益生菌短乳杆菌 CD2 (Lb CD2) 的防龋作用。

2 研究的基本原理 在之前的一项研究中，测试了 Lb CD2 对与龋齿发展相关的临时协变量的功效。 因此，决定计划对来自同一地区的学童进行一项新的研究。 本研究方案的目的是评估日常使用的益生菌对儿童龋齿发育的抗龋作用。 零假设是益生菌 Lb CD2 不会改变儿童的龋齿风险。 此外，将开展这项研究，以调查与对照组相比，定期食用益生菌产品后的原位菌斑产酸性。

3 学习目标

主要目标：

与安慰剂相比，经常食用益生菌可显着降低龋齿增加。 允许定期进行口腔卫生。

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目标标准：

功效：减少龋齿 安全性：确定副作用

安全性：副作用的测定 副作用，尤其是食用产品后口腔粘膜的变化。

4 研究设计 4.1 研究设计和研究中心 对 440 名受试者进行双盲、安慰剂对照、纵向研究。 该研究将在萨萨里大学牙科学院外科、显微外科和医学系的一个中心进行，Viale San Pietro 43/C Sassari。

研究的计划持续时间为 2013 年 1 月至 2 月至 2015 年 3 月（附最终报告）。

拟议于 2013 年 1 月至 2 月开始招募测试对象。

5 测试对象 440 名健康男性或女性儿童测试对象。 这些将从萨萨里的小学招募。

5.1 不允许合并治疗 一般情况下，其他含益生菌的产品，乳制品除外。

5.2 允许的合并用药 所有其他药物都是允许的。 但是，对于筛选阶段之前的 30 天和整个研究期间，它们必须在“合并用药”部分下的病例报告表中输入。

5.3 提前终止个体受试者研究的标准。

个别测试对象过早退出的原因可能是：

• 撤回同意
• 如果继续参与研究不再是可接受的或基于研究者评估的重要医学理由是合理的
• 由研究者评估的无法忍受的副作用 (SE) 的发生
• 违反方案，根据研究者的决定，并以书面形式给出理由
• 受试者缺席
• 测试对象缺乏依从性和积极性（例如 每天佩戴口腔内标本架不超过六小时）过早退出研究的受试者应进行期末检查。

退出研究的原因和日期必须由研究者记录在病例报告表中。

5.4 中止整个研究的标准 特别是对需要重新评估收益/风险比的新信息和/或风险的认识。 如果结果为阴性，LKP 可能会在与主要研究者和申办者的讨论中终止研究。

如果招募不足或持续或反复严重反对试验方案，申办者经 LKP 同意并与主要研究者讨论后，可以出于行政原因决定提前终止研究。

如果不可避免地提前终止研究，则必须决定并采取措施以尽可能保护受试者的利益和福祉。

6 研究产品 6.1 测试产品和安慰剂 用于研究的测试产品由意大利 CD Investments srl 制造和提供。 安慰剂锭剂看起来像活性锭剂，味道相同，重量为 1 克，仅含有与活性成分相同比例的上述成分，但不含短乳杆菌 CD2。 无法区分这两种产品。

必须告知研究中心和监测员研究产品的任何缺陷（研究期间产品将保持在 4° 度）。

6.2 标准牙膏和牙刷 标准含氟牙膏：含单氟磷酸盐的牙膏（800/1000 ppm）

6.3 包装和标签 6.3.1 试验品 试验品在使用前，研究者将试验样品置于4℃的温度下保存。 对于每个受试者，将交付一个用于研究期间的研究药物容器，以及每个案例中的一个替换容器。 测试样品由 CD investments（意大利）生产和供应，并编码为“绿色”或“红色”。 代码由独立监控器密封，直到统计分析完成后才被破解。

6.4 依从性判定 6.4.1 试验用药 研究期前后对容器称重。

6.4.2 标准牙膏 测试对象必须在整个研究过程中使用标准牙膏。 将通过询问测试对象来检查是否符合要求。

6.5 关于测试样品下落的文件 研究者将在清单中记录测试样品的下落。 送货单和退货通知将由调查员签署。

7 剂量 在治疗阶段，受试者将每天服用 2 粒糖。

8 研究计划和测试方法 8.1 研究计划 8.1.1 计划时间表 在研究开始之前，将收集人口统计学、种族和预后数据（筛选阶段）。 将记录病史，记录先前和伴随的治疗，并由研究者进行口腔临床检查（牙齿状况、口腔粘膜）。 如果受试者满足所有纳入标准但不满足任何排除标准，他/她将被纳入临床试验并获得受试者识别号。

所有测试对象将在筛选阶段收到患者日记。 现在将为每个测试对象准备单独的样品架。

阶段 1：（180 天）服用研究产品，定期口腔卫生 在阶段开始时，将记录 ICDAS 评分以及菌斑 pH 值和唾液变形链球菌。 所有受试者都被告知口腔卫生和研究产品的消费。 在第 90 天，还将再次记录菌斑 pH 值和唾液变形链球菌。

第 2 期：（90 天）定期口腔卫生牙菌斑 pH 值和唾液变形链球菌将再次记录。 第 3 期：（180 天）研究产品的消耗，定期口腔卫生 在该期开始时，ICDAS 评分将记录菌斑 pH 值和唾液变形链球菌。 所有受试者都被告知口腔卫生和研究产品的消费。 在第 90 天，还将再次记录菌斑 pH 值和唾液变形链球菌。

第 4 期：（90 天）定期口腔卫生牙菌斑 pH 值和唾液变形链球菌将再次记录。 第 5 期：（180 天）研究产品的消耗，定期口腔卫生 在该期开始时，将记录 ICDAS 评分以及菌斑 pH 值和唾液变形链球菌。 所有受试者都被告知口腔卫生和研究产品的消费。 在第 90 天，还将再次记录菌斑 pH 值和唾液变形链球菌。

9 材料和方法 9.1 临床参数 ICDAS（国际龋齿检测和评估系统）指数，口腔粘膜

9.2 唾液因子调查唾液因子pH值和流速将在三天的筛选阶段测量，每次在早上。 将计算三个测量值的平均值。

将使用 Dentobuff® 测试套件（Vivadent，列支敦士登）。

9.3 刷牙技术要求受试者每天至少用含氟牙膏和软毛牙刷清洁牙齿两次。 在此期间，每天将新鲜的湿纱布（浸泡在水中）放入容器中，以便为器具提供湿润的环境。 不应让样本变干。

除每个周期的最后一天外，珐琅标本本身也同样用软牙刷仔细清洁。

9.4 随机化 使用计算机程序（Excel 2010 for Mac OsX），随机化将在个体基础上进行。

9.5 研究产品的应用 受试者不得咀嚼锭剂。 他们被允许吞下锭剂。

9.6 斑块 pH 评估 在每个阶段结束时，将在先前的蔗糖挑战后使用 MicroTouch 技术评估斑块酸原性。 将对每个样本进行 pH 值评估。 将在 6 个不同的时间点一式五份地测量 pH 值：基线（蔗糖冲洗前）和使用 10 毫升 10% 蔗糖冲洗 1 分钟后的 2、5、10、20 和 30 分钟，使用主动运动。

将使用铱触摸微电极（直径 0.1 mm；Beetrode NMPH-1，World Precision Instruments，Sarasota，Fla.，USA，以及多孔玻璃参比电极（MERE 1，World Precision Instruments）。 将在参考电极和受试者手指之间的 KCl (3 M) 溶液中创建盐桥。 在每次 pH 评估之前，将使用 pH 7.00 和 4.00 的缓冲溶液校准电极。