determina mediante el método de relación de pendiente utilizando la siguiente ecuación:

MA (%) = (Pendiente de proteína de prueba × 100)/Pendiente de referencia