Efeito anticárie do probiótico Lactobacillus Brevis CD2 (Lb CD2).

2 LÓGICA DO ESTUDO Em um estudo anterior, foi testada a eficácia de Lb CD2 em covariáveis ​​intermediárias relacionadas ao desenvolvimento de cárie. Assim, optou-se por planejar um novo estudo com escolares da mesma área. O objetivo do presente protocolo de pesquisa foi avaliar o efeito anticariogênico dos probióticos utilizados diariamente, sobre o desenvolvimento de cárie em crianças. A hipótese nula foi de que o probiótico Lb CD2 não modificaria o risco de cárie das crianças. Além disso, o estudo será realizado para investigar a acidogenicidade da placa in situ após o consumo regular de um produto probiótico em comparação com um grupo controle.

3 OBJETIVOS DO ESTUDO

Objetivo primário:

O consumo regular de probiótico levará a um incremento de cárie significativamente menor em comparação com um placebo. Higiene bucal regular é permitida.

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Critérios alvo:

Eficácia: Menor incremento de cárie Segurança: Determinação de efeitos colaterais

Segurança: Determinação dos efeitos colaterais Efeitos colaterais, especialmente alterações da mucosa oral após o consumo do produto.

4 DESENHO DO ESTUDO 4.1 Desenho do estudo e centro do estudo Estudo longitudinal duplo-cego, controlado por placebo, em 440 sujeitos de teste. O estudo será realizado em um único centro no Departamento de Cirurgia, Microcirurgia e Ciências Médicas - Faculdade de Odontologia da Universidade de Sassari, Viale San Pietro 43/C Sassari.

A duração prevista do estudo é janeiro-fevereiro de 2013 a março de 2015 (com relatório final).

Proposta de início do recrutamento de cobaias janeiro-fevereiro de 2013.

5 COBJEITOS DE TESTE 440 cobaias de teste de crianças saudáveis ​​do sexo masculino ou feminino. Estes serão recrutados nas escolas primárias de Sassari.

5.1 Tratamento concomitante não permitido Em geral, outros produtos contendo probióticos, exceto laticínios.

5.2 Medicação concomitante permitida Todas as outras medicações são permitidas. No entanto, para os 30 dias anteriores à fase de triagem e durante todo o período do estudo, eles devem ser inseridos no formulário de relato de caso na seção "Medicação concomitante".

5.3 Critérios para término prematuro do estudo em sujeitos de teste individuais.

As razões que podem ser dadas para a retirada prematura de um sujeito de teste individual são:

• Retração de consentimento
• Se a participação continuada no estudo não for mais aceitável ou justificada por motivos médicos importantes, conforme avaliado pelo investigador
• Ocorrência de efeitos colaterais intoleráveis ​​(SE) conforme avaliado pelo investigador
• Violação do protocolo, por decisão do investigador, com fundamentação por escrito
• Não comparecimento do sujeito do teste
• Falta de adesão e motivação por parte do sujeito do teste (por exemplo, não usar o porta-amostra intra-oral por mais de seis horas por dia) Os participantes do teste que se retirarem do estudo prematuramente devem ser submetidos ao exame final.

Os motivos da retirada do estudo e a data devem ser registrados pelo investigador no formulário de relato de caso.

5.4 Critérios para descontinuar todo o estudo Em particular, o reconhecimento de novas informações e/ou riscos que obriguem a reavaliar a relação benefício/risco. No caso de resultado negativo, o LKP pode descontinuar o estudo em discussão com o investigador principal e o patrocinador.

Se houver recrutamento inadequado ou objeções sérias persistentes ou recorrentes ao protocolo do estudo, o patrocinador, de acordo com o LKP e após discussão com o investigador principal, pode decidir encerrar o estudo prematuramente por motivos administrativos.

Se o término prematuro do estudo for inevitável, medidas devem ser decididas e introduzidas para proteger os interesses e o bem-estar dos sujeitos do teste, tanto quanto possível.

6 PRODUTOS DO ESTUDO 6.1 Produtos de teste e placebo Os produtos de teste para o estudo são fabricados e fornecidos pela CD Investments srl, Itália. As pastilhas placebo se parecerão com as pastilhas ativas com o mesmo sabor e peso de 1 grama contendo apenas os ingredientes listados acima na mesma proporção que as pastilhas ativas, mas sem L. brevis CD2. Não será possível diferenciar os dois produtos.

O centro de estudo e o monitor devem ser informados sobre qualquer deficiência nos produtos do estudo (os produtos serão mantidos a 4° graus durante o estudo).

6.2 Creme dental e escovas de dente padrão Pasta de dente padrão contendo flúor: creme dental contendo monofluorfosfato (800/1000 ppm)

6.3 Embalagem e rotulagem 6.3.1 Produto de teste Antes do uso, o investigador armazenará as amostras de teste a 4° graus de temperatura. Para cada sujeito, será entregue um recipiente da medicação do estudo para o período do estudo, bem como um recipiente de reposição em cada caso. As amostras de teste foram produzidas e fornecidas pela CD investiments (Itália) e codificadas como 'verde' ou 'vermelho'. O código foi lacrado por um monitor independente e não foi quebrado até que a análise estatística fosse finalizada.

