Antikarieswirkung des probiotischen Lactobacillus Brevis CD2 (Lb CD2).

2 BEGRÜNDUNG FÜR DIE STUDIE In einer früheren Studie wurde die Wirksamkeit von Lb CD2 auf vorläufige Kovariaten im Zusammenhang mit der Kariesentwicklung getestet. Daher wurde beschlossen, eine neue Studie mit Schulkindern aus der gleichen Gegend zu planen. Das Ziel des vorliegenden Forschungsprotokolls war es, die antikariogene Wirkung von täglich verwendeten Probiotika auf die Kariesentwicklung bei Kindern zu bewerten. Die Nullhypothese war, dass das Probiotikum Lb CD2 das Kariesrisiko der Kinder nicht verändern würde. Darüber hinaus wird die Studie durchgeführt, um die Plaque-Azidogenität in situ nach dem regelmäßigen Verzehr eines probiotischen Produkts im Vergleich zu einer Kontrollgruppe zu untersuchen.

3 STUDIENZIELE

Hauptziel:

Die regelmäßige Einnahme von Probiotika führt zu einem deutlich geringeren Karieszuwachs im Vergleich zu einem Placebo. Regelmäßige Mundhygiene ist erlaubt.

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Zielkriterien:

Wirksamkeit: Geringerer Karieszuwachs. Sicherheit: Bestimmung von Nebenwirkungen

Sicherheit: Ermittlung von Nebenwirkungen Nebenwirkungen wie insbesondere Veränderungen der Mundschleimhaut nach Einnahme des Produktes.

4 STUDIENDESIGN 4.1 Studiendesign und Studienzentrum Doppelblinde, placebokontrollierte Längsschnittstudie an 440 Probanden. Die Studie wird an einem einzigen Zentrum in der Abteilung für Chirurgie, Mikrochirurgie und medizinische Wissenschaften – Fakultät für Zahnmedizin der Universität von Sassari, Viale San Pietro 43/C Sassari, durchgeführt.

Die geplante Studiendauer ist Januar-Februar 2013 bis März 2015 (mit Abschlussbericht).

Geplanter Beginn der Rekrutierung von Probanden Januar-Februar 2013.

5 TESTPERSONEN 440 gesunde männliche oder weibliche Testpersonen. Diese werden aus Grundschulen in Sassari rekrutiert.

5.1 Begleitbehandlung nicht zulässig Generell andere probiotikahaltige Produkte, außer Milchprodukte.

5.2 Erlaubte Begleitmedikation Alle anderen Medikamente sind erlaubt. Für die 30 Tage vor der Screeningphase und während des gesamten Studienzeitraums müssen sie jedoch im Fallberichtsformular unter der Rubrik „Begleitmedikation“ eingetragen werden.

5.3 Kriterien für vorzeitigen Studienabbruch bei einzelnen Probanden.

Als Gründe für das vorzeitige Ausscheiden eines einzelnen Probanden können genannt werden:

• Widerruf der Einwilligung
• Wenn eine fortgesetzte Teilnahme an der Studie nach Einschätzung des Prüfarztes aus wichtigen medizinischen Gründen nicht mehr akzeptabel oder gerechtfertigt ist
• Auftreten von nicht tolerierbaren Nebenwirkungen (SE) wie vom Prüfarzt beurteilt
• Verstoß gegen das Protokoll, gemäß der Entscheidung des Ermittlers, mit schriftlicher Begründung
• Nichterscheinen der Testperson
• Mangelnde Compliance und Motivation seitens der Testperson (z. Tragen des intraoralen Probenhalters nicht länger als sechs Stunden am Tag) Probanden, die vorzeitig aus der Studie ausscheiden, sollten der Abschlussuntersuchung unterzogen werden.

Die Gründe für den Studienabbruch und das Datum sind vom Prüfarzt im Fallberichtsbogen zu vermerken.

5.4 Kriterien für den Abbruch der gesamten Studie Insbesondere das Erkennen neuer Informationen und/oder Risiken, die eine Neubewertung des Nutzen-Risiko-Verhältnisses erfordern. Bei negativem Ergebnis kann das LKP die Studie in Absprache mit dem Studienleiter und dem Sponsor abbrechen.

