Disponibilité métabolique de la méthionine dans les haricots mungo

Les évaluations préalables à l'étude comprendront la mesure du taux métabolique basal (BMR) / Dépense énergétique au repos (REE) par calorimétrie indirecte en circuit ouvert et composition corporelle (masse grasse et sans graisse) par technique de dilution d'oxyde de deutérium.

Le protocole d'étude est un protocole expérimental de 3 jours (2 jours d'adaptation plus 1 jour d'étude), avec un intervalle de ≥1 semaine pour assurer l'élimination complète du traceur.

Chaque participant est adapté aux régimes tests pendant deux jours pour lui apporter suffisamment d'énergie et de protéines (régime isozoté), et pour stabiliser son pool métabolique. L'énergie pendant la période d'adaptation est fournie à une dépense énergétique au repos (REE/BMR) x 1,7 et en protéines 1,0 g.kg-1.j-1. Pendant cette période, chaque participant devra consommer 4 repas par jour composé d'une boisson liquide protéinée et de biscuits sans protéines et/ou de repas de haricots mungo cuits, que les enquêteurs fourniront.

Le jour de l'étude, après un jeûne nocturne de 10 à 12 heures, les participants viendront à l'unité de recherche pendant 8 à 9 heures et recevront 9 repas horaires isonitrogènes et isocaloriques, chacun représentant un dixième des protéines quotidiennes totales du participant (1 g.kg-1.d-1) et les besoins énergétiques (1,5 x REE/BMR).

La protéine est fournie soit sous forme de mélange d'acides aminés de référence, soit sous forme d'une combinaison du mélange d'acides aminés de référence et des protéines testées. La quantité de chaque protéine testée fournie à chaque niveau d'apport en IAA sélectionné doit être calculée sur la base de la concentration provenant de toutes les sources.

Indicateur AA, la phénylalanine est fournie à 30 mg.kg-1.j -1 dans tous les régimes étudiés (à partir de protéines alimentaires et d'isotopes). La quantité de phénylalanine apportée par l’acide aminé cristallin doit être déduite en fonction de la teneur naturelle en phénylalanine de la protéine testée.

L'énergie non protéique contenue dans les régimes testés est fournie par une boisson aromatisée à l'huile de sucre et des biscuits à l'amidon de blé sans protéines.

Le mélange d'acides aminés de référence, la phénylalanine cristalline non marquée, la tyrosine et l'IAA sélectionné sont ajoutés et mélangés à la boisson sucrée-huileuse avant d'administrer les mini-repas horaires. Les protéines testées sont administrées séparément aux participants à chaque mini-repas.

Des échantillons d'haleine sont collectés avant de commencer le premier mini-repas, au départ (avant le protocole de traceur ; un état d'alimentation stable dans l'haleine, une abondance de fond de 13CO2 se produit après 4 mini-repas horaires) et toutes les 15 minutes pendant l'état d'équilibre isotopique (environ 2,5 h après démarrage de l'isotope). Trois échantillons d'haleine doivent être collectés dans des tubes de 10 ml non recouverts de silicone à l'aide d'un mécanisme de collecte permettant l'élimination de l'air de l'espace mort à chaque instant. Lorsque le prélèvement d'haleine coïncide avec un repas horaire, l'échantillon d'haleine doit être prélevé en premier, suivi du repas. Ensuite, tous les échantillons d’haleine sont conservés à température ambiante, en attendant leur analyse.

L'enrichissement en 13C dans l'haleine est analysé par un spectromètre de masse à rapport isotopique à flux continu. L'enrichissement en 13CO2 dans les échantillons d'haleine dû à l'administration isotopique pendant l'état nourri est exprimé en % atomique d'excès (APE) par rapport à la ligne de base. Ensuite, la fraction de 13CO2 (F13CO2) issue de l'oxydation du traceur phénylalanine par rapport à la quantité administrée est calculée.

Les pentes de réponse IAAO de référence et de test sont calculées à partir des mesures de F13CO2 et des apports d'IAA respectifs en utilisant un mode de régression linéaire à effets mixtes, avec une origine commune de la réponse de F13CO2 à l'apport de base d'IAA du test. La disponibilité métabolique (MA) de l'acide aminé testé dans le repas test est déterminée par la méthode du rapport de pente à l'aide de l'équation suivante :

MA (%) = (Pente de la protéine de test × 100)/Pente de référence