Infertilidade masculina relacionada à síndrome inflamatória pós-infecção (SIGMA)

Progresso da pesquisa. Pesquisa de intervalo de tempo

• Duração das inclusões: 30 meses
• Duração do acompanhamento do paciente: 7 meses
• Duração total do estudo: 37 meses No âmbito da sua cobertura em AMP, os casais estéreis têm uma consulta com os médicos da reprodução e outra com os biólogos. Entre estas duas visitas, é feita uma avaliação do equilíbrio espermático (EXAME N°0) incluindo uma cultura de sêmen, um espermograma ou um teste de sobrevivência à migração (TMS) e uma elastase.

Por ocasião desse exame, serão sistematicamente coletadas alíquotas para a medida de 8OH-dG, fragmentação do DNA espermático e bioquímica seminal.

No âmbito desta avaliação de equilíbrio padrão da infertilidade, é possível que uma ecografia e uma ressonância magnética das vias genitais sejam prescritas; se for o caso, os dados desses exames serão coletados no formulário de relato de caso. Mas esses exames não serão solicitados especificamente para a busca.

Se for descoberta uma leucocitospermia ≥ 0,5*106/ml ou um aumento da elastase ≥ 500 ng/ml, serão feitas as dosagens de 8OH-dG, a fragmentação e a bioquímica seminal.

Os pacientes serão então atendidos em consulta de biologia (CONSULTA DE BIOLOGIA N°0 = visita de inclusão e randomização).

• Caso os pacientes apresentem 8OH-dG > 35%, e que sua cultura de sêmen seja negativa, será sugerida a inclusão no protocolo e a randomização será feita no mesmo dia; os pacientes receberão ou um tratamento anti-inflamatório (prednisona) é um placebo de tratamento.
• Se 8OH-dG < 35% será sugerido a eles participarem do estudo de acompanhamento da evolução espontânea do SO e da IS ao longo de 6 meses.

Uma primeira avaliação completa do equilíbrio será feita em 1 mês (EXAME N°1) após o início do tratamento no estudo (Prednisona ou placebo) para estimar a evolução ao final do tratamento dos parâmetros inflamatórios e oxidativos. a avaliação do equilíbrio não será realizada no paciente inclusivo, mas não randomizado.

Os pacientes randomizados no estudo farão exames laboratoriais, incluindo:

• Uma análise do sêmen (leucocitospermia)
• Uma medida de estresse oxidativo (ensaio de guanosina 8OHd - ensaio de proteína carbonilada - fragmentação de DNA)
• Uma bioquímica seminal (ácido 1-4) alfa fosfatase, citrato, zinco, frutose, carnitina e glucosidase

Uma segunda avaliação do equilíbrio será solicitada 6 meses (EXAME N°2) após o início do tratamento por dois motivos: o primeiro motivo é que a melhora dos parâmetros espermáticos é feita lentamente. Se uma mudança espermática se instalou durante anos ela não vai desaparecer na quinzena. É efetivamente a experiência que dela temos.

Além da espermatogênese continuar ao longo de três meses, um novo ciclo de produção de espermatozóides pode ser estimado apenas mais de três meses após o tratamento. A segunda razão é que as segundas agressões das inflamações crônicas do órgão reprodutor são extremamente frequentes e é para estimar essa taxa de segundas agressões que a avaliação do equilíbrio será solicitada remotamente pelo tratamento ou em 6 meses.

Esta revisão incluirá todos os testes de avaliação inicial:

• Uma análise do sêmen (leucocitospermia)
• Uma medida de estresse oxidativo (ensaio de guanosina 8OHd - ensaio de proteína carbonilada - fragmentação de DNA)
• Uma bioquímica seminal (ácido 1-4) alfa fosfatase, citrato, zinco, frutose, carnitina e glucosidase
• Um ultrassom do trato genital e RMI do trato genital sem injeção de qualquer composto

Esta visita será agendada para todos os pacientes, randomizados ou não. Nesta visita, serão analisados ​​os resultados dos exames realizados 1 mês e 6 meses após o início do tratamento. O investigador coletará eventos adversos ocorridos desde a visita de randomização.