Bei unzureichender Rekrutierung oder anhaltenden oder wiederkehrenden schwerwiegenden Einwänden gegen das Studienprotokoll kann der Sponsor im Einvernehmen mit dem LKP und nach Rücksprache mit dem Studienleiter entscheiden, die Studie aus administrativen Gründen vorzeitig zu beenden.

Sollte die vorzeitige Beendigung der Studie unvermeidbar sein, müssen Maßnahmen beschlossen und eingeleitet werden, um die Interessen und das Wohl der Probanden so weit wie möglich zu schützen.

6 STUDIENPRODUKTE 6.1 Testprodukte und Placebo Die Testprodukte für die Studie werden von CD Investments srl, Italien, hergestellt und bereitgestellt. Die Placebo-Lutschtabletten sehen aus wie die aktiven Lutschtabletten mit dem gleichen Geschmack und Gewicht von 1 Gramm und enthalten nur die oben aufgeführten Inhaltsstoffe im gleichen Verhältnis wie der Wirkstoff, aber ohne L. brevis CD2. Eine Unterscheidung der beiden Produkte ist nicht möglich.

Das Studienzentrum und der Monitor müssen über jeden Mangel der Studienprodukte informiert werden (Produkte werden während der Studie auf 4° Grad gehalten).

6.2 Standardzahnpasta und Zahnbürsten Fluoridhaltige Standardzahnpasta: Monofluorphosphathaltige Zahnpasta (800/1000 ppm)

6.3 Verpackung und Etikettierung 6.3.1 Testprodukt Vor Gebrauch lagert der Prüfer die Testproben bei 4° Grad Temperatur. Für jeden Probanden wird ein Behältnis mit Studienmedikation für den Studienzeitraum sowie jeweils ein Ersatzbehältnis geliefert. Die Testmuster wurden von CD Investments (Italien) hergestellt und geliefert und entweder als „grün“ oder „rot“ codiert. Der Code wurde von einem unabhängigen Beobachter versiegelt und nicht gebrochen, bis die statistische Analyse abgeschlossen war.

6.4 Bestimmung der Compliance 6.4.1 Testmedikation Die Behälter werden vor und nach dem Studienzeitraum gewogen.

6.4.2 Standard-Zahnpasta Die Testpersonen müssen während der gesamten Studie die Standard-Zahnpasta verwenden. Die Einhaltung wird durch Befragung der Testperson überprüft.

6.5 Dokumentation über den Verbleib der Prüfmuster Der Untersucher erfasst den Verbleib der Prüfmuster in einem Inventar. Lieferscheine und Rückgabeanzeigen werden vom Prüfer unterschrieben.

7 DOSIERUNG In der Behandlungsphase nehmen die Probanden 2 Losanges pro Tag ein.

8 STUDIENPLAN UND TESTMETHODEN 8.1 Studienplan 8.1.1 Geplanter Ablauf Vor Beginn der Studie werden demografische, ethnische und prognostische Daten erhoben (Screening-Phase). Es erfolgt eine Anamneseerhebung mit Dokumentation der Vor- und Begleitbehandlungen und eine klinische Untersuchung der Mundhöhle (Zahnstatus, Mundschleimhaut) durch den Untersucher. Wenn die Testperson alle Einschlusskriterien erfüllt, aber keines der Ausschlusskriterien erfüllt, wird sie in die klinische Studie aufgenommen und erhält eine Testpersonen-Identifikationsnummer.

Alle Probanden erhalten in der Screening-Phase ein Patiententagebuch. Für jeden Probanden werden nun individuelle Probenhalter präpariert.

Periode 1: (180 Tage) Einnahme des Studienprodukts, regelmäßige Mundhygiene Zu Beginn der Periode wird der ICDAS-Score mit Plaque-pH und Mutans-Streptokokken im Speichel aufgezeichnet. Alle Probanden werden über die Mundhygiene und den Verzehr des Studienprodukts aufgeklärt. Am 90. Tag werden auch der Plaque-pH-Wert und Mutans-Streptokokken im Speichel erneut aufgezeichnet.

