Evaluering af antimikrobiel fotodynamisk terapi som et supplement til periodontal behandling hos rygere

MATERIALER OG METODER

Samtykke til søgning - Alle patienter vil modtage detaljeret information om eksperimentet (mål, fordele, risici og gener) i overensstemmelse med en samtykkeerklæring i denne forskning. Alle procedurer vil være underlagt godkendelse af den etiske komité (CEP) fra Ribeirão Preto Dental School (FORP), University of São Paulo (USP).

Prøvestørrelsesberegning - Prøvestørrelsen blev bestemt til at give 80 % effekt til at genkende en signifikant forskel på 1 mm (d) mellem grupper med et 95 % konfidensinterval (a = 0,05) og standardafvigelse (s) på 1,0 mm. I betragtning af ændringerne i det gennemsnitlige kliniske tilknytningsniveau (CAL) som den primære udfaldsvariabel og [Za (1,96) + Zb (0,84)]2 = 7,84. Størrelsesberegning var baseret på følgende formel: n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2. Derfor var der behov for i alt 16 patienter. Imidlertid var antallet af patienter indskrevet i denne undersøgelse 20, i betragtning af at nogle patienter kunne gå tabt under opfølgningen.

Eksperimentelt design -De udvalgte forsøgspersoner vil modtage specifik mundhygiejneinstruktion og supragingival skalering i alle tænder, syv dage før start af interventioner. Undersøgelsestypen vil være delt mund med to par kontralaterale uni-rodtænder med proksimale parodontale steder, der præsenterer sonderingsdybde ≥ 5 mm til den kliniske, mikrobiologiske og immunologiske vurdering. En tabel med tilfældige tal vil blive genereret af et computerprogram, hvert af de udvalgte tandlægepar modtager følgende behandlinger: SRP eller SRP + flere aPDT episoder. De kliniske, immunologiske og mikrobiologiske parametre vil blive evalueret ved baseline (præ-intervention) og efter afslutning af ikke-kirurgisk parodontal terapi. De periodontale kliniske undersøgelser (før og efter intervention) vil blive udført af en enkelt uddannet og kalibreret eksaminator, som ukendte forsøgsgrupperne i denne undersøgelse. Eksaminatorer er også blinde for at studere de immunologiske og mikrobiologiske analyser. SRP-procedurer og brug af aPDT-protokollen bør udføres af en anden trænet operatør til disse formål.

Et aftryk med alginat vil blive udført i hver patient for at opnå modellerne af tandbuerne og udvikling af en styreplade på acetat med referenceriller for at standardisere indsættelsen og hældningen af ​​computerstyret parodontalsonde (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, USA). Det synlige plakindeks for hver patient vil blive vurderet dikotomt (O'Leary et al., 1972) og bestemt af procentdelen af ​​tandoverflader med plak. På 6 steder af hver tand (mesio-bukkal, bukkal, distobukkal, mesio-lingual, lingual og disto-lingual) vil kliniske parodontale parametre blive vurderet: Probing Dybde (mm), der vil blive målt fra tandkødsranden til lommens bund; relativ klinisk tilknytningsniveau (mm), der vil blive målt fra okklusalpladestyret til lommens bund; Blødning ved sondering, vurderet dikotomisk (Ainamo, Bay, 1976), tilstedeværelsen af ​​blødning anses for positiv, når den præsenteres inden for 20 sekunder efter sondeindsættelsen til måling af sonderingsdybde. Disse kliniske parametre og hver patients plaque-indeks vil blive registreret ved baseline (præ-interventionsperiode) samt +30 og +90 dage efter den ikke-kirurgiske parodontale behandling.

Undersøgerkalibrering - Kappa-indekset vil blive brugt til at evaluere undersøgerkalibreringen til indsamling af kliniske parodontale parametre for at måle intra-eksaminatorens overensstemmelse. Ifølge Verdenssundhedsorganisationen (WHO) for diagnostiske kriterier skal acceptabelt indeks Kappa-overenskomst være større eller lig med 0,85 (WHO, 1997). Dette aftaleniveau vil blive brugt til kalibrering af eksaminator i dette projekt. Ti patienter vil blive udvalgt, mindst to par kontralaterale tænder uni-rods med probedybde ≥5 mm i de proksimale steder. Hver patient scannes to gange ved hjælp af computerstyret parodontalsonde (Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, USA) med et 48-timers interval mellem første og anden undersøgelse for at opnå intra-eksaminator-pålideligheden, som vil blive målt ved at bestemme Kappa indeks.

