Effet anticaries du probiotique Lactobacillus Brevis CD2 (Lb CD2).

2 JUSTIFICATION DE L'ÉTUDE Dans une étude précédente, l'efficacité de Lb CD2 sur des covariables intermédiaires liées au développement de caries a été testée. Ainsi, il a été décidé de planifier une nouvelle étude sur les écoliers de la même zone. Le but du présent protocole de recherche était d'évaluer l'effet anticariogène des probiotiques utilisés quotidiennement, sur le développement des caries chez les enfants. L'hypothèse nulle était que le probiotique Lb CD2 ne modifierait pas le risque carieux des enfants. De plus, l'étude sera réalisée pour étudier l'acidogénicité de la plaque in situ suite à la consommation régulière d'un produit probiotique par rapport à un groupe témoin.

3 OBJECTIFS DE L'ÉTUDE

Objectif principal:

La consommation régulière de probiotiques entraînera une augmentation significativement plus faible des caries par rapport à un placebo. Une hygiène buccale régulière est autorisée.

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Critères cibles :

Efficacité : Réduction de l'augmentation des caries Sécurité : Détermination des effets secondaires

Sécurité : Détermination des effets secondaires Les effets secondaires tels que notamment les modifications de la muqueuse buccale après la consommation du produit.

4 CONCEPTION DE L'ÉTUDE 4.1 Conception de l'étude et centre d'étude Étude longitudinale en double aveugle, contrôlée contre placebo, sur 440 sujets de test. L'étude sera réalisée dans un seul centre du Département de chirurgie, microchirurgie et sciences médicales - École de médecine dentaire de l'Université de Sassari, Viale San Pietro 43/C Sassari.

La durée prévue de l'étude est de janvier-février 2013 à mars 2015 (avec rapport final).

Proposition de début du recrutement des sujets de test janvier-février 2013.

5 SUJETS DE TEST 440 sujets de test de sexe masculin ou féminin en bonne santé. Ceux-ci seront recrutés dans les écoles primaires de Sassari.

5.1 Traitement concomitant non autorisé En général, autres produits contenant des probiotiques, à l'exception des produits laitiers.

5.2 Médicaments concomitants autorisés Tous les autres médicaments sont autorisés. Cependant, pour les 30 jours précédant la phase de dépistage et pendant toute la période d'étude, ils doivent être inscrits dans le formulaire de rapport de cas sous la section "Médicaments concomitants".

5.3 Critères d'arrêt prématuré de l'étude chez les sujets de test individuels.

Les raisons qui peuvent être données pour le retrait prématuré d'un sujet de test individuel sont :

• Rétractation du consentement
• Si la poursuite de la participation à l'étude n'est plus acceptable ou justifiée pour des raisons médicales importantes telles qu'évaluées par l'investigateur
• Apparition d'effets secondaires intolérables (ES) telle qu'évaluée par l'investigateur
• Violation du protocole, selon la décision de l'enquêteur, motivée par écrit
• Absence du sujet de test
• Manque de conformité et de motivation de la part du sujet testé (par ex. ne pas porter le porte-échantillon intra-oral pendant plus de six heures par jour) Les sujets de test qui se retirent prématurément de l'étude doivent être soumis à l'examen final.

Les raisons du retrait de l'étude et la date doivent être consignées par l'investigateur dans le formulaire de rapport de cas.

5.4 Critères d'arrêt de l'ensemble de l'étude Notamment la reconnaissance d'informations nouvelles et/ou de risques nécessitant une réévaluation du rapport bénéfice/risque. En cas de résultat négatif, le LKP peut interrompre l'étude en concertation avec l'investigateur principal et le promoteur.

En cas de recrutement insuffisant ou d'opposition sérieuse persistante ou récurrente au protocole d'essai, le promoteur, en accord avec le LKP et après discussion avec l'investigateur principal, peut décider d'arrêter prématurément l'étude pour des raisons administratives.

Si l'arrêt prématuré de l'étude est inévitable, des mesures doivent être décidées et introduites pour protéger autant que possible les intérêts et le bien-être des sujets testés.

6 PRODUITS DE L'ÉTUDE 6.1 Produits de test et placebo Les produits de test pour l'étude sont fabriqués et fournis par CD Investments srl, Italie. Les pastilles placebo ressembleront aux pastilles actives avec le même goût et le même poids de 1 gramme contenant uniquement les ingrédients listés ci-dessus dans la même proportion que l'actif mais sans L. brevis CD2. Il ne sera pas possible de différencier les deux produits.

Le centre d'étude et le moniteur doivent être informés de toute carence dans les produits de l'étude (les produits seront conservés à 4° degrés pendant l'étude).

6.2 Dentifrice standard et brosses à dents Dentifrice standard contenant du fluor : dentifrice contenant du monofluorophosphate (800/1000 ppm)

6.3 Conditionnement et étiquetage 6.3.1 Produit à tester Avant utilisation, l'investigateur conservera les échantillons à tester à 4° degrés de température. Pour chaque sujet, un conteneur de médicament à l'étude pour la période d'étude sera livré, ainsi qu'un conteneur de remplacement dans chaque cas. Les échantillons de test ont été produits et fournis par CD investiments (Italie) et codés comme « vert » ou « rouge ». Le code a été scellé par un contrôleur indépendant et n'a pas été rompu tant que l'analyse statistique n'a pas été finalisée.

