抗菌光动力疗法作为吸烟者牙周治疗辅助手段的评价

材料和方法

同意搜索——根据本研究中的同意书，所有患者都将收到有关实验的详细信息（目标、益处、风险和不适）。 所有程序都将得到圣保罗大学 (USP) 里贝朗普雷托牙科学院 (FORP) 伦理委员会 (CEP) 的批准。

样本量计算 - 样本量被确定为提供 80% 的功效以识别具有 95% 置信区间 (a = 0.05) 和标准偏差 (s) 1.0 mm 的组之间 1 mm (d) 的显着差异。 考虑将平均临床依恋水平 (CAL) 的变化作为主要结果变量和 [Za (1.96) + Zb (0.84)]2 = 7.84。 尺寸计算基于以下公式：n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2。 因此，总共需要 16 名患者。 但考虑到部分患者可能在随访期间失访，本研究纳入的患者人数为 20 人。

实验设计 - 选定的受试者将在干预开始前 7 天接受特定的口腔卫生指导和所有牙齿的龈上刮治。 研究类型将是两对对侧单根牙齿的裂口，近端牙周部位的探诊深度≥ 5 毫米，用于临床、微生物学和免疫学评估。 计算机程序将生成一个随机数字表，每对选定的牙科接受以下治疗：SRP 或 SRP + 几次 aPDT 发作。 将在基线（干预前）和非手术牙周治疗完成后评估临床、免疫学和微生物学参数。 牙周临床检查（干预前和干预后）将由一名经过培训和校准的检查员进行，该检查员不知道本研究的实验组。 审查员也对研究免疫学和微生物学分析视而不见。 SRP 程序和 aPDT 协议的使用应由其他经过培训的操作员执行，用于这些目的。

将对每位患者进行藻酸盐印模，以获得牙弓模型，并开发带有参考凹槽的醋酸盐导板，以标准化计算机化牙周探针的插入和倾斜度（Florida Probe System，Florida Probe Corporation，Gainesville，佛罗里达州，美国）。 每位患者的可见菌斑指数将采用二分法进行评估（O'Leary 等人，1972 年），并根据牙齿表面有菌斑的百分比来确定。 在每颗牙齿的 6 个位置（近颊、颊、远颊、近中-舌、舌和远-舌）将评估临床牙周参数：将从牙龈边缘到袋底部测量的探测深度（mm）；从咬合板导板到袋底部测量的相对临床附着水平（毫米）；探诊出血，分为二分法 (Ainamo, Bay, 1976)，在探头插入测量探诊深度后 20 秒内出现出血被认为是阳性。 这些临床参数和每位患者的牙菌斑指数将在基线（干预前时期）以及非手术牙周治疗后 +30 和 +90 天时记录。

检查者校准 - Kappa 指数将用于评估收集临床牙周参数的检查者校准，以衡量检查者内部的一致性。 根据世界卫生组织（WHO）的诊断标准，可接受的指数Kappa协议必须大于或等于0.85（WHO，1997）。 该协议级别将用于校准本项目中的审查员。 将选择 10 名患者，至少两对对侧单根牙，在近端位置的探测深度≥5 mm。 使用计算机化牙周探针（Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, USA）对每位患者进行两次扫描，第一次和第二次检查之间间隔 48 小时，以获得检查者内部的可靠性，这将通过确定 Kappa 值来衡量指数。

免疫学分析——在基线和+14、+30 和+90 天，非手术牙周治疗后将从选定的牙齿收集 GCF 样本。 牙龈上的牙菌斑将被去除，这些部位将用空气喷射器轻轻吹干，随后使用无菌棉卷隔离。 GCF 样品是使用 Periopaper 条带（Oralflow Inc.，Amityville，NY，USA）从近中和远中部位​​获得的。 将条带小心地放置在龈沟边缘 30 秒。 吸收的牙龈液量将通过 Periotron 湿重电子计（Oralflow Inc., Amityville, NY）测定。 将条带置于无菌 eppendorf 小瓶中，该小瓶将在 80°C 的温度下储存，用于以后对细胞因子 (pg/ml) TNF-α、IL-1β 和 IL-10 进行定量。 使用 3-plex 试剂盒 Millipore（Millipore Corporation，Billerica，MA，USA）100TM 和 Luminex 系统（Luminex，MiraiBio，Alameda，CA，USA）测定细胞因子水平。

唾液可替宁分析——可替宁是尼古丁的代谢产物，可以监测患者对尼古丁的暴露情况（McGuire 等人，1989 年）。 根据制造商的说明，使用用于唾液中可替宁定量分析的试剂盒，通过免疫酶分析 (ELISA)（Salimetrics Inc., State College, PA, USA）确定基线的可替宁水平。

微生物学分析——在基线和 +30 天和 +90 天，在进行非手术牙周治疗后，将在近端牙周袋（近中和远中）收集所选牙齿的龈下菌斑样本。 使用棋盘 DNA-DNA 杂交方法（Birth 等人，2008 年），将确定每个样本中 40 种龈下物种的计数。 对于龈下菌斑的收集，将用无菌棉辊隔离部位并用空气喷射器干燥。 使用无菌刮匙小心去除龈上菌斑。 随后，使用另一个无菌刮匙收集龈下菌斑，从袋的最深部分开始到冠状区域。 样品将在无菌 Eppendorf 小瓶中运输，并在 Ribeirão Preto-USP 牙科学院的牙科分子诊断实验室进行处理

非手术牙周治疗 - 在非手术牙周治疗前 7 天，所有患者将接受完整的全口根尖周 X 光检查。 他们将根据具体需要分组到口腔卫生计划 (OHP) 中。 在此计划中，患者将收到有效自我牙菌斑的说明，包括有关 Bass 技术（Bass，1954 年）的信息以及使用牙线和牙间刷进行邻间清洁的信息。 还将鼓励他们每天刷一次舌头，并在整个实验期间使用一种牙膏（Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brasil)。 完成此口腔卫生计划后，将对患者进行先前描述的临床牙周参数评估，并将在选定部位（基线 - 干预前期间）收集龈下菌斑和 GCF 样本。 不久之后，将在口腔中的所有牙齿中使用冠状橡胶杯进行龈上刮治和抛光。

非手术牙周治疗在执行 OHP 和初始龈上刮治后 7 天开始。 治疗将由牙周病学技术人员每隔 24 小时进行一次，用手对所有患有牙周病的牙齿进行刮治（龈上和龈下）和根面平整（Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA）和超声波工具。 仪器将一个象限一个象限地进行，直到对该区域和根面平整进行充分清洁，这将在探险家的帮助下进行检查。 在非手术牙周治疗结束后的三个月内，个人将每两周接受一次专业清洁。 在每两周一次的控制和评估中，将监测患者对研究的合作情况，以验证口腔卫生状况。

统计分析 - 将检查数据的正态性和同方差性。 不同时间间隔的组间和组内比较将通过充分的参数或非参数测试来实现。 对于所有统计分析，将使用 5% 的显着性水平。 所有计算均使用 SPSS 软件（SPSS、Chicago IL、EUA）进行。