Utvärdering av antimikrobiell fotodynamisk terapi som ett komplement till parodontitbehandling hos rökare

MATERIAL OCH METODER

Samtycke till sökning - Alla patienter kommer att få detaljerad information om experimentet (mål, fördelar, risker och obehag) i enlighet med ett samtyckesformulär i denna forskning. Alla procedurer kommer att vara föremål för godkännande av den etiska kommittén (CEP) vid Ribeirão Preto Dental School (FORP), University of São Paulo (USP).

Beräkning av provstorlek - Provstorleken bestämdes för att ge 80 % kraft för att känna igen en signifikant skillnad på 1 mm (d) mellan grupper med ett 95 % konfidensintervall (a = 0,05) och standardavvikelse (s) på 1,0 mm. Med tanke på förändringarna i genomsnittlig klinisk anknytningsnivå (CAL) som den primära utfallsvariabeln och [Za (1,96) + Zb (0,84)]2 = 7,84. Storleksberäkningen baserades på följande formel: n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2. Därför krävdes totalt 16 patienter. Antalet patienter som ingick i denna studie var dock 20, med tanke på att vissa patienter kan gå förlorade under uppföljningen.

Experimentell design -De utvalda försökspersonerna kommer att få specifik munhygieninstruktion och supragingival fjällning i alla tänder, sju dagar innan interventionsstart. Studietypen kommer att vara delad mun med två par kontralaterala unirotänder med proximala parodontala ställen som uppvisar sonderingsdjup ≥ 5 mm för den kliniska, mikrobiologiska och immunologiska bedömningen. En slumptalstabell kommer att genereras av ett datorprogram, vart och ett av de utvalda tandparen får följande behandlingar: SRP eller SRP + flera aPDT-episoder. De kliniska, immunologiska och mikrobiologiska parametrarna kommer att utvärderas vid baslinjen (pre-intervention) och efter avslutad icke-kirurgisk periodontal terapi. De parodontala kliniska undersökningarna (före och efter intervention) kommer att utföras av en enda utbildad och kalibrerad examinator, som inte kände till experimentgrupperna i denna studie. Granskare är också blinda för att studera de immunologiska och mikrobiologiska analyserna. SRP-procedurer och användning av aPDT-protokollet bör utföras av annan utbildad operatör för dessa ändamål.

Ett avtryck med alginat kommer att göras hos varje patient för att erhålla modellerna av tandbågarna och utveckling av en styrplatta på acetat med referensspår för att standardisera införandet och lutningen av datoriserad periodontal sond (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, USA). Det synliga plackindexet för varje patient kommer att bedömas dikotomt (O'Leary et al., 1972) och bestäms av procentandelen tandytor med plack. På 6 ställen av varje tand (mesio-buckal, buckal, distobuckal, mesiolingual, lingual och disto-lingual) kommer kliniska parodontala parametrar att bedömas: Sonddjup (mm) som kommer att mätas från gingivalmarginalen till fickans botten; relativ Clinical Attachment Level (mm) som kommer att mätas från ocklusalplattans styrning till fickans botten; Blödning vid sondering, bedömd dikotomt (Ainamo, Bay, 1976), förekomsten av blödning anses vara positiv när den presenteras inom 20s efter sondens insättning för mätning av sonderingsdjupet. Dessa kliniska parametrar och varje patients plackindex kommer att registreras vid baslinjen (pre-intervention period) såväl som +30 och +90 dagar efter den icke-kirurgiska parodontala behandlingen.

Granskarens kalibrering - Kappa-indexet kommer att användas för att utvärdera examinatorns kalibrering för insamling av kliniska parodontala parametrar för att mäta överensstämmelsen mellan examinatorn. Enligt Världshälsoorganisationen (WHO) för diagnostiska kriterier måste acceptabelt index Kappa-avtal vara större eller lika med 0,85 (WHO, 1997). Denna överensstämmelsenivå kommer att användas för kalibrering av examinator i detta projekt. Tio patienter kommer att väljas, minst två par kontralaterala tänder uni-roots med sonddjup ≥5 mm i de proximala ställena. Varje patient skannas två gånger med hjälp av datoriserad periodontal sond (Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, USA) med ett 48-timmarsintervall mellan den första och andra undersökningen för att erhålla intra-undersökarens tillförlitlighet, som kommer att mätas genom att bestämma kappa index.

