喫煙者の歯周治療の補助としての抗菌光力学療法の評価

材料および方法

検索への同意 - この研究では、すべての患者は同意書に従って、実験に関する詳細な情報（目的、利点、リスク、不快感）を受け取ります。 すべての手順は、サンパウロ大学 (USP) のリベイラン プレト歯学部 (FORP) の倫理委員会 (CEP) の承認を条件とします。

サンプル サイズの計算 - サンプル サイズは、95% 信頼区間 (a = 0.05) および 1.0 mm の標準偏差 (s) でグループ間の 1 mm (d) の有意差を認識するための 80% の検出力を提供するように決定されました。 平均臨床愛着レベル (CAL) の変化を主要結果変数として考慮し、[Za (1.96) + Zb (0.84)]2 = 7.84 とします。 サイズの計算は次の式に基づいて行われました: n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2。 したがって、合計 16 人の患者が必要でした。 ただし、一部の患者は追跡調査中に失われる可能性があることを考慮して、この研究に登録された患者の数は20人でした。

実験計画 - 選択された被験者は、介入開始の 7 日前に、特定の口腔衛生指導とすべての歯の歯肉縁上のスケーリングを受けます。 研究タイプは、臨床的、微生物学的、免疫学的評価のために5mm以上の深さを示す近位歯周部位を備えた2対の対側単根歯を備えた分割口です。 コンピュータ プログラムによって乱数テーブルが生成され、選択された歯科ペアのそれぞれが次の治療を受けます: SRP または SRP + いくつかの aPDT エピソード。 臨床的、免疫学的および微生物学的パラメータは、ベースライン（介入前）および非外科的歯周治療の完了後に評価されます。 歯周病の臨床検査（介入前および介入後）は、この研究の実験グループを知らない、訓練を受け校正された 1 人の検査官によって実行されます。 検査官は免疫学的および微生物学的分析を研究することもできません。 SRP 手順と aPDT プロトコルの使用は、これらの目的のために訓練を受けた他のオペレーターによって実行される必要があります。

アルギン酸塩による印象は、歯列弓のモデルを取得するために各患者で実行され、コンピュータ化された歯周プローブの挿入と傾斜を標準化するための基準溝を備えたアセテート製のガイド プレートの開発が行われます（フロリダ プローブ システム、フロリダ プローブ コーポレーション、ゲインズビル、米国フロリダ州）。 各患者の目に見える歯垢指数は二分法で評価され(O'Leary et al., 1972)、歯垢のある歯の表面の割合によって決定されます。 各歯の 6 つの部位 (近心頬側、頬側、遠心頬側、近心舌側、舌側、遠心舌側) で、臨床歯周パラメーターが評価されます。咬合プレートガイドからポケット底部まで測定される相対臨床アタッチメントレベル (mm)。プロービング時の出血は二分法で評価され（Ainamo、Bay、1976）、プロービング深さを測定するためにプローブ挿入後 20 秒以内に出血の存在が認められた場合、陽性と見なされます。 これらの臨床パラメーターと各患者のプラーク指数は、ベースライン (介入前期間) と、非外科的歯周治療の +30 日後および +90 日後に記録されます。

検査者キャリブレーション - 検査者間の合意を測定するために、臨床歯周パラメータを収集するための検査者キャリブレーションを評価するために、カッパ指数が使用されます。 世界保健機関 (WHO) の診断基準によれば、許容可能な指標カッパ一致は 0.85 以上でなければなりません (WHO、1997)。 この一致レベルは、このプロジェクトの審査官の校正に使用されます。 少なくとも 2 対の対側歯が一根で、近位部位のプローブの深さが 5 mm 以上である 10 人の患者が選択されます。 各患者は、カッパ値を決定することによって測定される検査者内の信頼性を得るために、コンピュータ化された歯周プローブ（プローブ コーポレーション フロリダ、フロリダ州ゲインズビル、米国）を使用して 1 回目と 2 回目の検査の間に 48 時間の間隔で 2 回スキャンされます。索引。

