Évaluation de la thérapie photodynamique antimicrobienne en complément du traitement parodontal chez les fumeurs

MATÉRIELS ET MÉTHODES

Consentement à la recherche - Tous les patients recevront des informations détaillées sur l'expérience (objectifs, avantages, risques et inconforts) conformément à un formulaire de consentement à cette recherche. Toutes les procédures seront soumises à l'approbation du comité d'éthique (CEP) de l'école dentaire Ribeirão Preto (FORP), Université de São Paulo (USP).

Calcul de la taille de l'échantillon - La taille de l'échantillon a été déterminée pour fournir une puissance de 80 % pour reconnaître une différence significative de 1 mm (d) entre les groupes avec un intervalle de confiance de 95 % (a = 0,05) et un écart type (s) de 1,0 mm. Considérant les changements dans le niveau moyen d'attachement clinique (CAL) comme variable de résultat primaire et [Za (1,96) + Zb (0,84)]2 = 7,84. Le calcul de la taille était basé sur la formule suivante : n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2. Par conséquent, un total de 16 patients étaient nécessaires. Cependant, le nombre de patients inclus dans cette étude était de 20, considérant que certains patients pouvaient être perdus au cours du suivi.

Conception expérimentale - Les sujets sélectionnés recevront des instructions spécifiques d'hygiène bucco-dentaire et un détartrage supragingival sur toutes les dents, sept jours avant le début des interventions. Le type d'étude sera la bouche divisée avec deux paires de dents uniracinaires controlatérales avec des sites parodontaux proximaux présentant une profondeur de sondage ≥ 5 mm pour l'évaluation clinique, microbiologique et immunologique. Une table de nombres aléatoires sera générée par un programme informatique, chacune des paires dentaires sélectionnées recevra les traitements suivants : SRP ou SRP + plusieurs épisodes aPDT. Les paramètres cliniques, immunologiques et microbiologiques seront évalués au départ (pré-intervention) et après la fin du traitement parodontal non chirurgical. Les examens cliniques parodontaux (pré et post-intervention) seront effectués par un seul examinateur formé et calibré, qui ne connait pas les groupes expérimentaux de cette étude. Les examinateurs sont également en aveugle pour étudier les analyses immunologiques et microbiologiques. Les procédures SRP et l'utilisation du protocole aPDT doivent être effectuées par un autre opérateur formé à ces fins.

Une empreinte à l'alginate sera réalisée chez chaque patient pour obtenir les modèles des arcades dentaires et développement d'une plaque de guidage sur acétate avec rainures de référence pour standardiser l'insertion et l'inclinaison de la sonde parodontale informatisée (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, Floride, États-Unis). L'indice de plaque visible de chaque patient sera évalué de manière dichotomique (O'Leary et al., 1972) et déterminé par le pourcentage de surfaces dentaires avec plaque. Dans 6 sites de chaque dent (mésio-buccale, buccale, disto-buccale, mésio-linguale, linguale et disto-linguale) seront évalués les paramètres cliniques parodontaux : Profondeur de sondage (mm) qui sera mesurée du bord gingival au fond de la poche ; Niveau d'attache clinique relatif (mm) qui sera mesuré du guide de plaque occlusale au fond de la poche ; Saignement au sondage, évalué de manière dichotomique (Ainamo, Bay, 1976), la présence de saignement est considérée comme positive lorsqu'elle est présentée dans les 20 secondes suivant l'insertion de la sonde pour mesurer la profondeur de sondage. Ces paramètres cliniques et l'indice de plaque de chaque patient seront enregistrés au départ (période pré-intervention) ainsi que +30 et +90 jours après la thérapie parodontale non chirurgicale.

Étalonnage de l'examinateur - L'indice Kappa sera utilisé pour évaluer l'étalonnage de l'examinateur pour la collecte des paramètres parodontaux cliniques afin de mesurer l'accord intra-examinateur. Selon l'Organisation mondiale de la santé (OMS) pour les critères de diagnostic, la concordance acceptable de l'indice Kappa doit être supérieure ou égale à 0,85 (OMS, 1997). Ce niveau d'accord sera utilisé pour l'étalonnage de l'examinateur dans ce projet. Dix patients seront sélectionnés, au moins deux paires de dents controlatérales uni-racines avec une profondeur de sonde ≥5 mm dans les sites proximaux. Chaque patient est scanné deux fois à l'aide d'une sonde parodontale informatisée (Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, USA) avec un intervalle de 48 heures entre le premier et le deuxième examen afin d'obtenir la fiabilité intra-examinateur, qui sera mesurée en déterminant le Kappa indice.