Immunologisk analys - Vid baslinjen och på dagarna +14, +30 och +90, efter icke-kirurgisk periodontal terapi kommer GCF-prover från utvalda tänder att samlas in. Den supragingivala plack dessa element kommer att tas bort och platserna kommer att torkas försiktigt med luftstrålar och därefter isoleras med sterila bomullsrullar. GCF-proverna erhålls från de mesiala och distala platserna till användning av Periopaper-remsor (Oralflow Inc., Amityville, NY, USA). Remsorna placeras försiktigt på kanten av gingival sulcus i 30 sekunder. Mängden absorberad tandköttsvätska kommer att bestämmas av en elektronisk mätare av våtmassa Periotron (Oralflow Inc., Amityville, NY). Remsorna placeras i sterila eppendorfflaskor av den typ som kommer att förvaras vid en temperatur av 80C för senare kvantifiering av cytokiner (pg/ml) TNF-α, IL-1β och IL-10. Cytokinnivåer bestäms med användning av ett 3-plex kit Millipore (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) 100TM och Luminex-systemet (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, USA).

Salivkotininanalys - Kotinin är en metabolit av nikotin som gör det möjligt att övervaka patientens exponering för nikotin (McGuire et al., 1989). Kotininnivåer kommer att identifieras vid baslinjen genom immunoenzymatisk analys (ELISA) (Salimetrics Inc., State College, PA, USA) med hjälp av ett kit för kvantitativ analys av kotinin i saliv enligt tillverkarens instruktioner.

Mikrobiologisk analys - Vid baslinjen och på dagarna +30 och +90, efter att ha utfört icke-kirurgisk periodontal terapi, kommer subgingivala plackprover av de utvalda tänderna att samlas in vid de proximala parodontala fickorna (mesiala och distala). Antalet 40 subgingivala arter kommer att bestämmas i varje prov med hjälp av metoden schackbräde-DNA-DNA-hybridisering (Birth et al., 2008). För insamling av subgingival plack kommer platserna att isoleras med sterila bomullsrullar och torkas med luftstrålar. Den supragingivala placken kommer att avlägsnas försiktigt med en steril kyrett. Därefter används en annan steril curette för att samla in subgingival plack, med början från den djupaste delen av fickan till koronalregionen. Proverna kommer att transporteras i sterila Eppendorf-flaskor och bearbetas i Dental Molecular Diagnostics Laboratory vid School of Dentistry i Ribeirão Preto-USP

Icke-kirurgisk periodontal terapi - 7 dagar före den icke-kirurgiska parodontalterapin kommer alla patienter att göra en fullständig periapikal röntgenundersökning av hela munnen. De kommer att grupperas i ett munhygienprogram (OHP) enligt de specifika behoven. I detta program kommer patienter att få instruktioner för effektiv självplack, inklusive information om basteknik (Bass, 1954) och interproximal rengöring med tandtråd och interdentalborstar. De kommer också att uppmuntras att borsta tungan en gång om dagen och få ett enda tandkräm som ska användas under hela försöksperioden (Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brasil). Efter slutförandet av detta munhygienprogram kommer patienter att utvärderas av tidigare beskrivna kliniska parodontala parametrar och kommer även att samlas in subgingivalt plack och GCF-prover på utvalda ställen (baslinje - pre-intervention period). Strax efter kommer att få supragingival fjällning och polering med en koronar gummikoppar i alla tänder i munhålan.

Icke-kirurgisk parodontal terapi initieras 7 dagar efter utförandet av OHP och initial supragingival skalning. Behandlingen kommer att göras av en fackman inom parodontologi, med ett intervall på 24 timmar genom skalning (supragingival och subgingival) och rothyvling av alla tänder med tandlossning, med hjälp av hand (Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) och ultraljudsverktyg. Instrumenteringen kommer att hållas kvadrant för kvadrant, tills adekvat rengöring av området och rotplaning, vilket kommer att kontrolleras med hjälp av en utforskare. Individer kommer att få professionell rengöring varannan vecka upp till tre månader efter avslutad icke-kirurgisk periodontal terapi. I tvåveckorskontroll och utvärdering kommer patientens samarbete mot studien att övervakas, vilket verifierar tillståndet för munhygien.

Statistisk analys - Normalitet och homoskedasticitet för data kommer att kontrolleras. Jämförelser mellan grupper och inom grupper i olika tidsintervall kommer att uppnås genom adekvata parametriska eller icke-parametriska tester. För all statistisk analys kommer en 5% signifikansnivå att användas. Alla beräkningar utförs med SPSS-mjukvara (SPSS, Chicago IL, EUA).