6.4 Determinação da adesão 6.4.1 Medicação teste Os recipientes serão pesados ​​antes e depois do período do estudo.

6.4.2 Pasta de dente padrão Os sujeitos do teste devem usar a pasta de dente padrão durante todo o estudo. Será feita uma verificação da conformidade, questionando o sujeito do teste.

6.5 Documentação sobre o paradeiro das amostras de teste O investigador registrará o paradeiro das amostras de teste em um inventário. As notas de entrega e avisos de devolução serão assinados pelo investigador.

7 DOSAGEM Na fase de tratamento os sujeitos usarão 2 losangos ao dia.

8 CRONOGRAMA DE ESTUDO E MÉTODOS DE TESTE 8.1 Cronograma de estudo 8.1.1 Cronograma planejado Antes do início do estudo, dados demográficos, étnicos e prognósticos serão coletados (fase de triagem). Será feita uma história médica, com documentação de tratamento anterior e concomitante e um exame clínico da cavidade oral (estado dentário, mucosa oral) será realizado pelo investigador. Se o sujeito do teste atender a todos os critérios de inclusão sem cumprir nenhum dos critérios de exclusão, ele/ela será inscrito no ensaio clínico e receberá um número de identificação do sujeito do teste.

Todos os sujeitos do teste receberão um diário do paciente na fase de triagem. Porta-amostras individuais agora serão preparados para cada sujeito de teste.

Período 1: (180 dias) consumo do produto do estudo, higiene oral regular No início do período, o escore ICDAS será registrado com pH da placa e estreptococos mutans salivares. Todos os sujeitos são instruídos sobre higiene bucal e sobre o consumo do produto em estudo. No 90º dia, o pH da placa e estreptococos mutans salivares também serão registrados novamente.

Período 2: (90 dias) a higiene bucal regular pH da placa e estreptococos mutans salivares serão registrados novamente. Período 3: (180 dias) consumo do produto do estudo, higiene oral regular No início do período, o escore ICDAS será registrado com pH da placa e estreptococos mutans salivares. Todos os sujeitos são instruídos sobre higiene bucal e sobre o consumo do produto em estudo. No 90º dia, o pH da placa e estreptococos mutans salivares também serão registrados novamente.

Período 4: (90 dias) o pH da placa de higiene oral regular e estreptococos mutans salivares serão registrados novamente. Período 5: (180 dias) consumo do produto do estudo, higiene oral regular No início do período, a pontuação ICDAS será registrada com pH da placa e estreptococos mutans salivares. Todos os sujeitos são instruídos sobre higiene bucal e sobre o consumo do produto em estudo. No 90º dia, o pH da placa e estreptococos mutans salivares também serão registrados novamente.

9 MATERIAIS E MÉTODOS 9.1 Parâmetros clínicos Índice ICDAS (International Caries Detection and Assessment System), Mucosa oral

9.2 Investigação dos fatores salivares Os fatores salivares pH e taxa de fluxo serão medidos durante a fase de triagem em três dias, sempre pela manhã. Será calculada a média das três medições.

O kit de teste Dentobuff® (Vivadent, Liechtenstein) será usado.

9.3 Técnica de escovação dos dentes Os sujeitos do teste devem limpar os dentes pelo menos duas vezes ao dia com pasta de dente contendo flúor e uma escova de dente macia. Durante esse tempo, uma gaze fresca e úmida (embebida em água) será colocada no recipiente todos os dias para fornecer um ambiente úmido para os aparelhos. As amostras não devem secar.

As próprias amostras de esmalte também são cuidadosamente limpas com a escova de dentes macia, exceto no último dia de cada período.

9.4 Randomização Utilizando um programa de computador (Excel 2010 para Mac OsX), a randomização será realizada de forma individual.

9.5 Aplicação do produto do estudo Os sujeitos não podem mastigar as pastilhas. Eles podem engolir as pastilhas.

9.6 Avaliação do pH da placa Ao final de cada fase, a acidogenicidade da placa será avaliada usando a técnica MicroTouch após um desafio prévio com sacarose. As avaliações de pH serão realizadas em cada corpo de prova. O pH será medido em quintuplicata em 6 pontos de tempo diferentes: na linha de base (antes do enxague com sacarose) e 2, 5, 10, 20 e 30 min após um enxágue de 1 min com 10 ml de sacarose 10%, usando movimentos ativos.

Será utilizado um microeletrodo de toque de irídio (diâmetro 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Flórida, EUA, com eletrodo de referência de vidro poroso (MERE 1, World Precision Instruments). Uma ponte salina será criada em uma solução de KCl (3 M) entre o eletrodo de referência e um dedo do sujeito. Antes de cada sessão de avaliação de pH, o eletrodo será calibrado com solução tampão em pH 7,00 e 4,00.