Zeitraum 2: (90 Tage) Regelmäßiger Mundhygiene-Plaque-pH-Wert und Speichel-Mutans-Streptokokken werden erneut aufgezeichnet. Periode 3: (180 Tage) Einnahme des Studienprodukts, regelmäßige Mundhygiene Zu Beginn der Periode wird der ICDAS-Score mit Plaque-pH und Mutans-Streptokokken im Speichel aufgezeichnet. Alle Probanden werden über die Mundhygiene und den Verzehr des Studienprodukts aufgeklärt. Am 90. Tag werden auch der Plaque-pH-Wert und Mutans-Streptokokken im Speichel erneut aufgezeichnet.

Zeitraum 4: (90 Tage) Regelmäßiger Mundhygiene-Plaque-pH-Wert und Speichel-Mutans-Streptokokken werden erneut aufgezeichnet. Zeitraum 5: (180 Tage) Einnahme des Studienprodukts, regelmäßige Mundhygiene Zu Beginn des Zeitraums wird der ICDAS-Score mit Plaque-pH-Wert und Speichel-Mutans-Streptokokken aufgezeichnet. Alle Probanden werden über die Mundhygiene und den Verzehr des Studienprodukts aufgeklärt. Am 90. Tag werden auch der Plaque-pH-Wert und Mutans-Streptokokken im Speichel erneut aufgezeichnet.

9 MATERIAL UND METHODEN 9.1 Klinische Parameter ICDAS-Index (International Caries Detection and Assessment System), Mundschleimhaut

9.2 Untersuchung der Speichelfaktoren Speichelfaktoren pH und Flussrate werden während der Screeningphase an drei Tagen jeweils morgens gemessen. Der Mittelwert der drei Messungen wird berechnet.

Es wird das Dentobuff®-Testkit (Vivadent, Liechtenstein) verwendet.

9.3 Zahnputztechnik Die Testpersonen müssen ihre Zähne mindestens zweimal täglich mit der fluoridhaltigen Zahnpasta und einer weichen Zahnbürste reinigen. Während dieser Zeit wird täglich eine frische, feuchte Gaze (mit Wasser getränkt) in den Behälter gelegt, um eine feuchte Atmosphäre für die Geräte zu schaffen. Die Proben dürfen nicht austrocknen.

Die Zahnschmelzproben selbst werden ebenfalls sorgfältig mit der weichen Zahnbürste gereinigt, außer am letzten Tag jeder Periode.

9.4 Randomisierung Unter Verwendung eines Computerprogramms (Excel 2010 für Mac OsX) wird die Randomisierung auf individueller Basis durchgeführt.

9.5 Anwendung des Studienprodukts Die Probanden dürfen die Lutschtabletten nicht kauen. Sie dürfen die Lutschtabletten schlucken.

9.6 Plaque-pH-Bewertung Am Ende jeder Phase wird die Acidogenität der Plaque mit der MicroTouch-Technik nach einer vorherigen Saccharose-Provokation bewertet. Bei jeder Probe werden Bewertungen des pH-Werts durchgeführt. Der pH-Wert wird fünffach zu 6 verschiedenen Zeitpunkten gemessen: zu Beginn (vor der Saccharosespülung) und 2, 5, 10, 20 und 30 min nach einer 1-minütigen Spülung mit 10 ml 10 % Saccharose unter Verwendung aktiver Bewegungen.

Es wird eine Iridium-Touch-Mikroelektrode (Durchmesser 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Florida, USA, mit einer Referenzelektrode aus porösem Glas (MERE 1, World Precision Instruments) verwendet. In einer KCl-Lösung (3 M) wird eine Salzbrücke zwischen der Referenzelektrode und einem Finger des Probanden erzeugt. Vor jeder pH-Bewertung wird die Elektrode mit Pufferlösung bei pH 7,00 und 4,00 kalibriert.