Immunologisk analyse - Ved baseline og på dag +14, +30 og +90, efter ikke-kirurgisk parodontal terapi vil der blive indsamlet GCF-prøver fra udvalgte tænder. Den supragingivale plak disse elementer vil blive fjernet, og stederne vil blive forsigtigt tørret med luftstråler og efterfølgende isoleret ved hjælp af sterile bomuldsruller. GCF-prøverne opnås fra de mesiale og distale steder til brug af Periopaper-strimler (Oralflow Inc., Amityville, NY, USA). Strimlerne placeres forsigtigt på kanten af ​​tandkødssulcus i 30 sekunder. Mængden af ​​absorberet tandkødsvæske vil blive bestemt af en elektronisk måler af våd masse Periotron (Oralflow Inc., Amityville, NY). Stripsene anbringes i sterile eppendorf-hætteglas af typen, som vil blive opbevaret ved en temperatur på 80C til senere kvantificering af cytokiner (pg/ml) TNF-α, IL-1β og IL-10. Cytokinniveauer bestemmes under anvendelse af et 3-plex kit Millipore (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) 100TM og Luminex-systemet (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, USA).

Spyt-kotininanalyse - Cotinin er en metabolit af nikotin, som gør det muligt at overvåge patientens eksponering for nikotin (McGuire et al., 1989). Cotininniveauer vil blive identificeret ved baseline ved immunoenzymatisk analyse (ELISA) (Salimetrics Inc., State College, PA, USA) ved brug af et kit til kvantitativ analyse af cotinin i spyt i henhold til producentens instruktioner.

Mikrobiologisk analyse - Ved baseline og på dagene +30 og +90, efter udførelse af ikke-kirurgisk parodontal terapi, vil subgingivale plakprøver af de udvalgte tænder blive indsamlet ved de proksimale parodontale lommer (mesiale og distale). Antallet af 40 subgingival arter vil blive bestemt i hver prøve ved hjælp af metoden skakbræt DNA-DNA hybridisering (Birth et al., 2008). Til opsamling af subgingival plak vil stederne blive isoleret med sterile bomuldsruller og tørret med luftstråler. Den supragingivale plak fjernes omhyggeligt med en steril curette. Efterfølgende bruges en anden steril curette til at indsamle subgingival plak, startende fra den dybeste del af lommen til koronalregionen. Prøverne vil blive transporteret i sterile Eppendorf-hætteglas og behandlet i Dental Molecular Diagnostics Laboratory ved School of Dentistry i Ribeirão Preto-USP

Ikke-kirurgisk parodontal terapi - 7 dage før den ikke-kirurgiske parodontale terapi vil alle patienter have en komplet periapisk røntgenundersøgelse af hele munden. De vil blive grupperet i et mundhygiejneprogram (OHP) i henhold til de specifikke behov. I dette program vil patienter modtage instruktioner om effektiv selvplak, herunder information om basteknik (Bass, 1954) og interproksimal rengøring med tandtråd og interdentale børster. De vil også blive opfordret til at børste tungen en gang om dagen og modtage et enkelt tandplejemiddel, der skal bruges i hele forsøgsperioden (Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brasilien). Efter afslutningen af ​​dette mundhygiejneprogram vil patienterne blive underkastet evaluering af tidligere beskrevne kliniske parodontale parametre, og de vil også blive indsamlet subgingival plak og GCF-prøver på udvalgte steder (baseline - præ-interventionsperiode). Kort efter vil modtage supragingival skalering og polering med en koronar gummikopper i alle tænder i mundhulen.

Ikke-kirurgisk parodontal terapi påbegyndes 7 dage efter udførelsen af ​​OHP og initial supragingival skalering. Behandlingen vil blive foretaget af en fagmand i parodontologi med et interval på 24 timer ved skalering (supragingival og subgingival) og rodplaning af alle tænder med paradentose ved hjælp af hånd (Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) og ultralydsværktøjer. Instrumenteringen vil blive holdt kvadrant for kvadrant, indtil tilstrækkelig rengøring af området og rodplaning, hvilket vil blive kontrolleret med hjælp fra en opdagelsesrejsende. Enkeltpersoner vil modtage professionel rengøring hver anden uge op til tre måneder efter afslutningen af ​​ikke-kirurgisk parodontal terapi. I 14-dages kontrol og evaluering vil patientsamarbejdet i forbindelse med undersøgelsen blive overvåget, hvilket verificerer tilstanden af ​​mundhygiejne.

Statistisk analyse - Normalitet og homoskedasticitet af data vil blive kontrolleret. Inter- og intra-gruppe sammenligninger i forskellige tidsintervaller vil blive opnået gennem passende parametriske eller ikke-parametriske tests. For alle statistiske analyser vil der bruges et 5% signifikansniveau. Alle beregninger udføres ved hjælp af SPSS-software (SPSS, Chicago IL, EUA).