6.4 Détermination de la conformité 6.4.1 Médicament test Les contenants seront pesés avant et après la période d'étude.

6.4.2 Dentifrice standard Les sujets testés doivent utiliser le dentifrice standard tout au long de l'étude. Un contrôle sera effectué sur la conformité en interrogeant le sujet de test.

6.5 Documentation sur la localisation des échantillons de test L'investigateur enregistrera la localisation des échantillons de test dans un inventaire. Les bons de livraison et les avis de retour seront signés par l'enquêteur.

7 POSOLOGIE Dans la phase de traitement, les sujets utiliseront 2 losanges par jour.

8 CALENDRIER DE L'ETUDE ET METHODES D'ESSAIS 8.1 Calendrier de l'étude 8.1.1 Calendrier prévu Avant le début de l'étude, des données démographiques, ethniques et pronostiques seront recueillies (phase de dépistage). Une histoire médicale sera prise, avec la documentation des traitements antérieurs et concomitants et un examen clinique de la cavité buccale (état dentaire, muqueuse buccale) sera effectué par l'investigateur. Si le sujet du test répond à tous les critères d'inclusion sans remplir aucun des critères d'exclusion, il sera inscrit à l'essai clinique et recevra un numéro d'identification du sujet du test.

Tous les sujets de test recevront un journal du patient lors de la phase de sélection. Des porte-échantillons individuels seront maintenant préparés pour chaque sujet de test.

Période 1 : (180 jours) consommation du produit à l'étude, hygiène buccale régulière Au début de la période, le score ICDAS sera enregistré avec le pH de la plaque et les streptocoques mutans salivaires. Tous les sujets reçoivent des instructions sur l'hygiène bucco-dentaire et sur la consommation du produit à l'étude. Au 90e jour, le pH de la plaque et les streptocoques mutans salivaires seront également enregistrés à nouveau.

Période 2 : (90 jours) le pH régulier de la plaque d'hygiène bucco-dentaire et les streptocoques mutans salivaires seront à nouveau enregistrés. Période 3 : (180 jours) consommation du produit à l'étude, hygiène bucco-dentaire régulière Au début de la période, le score ICDAS sera enregistré avec le pH de la plaque et les streptocoques mutans salivaires. Tous les sujets reçoivent des instructions sur l'hygiène bucco-dentaire et sur la consommation du produit à l'étude. Au 90e jour, le pH de la plaque et les streptocoques mutans salivaires seront également enregistrés à nouveau.

Période 4 : (90 jours) le pH régulier de la plaque d'hygiène bucco-dentaire et les streptocoques mutans salivaires seront à nouveau enregistrés. Période 5 : (180 jours) consommation du produit à l'étude, hygiène buccale régulière Au début de la période, le score ICDAS sera enregistré avec le pH de la plaque et les streptocoques mutans salivaires. Tous les sujets reçoivent des instructions sur l'hygiène bucco-dentaire et sur la consommation du produit à l'étude. Au 90e jour, le pH de la plaque et les streptocoques mutans salivaires seront également enregistrés à nouveau.

9 MATERIELS ET METHODES 9.1 Paramètres cliniques Indice ICDAS (International Caries Detection and Assessment System), Muqueuse buccale

9.2 Enquête sur les facteurs salivaires Les facteurs salivaires Le pH et le débit seront mesurés pendant la phase de dépistage sur trois jours, chaque fois le matin. La moyenne des trois mesures sera calculée.

Le kit de test Dentobuff® (Vivadent, Liechtenstein) sera utilisé.

9.3 Technique de brossage des dents Les sujets testés doivent se nettoyer les dents au moins deux fois par jour avec le dentifrice contenant du fluorure et une brosse à dents souple. Pendant ce temps, une gaze fraîche et humide (imbibée d'eau) sera placée chaque jour dans le récipient afin d'offrir une atmosphère humide aux appareils. Les spécimens ne doivent pas sécher.

Les spécimens d'émail eux-mêmes sont également soigneusement nettoyés avec la brosse à dents souple, sauf le dernier jour de chaque période.

9.4 Randomisation A l'aide d'un programme informatique (Excel 2010 pour Mac OsX), la randomisation sera effectuée sur une base individuelle.

9.5 Application du produit à l'étude Les sujets ne sont pas autorisés à mâcher les pastilles. Ils sont autorisés à avaler les pastilles.

9.6 Évaluation du pH de la plaque À la fin de chaque phase, l'acidogénicité de la plaque sera évaluée à l'aide de la technique MicroTouch après une précédente provocation au saccharose. Des évaluations de pH seront effectuées sur chaque échantillon. Le pH sera mesuré en quintuple à 6 moments différents : au départ (avant le rinçage au saccharose) et 2, 5, 10, 20 et 30 min après un rinçage de 1 min avec 10 ml de saccharose à 10 %, en utilisant des mouvements actifs.

Une microélectrode tactile en iridium (diamètre 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Floride, États-Unis, avec une électrode de référence en verre poreux (MERE 1, World Precision Instruments) sera utilisée. Un pont salin sera créé dans une solution de KCl (3 M) entre l'électrode de référence et un doigt du sujet. Avant chaque session d'évaluation du pH, l'électrode sera calibrée à l'aide d'une solution tampon à pH 7,00 et 4,00.