Antikazový účinek probiotického Lactobacillus Brevis CD2 (Lb CD2).

2 ODŮVODNĚNÍ STUDIE V předchozí studii byla testována účinnost Lb CD2 na přechodné kovariáty související s rozvojem zubního kazu. Bylo tedy rozhodnuto naplánovat novou studii pro školáky ze stejné oblasti. Cílem předkládaného výzkumného protokolu bylo zhodnotit antikariogenní účinek denně užívaných probiotik na vznik zubního kazu u dětí. Nulová hypotéza byla, že probiotikum Lb CD2 nezmění riziko zubního kazu u dětí. Kromě toho bude studie provedena za účelem zjištění acidogenicity plaku in situ po pravidelné konzumaci probiotického produktu ve srovnání s kontrolní skupinou.

3 STUDIJNÍ CÍLE

Primární cíl:

Pravidelná konzumace probiotik povede k výrazně nižšímu přírůstku kazu ve srovnání s placebem. Je povolena pravidelná ústní hygiena.

.

Cílová kritéria:

Účinnost: Nižší přírůstek kazu Bezpečnost: Stanovení vedlejších účinků

Bezpečnost: Stanovení nežádoucích účinků Nežádoucí účinky, jako jsou zejména změny ústní sliznice po konzumaci přípravku.

4 NÁVRH STUDIE 4.1 Návrh studie a centrum studie Dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná, longitudinální studie na 440 testovaných subjektech. Studie bude prováděna v jediném centru na Klinice chirurgie, mikrochirurgie a lékařských věd – School of Dentistry University of Sassari, Viale San Pietro 43/C Sassari.

Plánovaná délka studia je leden-únor 2013 až březen 2015 (se závěrečnou zprávou).

Navrhovaný začátek náboru testovaných osob leden-únor 2013.

5 TESTOVANÝCH SUBJEKTŮ 440 zdravých testovacích subjektů mužského nebo ženského pohlaví. Ti se budou rekrutovat ze základních škol v Sassari.

5.1 Souběžná léčba není povolena Obecně jiné produkty obsahující probiotika, kromě mléčných výrobků.

5.2 Povolené souběžné podávání Všechny ostatní léky jsou povoleny. Po dobu 30 dnů před fází screeningu a během celého období studie však musí být uvedeny ve formuláři kazuistiky v části „Souběžná medikace“.

5.3 Kritéria pro předčasné ukončení studia u jednotlivých testovaných osob.

Důvody, které mohou být uvedeny pro předčasné odstoupení jednotlivého testovaného subjektu, jsou:

• Odvolání souhlasu
• Pokud další účast ve studii již není přijatelná nebo odůvodněná z důležitých lékařských důvodů, jak bylo hodnoceno zkoušejícím
• Výskyt netolerovatelných vedlejších účinků (SE) podle hodnocení zkoušejícího
• Porušení protokolu dle rozhodnutí vyšetřovatele s písemným odůvodněním
• Neúčast testovaného
• Nedostatek shody a motivace ze strany testovaného (např. nenosit intraorální držák vzorku déle než šest hodin denně) Testované subjekty, které předčasně odstoupí ze studie, by měly být podrobeny závěrečné zkoušce.

Důvody odstoupení ze studie a datum musí zkoušející zaznamenat do formuláře kazuistiky.

5.4 Kritéria pro přerušení celé studie Zejména rozpoznání nových informací a/nebo rizik, které vyžadují přehodnocení poměru přínos/riziko. V případě negativního výsledku může LKP po diskusi s hlavním zkoušejícím a zadavatelem studii přerušit.

V případě nedostatečného náboru nebo přetrvávajících či opakujících se závažných námitek proti protokolu studie může zadavatel po dohodě s LKP a po projednání s hlavním zkoušejícím rozhodnout o předčasném ukončení studie z administrativních důvodů.

Pokud je předčasné ukončení studie nevyhnutelné, musí být rozhodnuto a zavedena opatření k ochraně zájmů a blaha testovaných osob, jak je to jen možné.

6 PRODUKTY STUDIE 6.1 Testované produkty a placebo Testovací produkty pro studii vyrábí a poskytuje společnost CD Investments srl, Itálie. Pastilky s placebem budou vypadat jako aktivní pastilky se stejnou chutí a hmotností 1 gram obsahující pouze složky uvedené výše ve stejném poměru jako aktivní látka, ale bez L. brevis CD2. Tyto dva produkty nebude možné odlišit.

Studijní centrum a monitor musí být informováni o jakémkoli nedostatku ve studijních produktech (produkty budou během studie uchovávány při teplotě 4°).

6.2 Standardní zubní pasta a zubní kartáčky Standardní zubní pasta obsahující fluorid: zubní pasta obsahující monofluorofosfát (800/1000 ppm)

6.3 Balení a označování 6.3.1 Testovaný produkt Před použitím zkoušející uskladní testovací vzorky při teplotě 4 °C. Pro každého pacienta bude dodána jedna nádobka studovaného léku pro studijní období, stejně jako jedna náhradní nádobka v každém případě. Testovací vzorky byly vyrobeny a dodány společností CD investiments (Itálie) a byly kódovány buď jako „zelené“ nebo „červené“. Kód byl zapečetěn nezávislým monitorem a nebyl porušen, dokud nebyla dokončena statistická analýza.