Analyse immunologique - Au départ et aux jours +14, +30 et +90, après un traitement parodontal non chirurgical, des échantillons de GCF seront prélevés sur des dents sélectionnées. La plaque supragingivale ces éléments seront enlevés et les sites seront délicatement séchés avec des jets d'air puis isolés à l'aide de rouleaux de coton stériles. Les échantillons de GCF sont obtenus à partir des sites mésiaux et distaux à l'aide de bandes Periopaper (Oralflow Inc., Amityville, NY, USA). Les bandes seront soigneusement placées sur le bord du sillon gingival pendant 30 secondes. La quantité de fluide gingival absorbé sera déterminée par un compteur électronique de masse humide Periotron (Oralflow Inc., Amityville, NY). Les barrettes sont placées dans des flacons eppendorf stériles du type qui seront conservés à une température de 80C pour une quantification ultérieure des cytokines (pg/ml) TNF-α, IL-1β et IL-10. Les niveaux de cytokines sont déterminés à l'aide d'un kit 3-plex Millipore (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) 100TM et du système Luminex (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, USA).

Analyse salivaire de la cotinine - La cotinine est un métabolite de la nicotine qui permet de surveiller l'exposition des patients à la nicotine (McGuire et al., 1989). Les niveaux de cotinine seront identifiés au départ par analyse immunoenzymatique (ELISA) (Salimetrics Inc., State College, PA, USA) à l'aide d'un kit d'analyse quantitative de la cotinine dans la salive conformément aux instructions du fabricant.

Analyse microbiologique - Au départ et aux jours +30 et +90, après avoir effectué un traitement parodontal non chirurgical, des échantillons de plaque sous-gingivale des dents sélectionnées seront prélevés au niveau des poches parodontales proximales (mésiales et distales). Les comptages de 40 espèces sous-gingivales seront déterminés dans chaque échantillon en utilisant la méthode d'hybridation ADN-ADN en damier (Birth et al., 2008). Pour la collecte de la plaque sous-gingivale, les sites seront isolés avec des rouleaux de coton stériles et séchés avec des jets d'air. La plaque supragingivale sera retirée avec précaution à l'aide d'une curette stérile. Par la suite, une autre curette stérile est utilisée pour prélever la plaque sous-gingivale, en partant de la partie la plus profonde de la poche jusqu'à la région coronale. Les échantillons seront transportés dans des flacons Eppendorf stériles et traités dans le laboratoire de diagnostic moléculaire dentaire de l'École de médecine dentaire de Ribeirão Preto-USP

Traitement parodontal non chirurgical - 7 jours avant le traitement parodontal non chirurgical, tous les patients subiront un examen radiographique périapical complet de toute la bouche. Ils seront regroupés dans un programme d'hygiène bucco-dentaire (OHP) en fonction des besoins spécifiques. Dans ce programme, les patients recevront des instructions pour une auto-plaque efficace, y compris des informations sur la technique de Bass (Bass, 1954) et le nettoyage interproximal avec du fil dentaire et des brossettes interdentaires. Ils seront également encouragés à se brosser la langue une fois par jour et recevront un seul dentifrice à utiliser pendant toute la période expérimentale (Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brésil). Après l'achèvement de ce programme d'hygiène bucco-dentaire, les patients seront soumis à une évaluation des paramètres parodontaux cliniques décrits précédemment, et seront également collectés des échantillons de plaque sous-gingivale et de GCF sur des sites sélectionnés (baseline - période de pré-intervention). Peu de temps après, vous recevrez un détartrage supragingival et un polissage avec des ventouses coronaires en caoutchouc sur toutes les dents de la cavité buccale.

La thérapie parodontale non chirurgicale est initiée 7 jours après l'exécution de l'OHP et le détartrage supragingival initial. Le traitement sera effectué par une personne qualifiée en parodontologie, à un intervalle de 24 heures par détartrage (supragingival et sous-gingival) et surfaçage radiculaire de toutes les dents atteintes de maladie parodontale, à la main (Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) et des outils à ultrasons. L'instrumentation se déroulera quadrant par quadrant, jusqu'à un nettoyage adéquat de la zone et un surfaçage radiculaire, qui seront vérifiés avec l'aide d'un explorateur. Les personnes recevront un nettoyage professionnel toutes les deux semaines jusqu'à trois mois après la fin du traitement parodontal non chirurgical. Dans le cadre du contrôle et de l'évaluation bimensuels, la coopération des patients à l'étude sera surveillée, en vérifiant l'état de l'hygiène bucco-dentaire.

Analyse statistique - La normalité et l'homoscédasticité des données seront vérifiées. Les comparaisons inter- et intra-groupes dans différents intervalles de temps seront réalisées grâce à des tests paramétriques ou non paramétriques adéquats. Pour toutes les analyses statistiques, un niveau de signification de 5 % sera utilisé. Tous les calculs sont effectués à l'aide du logiciel SPSS (SPSS, Chicago IL, EUA).