Os pacientes que durante o exame em 6 meses tiverem uma melhora muito significativa em seus parâmetros de sêmen, proporão a criopreservação de seus espermatozóides.

Ensaios e análises do sêmen As coletas de sêmen serão realizadas no Laboratório de Biologia Reprodutiva de cada centro de pesquisa participante.

A maioria dos ensaios e análises serão centralizados no Cochin Hospital. Medição da elastase Os ensaios de elastase serão centralizados no Laboratório de Biologia Reprodutiva do Hospital Cochin. Os ensaios serão realizados a partir de 150 µl de espermatozoides totais coletados após liquefação e congelados a -20°C.

Migration Survival Test (MST) Este teste será feito localmente em cada centro participante. Uma lâmina de esfregaço será feita para uma análise centralizada da morfologia, para evitar quaisquer efeitos de "centro".

Bioquímica Seminal A bioquímica seminal será centralizada no Laboratório de Bioquímica do Hospital Cochin. Este ensaio, realizado no esperma total coletado após liquefação, incluindo ensaios de fosfatase ácida, citrato, zinco, frutose, carnitina e 1-4.alpha Glucosidase O sêmen será coletado, centrifugado a 600g por 5 minutos. Após a centrifugação, 500μl do sobrenadante serão congelados a - 20°C e utilizados para seminal bioquímico.

Medição do estresse oxidativo A extensão do estresse oxidativo será avaliada centralmente no Cochin Hospital. Este ensaio, realizado em espermatozoides totais coletados após a liquefação, inclui a determinação de 8OHd-Guanosina, a dosagem de proteína carbonilada e a fragmentação do DNA.

O sêmen será coletado centrifugado a 600g por 5 minutos. Após a centrifugação:

• 250μl do sobrenadante serão congelados a - 20°C e utilizados para determinação de proteína carbonilada.
• O pellet será utilizado para o ensaio de 8OHdguanosina e fragmentação de DNA. Medição dos parâmetros do movimento espermático pelo CASA A medição dos parâmetros do movimento espermático pelo CASA será realizada localmente em cada centro participante.

Ultrassonografia e ressonância magnética do trato genital Serão realizadas ultrassonografias e ressonância magnética do trato genital no departamento central de radiologia do hospital Necker.

Conservação da amostra remanescente de sêmen Para os pacientes com melhora muito significativa dos parâmetros do sêmen durante o exame aos 6 meses, será oferecida a autopreservação do sêmen para qualquer tentativa posterior de TARV após o término do estudo.

Por outro lado, a amostra restante de sêmen, exceto se houver oposição do paciente, será mantida após o término da pesquisa para posterior utilização em futuras pesquisas sobre fertilidade e inflamação. Esta coleção será mantida no CECOS - Cochin Hospital, Bldg. Cassini - 27 rue du FAUBOURG St Jacques, 75014 Paris sob a supervisão do professor Jean-PHILIPPE Wolf.

Regras de interrupção Os pacientes podem interromper sua participação na pesquisa se desejarem, a qualquer momento e por qualquer motivo, ou mediante decisão do investigador. No entanto, o tratamento não deve ser interrompido repentinamente.

Regras de paralisação para a participação de uma pessoa que procura

• Baixa adesão ao protocolo
• doença intercorrente entre a visita de inclusão e a visita de 1 mês exigindo a interrupção do estudo. Na sequência do estudo está o da vigilância.

Procedimentos para monitorar o teste de saída Todos os testes de saída devem ser documentados e o investigador deve especificar o motivo. Para pacientes considerados com perda de visão, os formulários de relato de caso devem ser preenchidos até a última consulta. O investigador fará todos os esforços para entrar em contato com o paciente e saber o motivo de sua saída do estudo e sua saúde.

Consequências Os pacientes que desistirem do estudo não serão incluídos novamente no estudo. Seus números não são efetivamente reutilizados. Esses pacientes ainda serão acompanhados na parte não randomizada do estudo.