Infertilité masculine liée au syndrome inflammatoire post-infectieux (SIGMA)

Progrès de la recherche. Recherche de période

• Durée des inclusions : 30 mois
• Durée du suivi des patients : 7 mois
• Durée totale de l'étude : 37 mois Dans le cadre de leur prise en charge en AMP, les couples stériles ont une consultation avec les médecins de la reproduction et une avec les biologistes. Entre ces deux visites, un bilan spermatique (EXAMEN N°0) est réalisé comprenant une culture de sperme, un spermogramme ou un test de survie à la migration (TMS) et une élastase.

A l'occasion de cet examen, des aliquotes pour la mesure de 8OH-dG, la fragmentation de l'ADN spermatique et la biochimie séminale seront systématiquement prélevées.

Dans le cadre de ce bilan type bilan d'infertilité, il est possible qu'une échographie et une IRM des voies génitales soient prescrites ; si tel est le cas, les données de ces examens seront recueillies dans le formulaire de rapport de cas. Mais ces examens ne seront pas spécifiquement demandés pour la recherche.

Si une leucocytospermie ≥ 0,5*106/ml est découverte ou une augmentation de l'élastase ≥ 500 ng/ml, les dosages de 8OH-dG, la fragmentation et la biochimie séminale seront effectués.

Les patients seront ensuite vus en consultation de biologie (CONSULTATION DE BIOLOGIE N°0 = visite d'inclusion et de randomisation).

• Si les patients présentent 8OH-dG > 35 %, et que leur culture de sperme est négative, il leur sera proposé d'être inclus dans le protocole et la randomisation se fera le jour même ; les patients recevront soit un traitement anti-inflammatoire (Prednisone) soit un traitement placebo.
• Si 8OH-dG < 35 % il leur sera proposé de participer à l'étude du suivi de l'évolution spontanée du SO et du SI sur 6 mois.

Un premier bilan complet sera fait dans 1 mois (EXAMEN N°1) après le début du traitement dans l'étude (Prednisone ou placebo) afin d'estimer l'évolution à la fin du traitement des paramètres inflammatoires et oxydatifs. l'évaluation de l'équilibre ne sera pas réalisée chez les patients inclusifs mais non randomisés.

Les patients randomisés dans l'étude subiront des tests de laboratoire comprenant :

• Une analyse de sperme (leucocytospermie)
• Une mesure du stress oxydatif (dosage de la guanosine 8OHd - dosage de la protéine carbonyle - fragmentation de l'ADN)
• Une biochimie séminale (acide 1-4)alpha phosphatase, citrate, zinc, fructose, carnitine et glucosidase

Un deuxième bilan sera demandé 6 mois (EXAMEN N°2) après le début du traitement pour deux raisons : la première raison est que l'amélioration des paramètres spermatiques se fait lentement. Si un changement spermatique s'est installé pendant des années elle ne va pas disparaître dans la quinzaine. C'est effectivement l'expérience que nous en avons.

Outre la spermatogenèse se poursuivant sur trois mois, un nouveau cycle de production de spermatozoïdes ne peut être estimé que plus de trois mois après le traitement. La deuxième raison est que les récidives des inflammations chroniques de l'organe reproducteur sont extrêmement fréquentes et c'est pour estimer ce taux de récidive que le bilan sera demandé à distance plus par le traitement ou dans 6 mois.

Cet examen comprendra tous les tests d'évaluation initiale :

• Une analyse de sperme (leucocytospermie)
• Une mesure du stress oxydatif (dosage de la guanosine 8OHd - dosage de la protéine carbonyle - fragmentation de l'ADN)
• Une biochimie séminale (acide 1-4)alpha phosphatase, citrate, zinc, fructose, carnitine et glucosidase
• Une échographie des voies génitales et des voies génitales RMI sans injection de composé

Cette visite sera programmée pour tous les patients, randomisés ou non. Au cours de cette visite, les résultats des tests effectués à 1 mois et 6 mois après le début du traitement seront analysés. L'investigateur recueillera les événements indésirables survenus depuis la visite de randomisation.

