Anticari Effetto del probiotico Lactobacillus Brevis CD2 (Lb CD2).

2 RAZIONALE DELLO STUDIO In uno studio precedente è stata testata l'efficacia di Lb CD2 sulle covariate ad interim correlate allo sviluppo della carie. Così, si è deciso di progettare un nuovo studio sugli scolari della stessa zona. Lo scopo del presente protocollo di ricerca è stato quello di valutare l'effetto anticariogenico dei probiotici quotidianamente utilizzati, sullo sviluppo della carie nei bambini. L'ipotesi nulla era che il probiotico Lb CD2 non modificasse il rischio di carie dei bambini. Inoltre, lo studio sarà condotto per indagare l'acidogenicità della placca in situ a seguito del consumo regolare di un prodotto probiotico rispetto a un gruppo di controllo.

3 OBIETTIVI DI STUDIO

Obiettivo primario:

Il consumo regolare di probiotici porterà a un incremento della carie significativamente inferiore rispetto a un placebo. È consentita una regolare igiene orale.

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Criteri di destinazione:

Efficacia: minore incremento della carie Sicurezza: determinazione degli effetti collaterali

Sicurezza: Determinazione degli effetti collaterali Effetti collaterali quali in particolare alterazioni della mucosa orale dopo il consumo del prodotto.

4 DISEGNO DELLO STUDIO 4.1 Disegno dello studio e centro dello studio Studio longitudinale in doppio cieco, controllato con placebo, su 440 soggetti sottoposti a test. Lo studio sarà svolto presso un unico centro presso il Dipartimento di Chirurgia, Microchirurgia e Scienze Mediche - Scuola di Odontoiatria dell'Università degli Studi di Sassari, Viale San Pietro 43/C Sassari.

La durata prevista dello studio va da gennaio-febbraio 2013 a marzo 2015 (con relazione finale).

Inizio proposto del reclutamento dei soggetti di prova gennaio-febbraio 2013.

5 SOGGETTI DEL TEST 440 soggetti maschi o femmine sani del test. Questi saranno reclutati dalle scuole primarie di Sassari.

5.1 Trattamento concomitante non consentito In generale, altri prodotti contenenti probiotici, ad eccezione dei latticini.

5.2 Farmaci concomitanti consentiti Tutti gli altri farmaci sono consentiti. Tuttavia, per i 30 giorni precedenti la fase di screening e durante l'intero periodo di studio, devono essere inseriti nel modulo di segnalazione alla sezione "Farmaci concomitanti".

5.3 Criteri per l'interruzione anticipata dello studio nei singoli soggetti del test.

I motivi che possono essere addotti per il ritiro anticipato di un singolo soggetto di prova sono:

• Revoca del consenso
• Se la continuazione della partecipazione allo studio non è più accettabile o giustificata per importanti motivi medici valutati dallo sperimentatore
• Presenza di effetti collaterali intollerabili (SE) valutati dallo sperimentatore
• Violazione del protocollo, secondo la decisione dell'investigatore, con motivazioni fornite per iscritto
• Mancata presenza del soggetto del test
• Mancanza di conformità e motivazione da parte del soggetto del test (ad es. non indossare il portacampione intraorale per più di sei ore al giorno) I soggetti del test che si ritirano prematuramente dallo studio devono essere sottoposti all'esame finale.

I motivi del ritiro dallo studio e la data devono essere registrati dallo sperimentatore nel modulo di segnalazione del caso.

5.4 Criteri per l'interruzione dell'intero studio In particolare, il riconoscimento di nuove informazioni e/o rischi che richiedono una rivalutazione del rapporto beneficio/rischio. In caso di esito negativo, l'LKP può interrompere lo studio in discussione con il ricercatore principale e lo sponsor.

In caso di reclutamento inadeguato o di obiezioni serie persistenti o ricorrenti al protocollo dello studio, lo sponsor, in accordo con l'LKP e previa discussione con il ricercatore principale, può decidere di interrompere anticipatamente lo studio per motivi amministrativi.

Qualora l'interruzione anticipata dello studio sia inevitabile, devono essere decise e introdotte misure per tutelare il più possibile gli interessi e il benessere dei soggetti del test.

6 PRODOTTI DELLO STUDIO 6.1 Prodotti del test e placebo I prodotti del test per lo studio sono fabbricati e forniti da CD Investments srl, Italia. Le pastiglie placebo avranno l'aspetto delle pastiglie attive con lo stesso gusto e peso di 1 grammo contenenti solo gli ingredienti sopra elencati nella stessa proporzione dell'attivo ma senza L. brevis CD2. Non sarà possibile differenziare i due prodotti.

Il centro dello studio e il monitor devono essere informati di qualsiasi carenza nei prodotti dello studio (i prodotti saranno mantenuti a 4° gradi durante lo studio).

6.2 Dentifrici e spazzolini standard Dentifrici standard contenenti fluoro: dentifrici contenenti monofluorofosfato (800/1000 ppm)

6.3 Imballaggio ed etichettatura 6.3.1 Prodotto in esame Prima dell'uso, lo sperimentatore conserverà i campioni in esame a una temperatura di 4° gradi. Per ogni soggetto verrà consegnato un contenitore di farmaco in studio per il periodo di studio, nonché un contenitore sostitutivo in ciascun caso. I campioni di prova sono stati prodotti e forniti da CD investment (Italia) e codificati come 'verde' o 'rosso'. Il codice è stato sigillato da un monitor indipendente e non è stato violato fino a quando l'analisi statistica non è stata finalizzata.