6.4 Stanovení shody 6.4.1 Testovaná medikace Nádoby budou zváženy před a po období studie.

6.4.2 Standardní zubní pasta Testované subjekty musí během studie používat standardní zubní pastu. Kontrola shody bude provedena dotazováním testovaného subjektu.

6.5 Dokumentace o místě pobytu zkušebních vzorků Zkoušející zaznamená místo pobytu zkušebních vzorků v inventáři. Dodací listy a oznámení o vrácení podepíše vyšetřovatel.

7 DÁVKOVÁNÍ V léčebné fázi budou subjekty užívat 2 losangy denně.

8 HARMONOGRAM STUDIA A METODY ZKOUŠEK 8.1 Harmonogram studia 8.1.1 Plánovaný harmonogram Před zahájením studie budou shromážděna demografická, etnická a prognostická data (fáze screeningu). Bude odebrána anamnéza s dokumentací o předchozí a souběžné léčbě a zkoušející provede klinické vyšetření dutiny ústní (stav chrupu, sliznice dutiny ústní). Pokud testovaný subjekt splní všechna zařazovací kritéria, aniž by splnil některé z vyřazovacích kritérií, bude zařazen do klinického hodnocení a bude mu přiděleno identifikační číslo testovaného subjektu.

Všechny testované osoby obdrží ve fázi screeningu deník pacienta. Pro každý testovaný subjekt budou nyní připraveny jednotlivé držáky vzorků.

Období 1: (180 dní) konzumace studovaného produktu, pravidelná ústní hygiena Na začátku období bude zaznamenáno skóre ICDAS s pH plaku a streptokoky slinných mutans. Všechny subjekty jsou poučeny o ústní hygieně a o konzumaci studovaného produktu. 90. den bude opět zaznamenáno pH plaku a streptokoky mutans ve slinách.

Období 2: (90 dní) bude znovu zaznamenávána pravidelná hodnota pH plaku a streptokoky slinných mutans. Období 3: (180 dní) konzumace studovaného produktu, pravidelná ústní hygiena Na začátku období bude zaznamenáno skóre ICDAS s pH plaku a streptokoky slinných mutans. Všechny subjekty jsou poučeny o ústní hygieně a o konzumaci studovaného produktu. 90. den bude opět zaznamenáno pH plaku a streptokoky mutans ve slinách.

Období 4: (90 dní) bude znovu zaznamenávána pravidelná hodnota pH plaku a slinných mutans streptokoků. Období 5: (180 dní) konzumace studovaného produktu, pravidelná ústní hygiena Na začátku období bude zaznamenáno skóre ICDAS s pH plaku a streptokoky slinných mutans. Všechny subjekty jsou poučeny o ústní hygieně a o konzumaci studovaného produktu. 90. den bude opět zaznamenáno pH plaku a streptokoky mutans ve slinách.

9 MATERIÁLY A METODY 9.1 Klinické parametry Index ICDAS (International Caries Detection and Assessment System), ústní sliznice

9.2 Vyšetřování faktorů slin Faktory slin pH a rychlost průtoku budou měřeny během fáze screeningu po tři dny, vždy ráno. Vypočte se průměr ze tří měření.

Bude použita testovací souprava Dentobuff® (Vivadent, Lichtenštejnsko).

9.3 Technika čištění zubů Testované subjekty si musí čistit zuby minimálně dvakrát denně zubní pastou obsahující fluor a měkkým zubním kartáčkem. Během této doby bude do nádoby každý den vkládána čerstvá, vlhká gáza (namočená ve vodě), aby bylo zajištěno vlhké prostředí pro spotřebiče. Vzorky by se neměly nechat vyschnout.

Samotné vzorky skloviny se rovněž pečlivě čistí měkkým zubním kartáčkem kromě posledního dne každé menstruace.

9.4 Randomizace Pomocí počítačového programu (Excel 2010 pro Mac OsX) bude randomizace provedena individuálně.

9.5 Aplikace studijního produktu Subjektům není dovoleno žvýkat pastilky. Mohou polykat pastilky.

9.6 Hodnocení pH plaku Na konci každé fáze bude acidogenita plaku hodnocena pomocí techniky MicroTouch po předchozím testu sacharózou. U každého vzorku bude provedeno hodnocení pH. pH bude měřeno v pěti opakováních v 6 různých časových bodech: na základní linii (před opláchnutím sacharózou) a 2, 5, 10, 20 a 30 minut po 1 minutovém oplachu 10 ml 10% sacharózy za použití aktivních pohybů.

Použita bude iridiová dotyková mikroelektroda (průměr 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Florida, USA, s porézní skleněnou referenční elektrodou (MERE 1, World Precision Instruments). Mezi referenční elektrodou a prstem subjektu se vytvoří solný můstek v roztoku KCl (3 M). Před každým sezením hodnocení pH bude elektroda kalibrována pomocí roztoku pufru při pH 7,00 a 4,00.