Disponibilidade metabólica de metionina em feijão mungo

As avaliações pré-estudo incluirão a medição da Taxa Metabólica Basal (TMB) / Gasto de Energia em Repouso (REE) por calorimetria indireta de circuito aberto e composição corporal (gordura e massa livre de gordura) por técnica de diluição de óxido de deutério.

O protocolo do estudo é um protocolo experimental de 3 dias (2 dias de adaptação mais 1 dia de estudo), com intervalo ≥1 semana para garantir a eliminação completa do traçador.

Cada participante é adaptado às dietas de teste por dois dias para fornecer energia e proteína adequadas (dieta isonitrogenada) e para estabilizar seu pool metabólico. A energia durante o período de adaptação é fornecida pelo gasto energético de repouso (GER/TMB) x 1,7 e proteína 1,0 g.kg-1.d-1. Durante este período, cada participante deverá consumir 4 refeições por dia, consistindo em uma bebida líquida proteica e biscoitos sem proteína e/ou refeição de feijão mungo cozido, que os investigadores fornecerão.

No dia do estudo, após um jejum noturno de 10 a 12 horas, os participantes chegarão à unidade de pesquisa por 8 a 9 horas e receberão 9 refeições isonitrogênicas e isocalóricas de hora em hora, cada uma representando um décimo da proteína diária total do participante (1 g.kg-1.d-1) e necessidade energética (1,5 x REE/BMR).

A proteína é fornecida como mistura de aminoácidos de referência ou como uma combinação da mistura de aminoácidos de referência e das proteínas de teste. A quantidade de cada proteína de teste fornecida em cada nível de ingestão de IAA selecionado deve ser calculada com base na concentração de todas as fontes.

Indicador AA, a fenilalanina é fornecida em 30 mg.kg-1.d -1 em todas as dietas do estudo (de proteína alimentar e isótopo). A quantidade de fenilalanina fornecida pelo aminoácido cristalino deve ser deduzida dependendo do conteúdo natural de fenilalanina na proteína de teste.

A energia não proteica nas dietas de teste é fornecida através de uma bebida aromatizada com açúcar e óleo e biscoitos de amido de trigo sem proteína.

A mistura de aminoácidos de referência, fenilalanina cristalina não marcada, tirosina e IAA selecionado são adicionados e misturados com a bebida com óleo e açúcar antes de administrar as mini-refeições de hora em hora. As proteínas de teste são administradas separadamente aos participantes em cada mini-refeição.

Amostras de respiração são coletadas antes de iniciar a primeira mini-refeição, no início do estudo (antes do protocolo do traçador; um estado de alimentação estável na abundância de fundo de 13CO2 na respiração ocorre após mini-refeições de 4 horas) e a cada 15 minutos durante o estado estacionário isotópico (aproximadamente 2,5 h após iniciando o isótopo). Três amostras de ar expirado devem ser coletadas em tubos não revestidos de silicone de 10 mL, usando um mecanismo de coleta que permita a remoção do ar do espaço morto em cada momento. Quando a coleta de ar expirado coincide com uma refeição de hora em hora, a amostra de ar expirado deve ser coletada primeiro, seguida pela refeição. Em seguida, todas as amostras de ar respiratório são armazenadas em temperatura ambiente, aguardando análise.

O enriquecimento de 13C na respiração é analisado por espectrômetro de massa de razão isotópica de fluxo contínuo. O enriquecimento de 13CO2 nas amostras de ar expirado devido à administração isotópica durante o estado alimentado é expresso como excesso de % de átomos (APE) em relação à linha de base. Em seguida, calcula-se a fração de 13CO2 (F13CO2) proveniente do traçador de oxidação da fenilalanina em relação à quantidade administrada.

As inclinações de resposta de referência e de teste IAAO são calculadas a partir de medições de F13CO2 e as respectivas ingestões de IAA usando um modo de regressão linear de efeito misto, com uma origem comum de resposta de F13CO2 na ingestão de IAA de teste base. A disponibilidade metabólica (AM) do aminoácido de teste na refeição de teste é determinada pelo método da razão de inclinação usando a seguinte equação:

MA (%) = (inclinação da proteína de teste × 100)/inclinação de referência