Les patients qui lors de l'examen à 6 mois ont une amélioration très significative de leurs paramètres spermatiques proposeront la cryoconservation de leur sperme.

Dosages et analyses sur la semence Les prélèvements de semence se feront au Laboratoire de Biologie de la Reproduction de chaque centre de recherche participant.

La plupart des dosages et analyses seront centralisés à l'hôpital Cochin. Mesure de l'élastase Les dosages de l'élastase seront centralisés au Laboratoire de Biologie de la Reproduction, Hôpital Cochin. Les dosages seront réalisés à partir de 150 µl de sperme total prélevé après liquéfaction et congelé à -20°C.

Test de survie à la migration (MST) Ce test sera effectué localement dans chaque centre participant. Une lame de frottis sera réalisée pour une analyse centralisée de la morphologie, afin d'éviter tout effet « centre ».

Biochimie séminale Le séminal biochimique sera centralisé au Laboratoire de Biochimie, Hôpital Cochin. Ce dosage, réalisé sur du sperme total prélevé après liquéfaction, comprend des dosages de phosphatase acide, de citrate, de zinc, de fructose, de carnitine et de 1-4.alpha Glucosidase La semence sera collectée, centrifugée à 600g pendant 5 minutes. Après centrifugation, 500μl du surnageant seront congelés à - 20°C et utilisés pour la séminale biochimique.

Mesure du stress oxydatif L'étendue du stress oxydatif sera évaluée de manière centralisée à l'hôpital Cochin. Ce dosage, réalisé sur le sperme total prélevé après liquéfaction, comprend le dosage de la 8OHd-Guanosine, le dosage de la protéine carbonyle et la fragmentation de l'ADN.

La semence sera recueillie centrifugée à 600g pendant 5 minutes. Après centrifugation :

• 250μl du surnageant seront congelés à - 20°C et utilisés pour le dosage de la protéine carbonyle.
• Le culot sera utilisé pour le dosage de la 8OHdguanosine et la fragmentation de l'ADN. Mesure des paramètres de mouvement des spermatozoïdes par CASA La mesure des paramètres de mouvement des spermatozoïdes par CASA sera effectuée localement dans chaque centre participant.

Echographie et IRM de l'appareil génital Des échographies et IRM seront réalisées dans l'appareil génital au service central de radiologie de l'hôpital Necker.

Conservation de l'échantillon de sperme restant Pour les patients présentant une amélioration très significative de leurs paramètres de sperme lors de l'examen à 6 mois, il sera proposé l'auto-conservation du sperme pour toute tentative ultérieure d'ART après la fin de l'étude.

En revanche, l'échantillon de sperme restant, sauf opposition du patient, sera conservé après la fin de la recherche pour une utilisation ultérieure dans des recherches futures sur la fertilité et l'inflammation. Cette collection sera conservée au CECOS - Cochin Hospital, Bldg. Cassini - 27 rue du FAUBOURG St Jacques, 75014 Paris sous la direction du Professeur Jean-PHILIPPE Wolf.

Règles d'arrêt Les patients peuvent interrompre leur participation à la recherche s'ils le souhaitent, à tout moment et pour quelque raison que ce soit, ou sur décision de l'investigateur. Cependant, le traitement ne doit pas être arrêté brutalement.

Règles d'arrêt de la participation d'une personne sollicitant

• Mauvaise adhésion au protocole
• maladie intercurrente entre la visite d'inclusion et la visite à 1 mois nécessitant l'arrêt de l'étude. Après l'étude est celle de la surveillance.

Procédures de contrôle des tests de sortie Tous les tests de sortie doivent être documentés et l'enquêteur doit en préciser la raison. Pour les patients considérés comme perdus de vue, les formulaires de déclaration de cas doivent être remplis jusqu'à la dernière visite. L'investigateur s'efforcera de contacter le patient et de connaître la raison de sa sortie de l'essai et son état de santé.

Conséquences Les patients qui quittent l'essai ne seront pas réintégrés dans l'étude. Leurs numéros ne sont pas effectivement réutilisés. Ces patients seront toujours suivis dans la partie non randomisée de l'étude.