6.4 Determinazione della conformità 6.4.1 Farmaco di prova I contenitori saranno pesati prima e dopo il periodo di studio.

6.4.2 Dentifricio standard I soggetti del test devono utilizzare il dentifricio standard per tutto lo studio. Verrà effettuato un controllo sulla conformità interrogando il soggetto del test.

6.5 Documentazione sull'ubicazione dei campioni di prova L'investigatore registrerà l'ubicazione dei campioni di prova in un inventario. Le bolle di consegna e gli avvisi di reso saranno firmati dall'investigatore.

7 DOSAGGIO Nella fase di trattamento i soggetti utilizzeranno 2 pastiglie al giorno.

8 PROGRAMMA DEGLI STUDI E MODALITÀ DELLE PROVE 8.1 Programma degli studi 8.1.1 Programma pianificato Prima dell'inizio dello studio, verranno raccolti dati demografici, etnici e prognostici (fase di screening). Verrà raccolta un'anamnesi, con documentazione del trattamento precedente e concomitante e lo sperimentatore eseguirà un esame clinico del cavo orale (stato dentale, mucosa orale). Se il soggetto del test soddisfa tutti i criteri di inclusione senza soddisfare nessuno dei criteri di esclusione, sarà iscritto alla sperimentazione clinica e riceverà un numero di identificazione del soggetto del test.

Tutti i soggetti del test riceveranno un diario del paziente nella fase di screening. Saranno ora preparati portacampioni individuali per ciascun soggetto del test.

Periodo 1: (180 giorni) consumo del prodotto in studio, igiene orale regolare All'inizio del periodo Il punteggio ICDAS sarà registrato con pH della placca e streptococchi mutans salivari. Tutti i soggetti sono istruiti sull'igiene orale e sul consumo del prodotto in studio. Al 90° giorno verranno registrati nuovamente anche il pH della placca e gli streptococchi mutans salivari.

Periodo 2: (90 giorni) regolare igiene orale pH della placca e streptococchi mutans salivari saranno nuovamente registrati. Periodo 3: (180 giorni) consumo del prodotto in studio, igiene orale regolare All'inizio del periodo Il punteggio ICDAS sarà registrato con pH della placca e streptococchi mutans salivari. Tutti i soggetti sono istruiti sull'igiene orale e sul consumo del prodotto in studio. Al 90° giorno verranno registrati nuovamente anche il pH della placca e gli streptococchi mutans salivari.

Periodo 4: (90 giorni) regolare igiene orale pH della placca e streptococchi mutans salivari saranno nuovamente registrati. Periodo 5: (180 giorni) consumo del prodotto in studio, igiene orale regolare All'inizio del periodo Il punteggio ICDAS sarà registrato con pH della placca e streptococchi mutans salivari. Tutti i soggetti sono istruiti sull'igiene orale e sul consumo del prodotto in studio. Al 90° giorno verranno registrati nuovamente anche il pH della placca e gli streptococchi mutans salivari.

9 MATERIALI E METODI 9.1 Parametri clinici Indice ICDAS (International Caries Detection and Assessment System), Mucosa orale

9.2 Indagine sui fattori salivari Fattori salivari Il pH e la portata saranno misurati durante la fase di screening per tre giorni, ogni volta al mattino. Verrà calcolata la media delle tre misurazioni.

Verrà utilizzato il kit di test Dentobuff® (Vivadent, Liechtenstein).

9.3 Tecnica di spazzolamento dei denti Ai soggetti del test viene richiesto di lavarsi i denti almeno due volte al giorno con il dentifricio contenente fluoro e uno spazzolino morbido. Durante questo periodo, una garza fresca e umida (imbevuta d'acqua) verrà posta ogni giorno nel contenitore per fornire un'atmosfera umida per gli apparecchi. I campioni non dovrebbero essere lasciati asciugare.

Anche gli stessi campioni di smalto vengono accuratamente puliti con lo spazzolino morbido tranne l'ultimo giorno di ogni ciclo.

9.4 Randomizzazione Utilizzando un programma per computer (Excel 2010 per Mac OsX), la randomizzazione sarà effettuata su base individuale.

9.5 Applicazione del prodotto in studio Ai soggetti non è consentito masticare le pastiglie. Sono autorizzati a ingoiare le losanghe.

9.6 Valutazione del pH della placca Al termine di ciascuna fase verrà valutata l'acidogenicità della placca mediante la tecnica MicroTouch dopo un precedente challenge con saccarosio. Le valutazioni del pH saranno effettuate su ogni campione. Il pH sarà misurato in quintuplicato in 6 diversi punti temporali: al basale (prima del risciacquo con saccarosio) e 2, 5, 10, 20 e 30 minuti dopo un risciacquo di 1 minuto con 10 ml di saccarosio al 10%, utilizzando movimenti attivi.

Verrà utilizzato un microelettrodo iridium touch (diametro 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Florida, USA, con un elettrodo di riferimento in vetro poroso (MERE 1, World Precision Instruments). Verrà creato un ponte salino in una soluzione di KCl (3 M) tra l'elettrodo di riferimento e un dito del soggetto. Prima di ogni sessione di valutazione del pH, l'elettrodo verrà calibrato utilizzando una soluzione tampone a pH 7.00 e 4.00.