免疫学的分析 - ベースラインおよび非外科的歯周治療後の +14、+30、および +90 日目に、選択した歯から GCF サンプルが収集されます。 歯肉縁上のプラークのこれらの要素が除去され、その部位がエアジェットで穏やかに乾燥され、その後滅菌綿ロールを使用して分離されます。 GCF サンプルは、Periopaper ストリップ (Oralflow Inc.、Amityville、NY、USA) を使用して近心部位と遠心部位から取得されます。 ストリップは歯肉溝の縁に 30 秒間注意深く置かれます。 吸収された歯肉液の量は、電子湿潤質量計ペリオトロン（ニューヨーク州アミティビルのオーラルフロー社）によって測定される。 ストリップを、後でサイトカイン（ｐｇ／ｍｌ）ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１０を定量するために８０℃の温度で保存するタイプの滅菌エッペンドルフバイアルに入れる。 サイトカインレベルは、3 重キット Millipore (Millipore Corporation、米国マサチューセッツ州ビレリカ) 100TM および Luminex システム (Luminex、MiraiBio、米国カリフォルニア州アラメダ) を使用して測定します。

唾液コチニン分析 - コチニンはニコチンの代謝産物であり、これにより患者のニコチン曝露をモニタリングすることができます (McGuire et al., 1989)。 コチニンレベルは、製造者の指示に従い、唾液中のコチニンの定量分析用キットを使用する免疫酵素分析（ELISA）（Salimetrics Inc.、ペンシルバニア州ステートカレッジ）によってベースラインで特定されます。

微生物学的分析 - 非外科的歯周治療を実施した後のベースラインおよび +30 日目および +90 日目に、選択した歯の歯肉縁下のプラーク サンプルが近位歯周ポケット (内側および遠位) で収集されます。 40 の歯肉縁下種の数は、チェッカーボード DNA-DNA ハイブリダイゼーション法 (Birth et al., 2008) を使用して各サンプルで決定されます。 歯肉縁下のプラークを収集するために、滅菌綿ローラーで部位を分離し、エアジェットで乾燥させます。 歯肉縁上のプラークは、滅菌キュレットを使用して注意深く除去されます。 続いて、別の滅菌キュレットを使用して、ポケットの最深部から冠状領域まで歯肉縁下のプラークを収集します。 サンプルは滅菌エッペンドルフバイアルに入れて輸送され、リベイラン・プレトUSP歯学部の歯科分子診断研究室で処理されます。

非外科的歯周治療 - 非外科的歯周治療の 7 日前に、すべての患者は口全体の完全な根尖周囲 X 線検査を受けます。 それらは、特定のニーズに応じて口腔衛生プログラム (OHP) にグループ化されます。 このプログラムでは、患者は、Bass テクニック (Bass, 1954) やデンタルフロスと歯間ブラシを使った歯間の清掃に関する情報を含む、効果的な自己歯垢の指導を受けます。 また、被験者には、1 日 1 回舌を磨き、実験期間中ずっと使用する 1 つの歯磨剤を受け取ることも奨励されます (Colgate Total、Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co.、サンベルナルド ド カンポ、SP、ブラジル）。 この口腔衛生プログラムの完了後、患者は前述の臨床歯周パラメータの評価を受け、選択された部位で歯肉縁下のプラークと GCF サンプルも収集されます (ベースライン - 介入前期間)。 その後すぐに、口腔内のすべての歯に歯肉縁上のスケーリングと冠動脈ラバーカップを使用した研磨が行われます。

非外科的歯周治療は、OHP および最初の歯肉縁上のスケーリングの実行から 7 日後に開始されます。 治療は、歯周病学の専門家が24時間間隔で、歯周病のあるすべての歯のスケーリング（歯肉縁上および歯肉縁下）とルートプレーニングを手作業で行います（Curetas Gracey、Hu-Friedy、シカゴ、イリノイ州、EUA）そして超音波ツール。 器具は、エリアの適切な清掃とルートプレーニングが完了するまで、象限ごとに保持され、探索者の助けを借りてチェックされます。 個人は、非外科的歯周治療終了後最長 3 か月まで、隔週で専門家によるクリーニングを受けます。 隔週の管理と評価では、研究に対する患者の協力が監視され、口腔衛生の状態が確認されます。

統計分析 - データの正規性と等分散性がチェックされます。 異なる時間間隔でのグループ間およびグループ内の比較は、適切なパラメトリックまたはノンパラメトリック テストを通じて達成されます。 すべての統計分析では、5% の有意水準が使用されます。 すべての計算は SPSS ソフトウェア (SPSS、イリノイ州シカゴ、EUA) を使用して実行されます。