Bewertung der antimikrobiellen photodynamischen Therapie als Ergänzung zur Parodontalbehandlung bei Rauchern

MATERIALEN UND METHODEN

Einwilligung zur Suche – Alle Patienten erhalten detaillierte Informationen zum Experiment (Ziele, Vorteile, Risiken und Unannehmlichkeiten) gemäß einem Einwilligungsformular in dieser Forschung. Alle Verfahren unterliegen der Genehmigung der Ethikkommission (CEP) der Ribeirão Preto Dental School (FORP) der Universität São Paulo (USP).

Berechnung der Stichprobengröße – Die Stichprobengröße wurde so ermittelt, dass sie eine Aussagekraft von 80 % liefert, um einen signifikanten Unterschied von 1 mm (d) zwischen Gruppen mit einem 95 %-Konfidenzintervall (a = 0,05) und einer Standardabweichung (s) von 1,0 mm zu erkennen. Unter Berücksichtigung der Veränderungen des mittleren klinischen Bindungsgrads (CAL) als primäre Ergebnisvariable und [Za (1,96) + Zb (0,84)]2 = 7,84. Die Größenberechnung basierte auf der folgenden Formel: n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2. Daher waren insgesamt 16 Patienten erforderlich. Die Zahl der in diese Studie aufgenommenen Patienten betrug jedoch 20, da einige Patienten während der Nachuntersuchung verloren gehen könnten.

Experimentelles Design – Die ausgewählten Probanden erhalten sieben Tage vor Beginn der Eingriffe eine spezifische Anleitung zur Mundhygiene und eine supragingivale Zahnsteinentfernung an allen Zähnen. Der Studientyp wird ein geteilter Mund mit zwei Paaren kontralateraler einwurzeliger Zähne mit proximalen parodontalen Stellen sein, die eine Sondierungstiefe von ≥ 5 mm für die klinische, mikrobiologische und immunologische Beurteilung aufweisen. Eine Zufallszahlentabelle wird von einem Computerprogramm generiert. Jedes der ausgewählten Zahnpaare erhält die folgenden Behandlungen: SRP oder SRP + mehrere aPDT-Episoden. Die klinischen, immunologischen und mikrobiologischen Parameter werden zu Studienbeginn (vor dem Eingriff) und nach Abschluss der nicht-chirurgischen Parodontaltherapie evaluiert. Die parodontalen klinischen Untersuchungen (vor und nach dem Eingriff) werden von einem einzigen geschulten und kalibrierten Prüfer durchgeführt, der die Versuchsgruppen dieser Studie nicht kennt. Die Prüfer sind außerdem blind für die Untersuchung der immunologischen und mikrobiologischen Analysen. SRP-Verfahren und die Verwendung des aPDT-Protokolls sollten von einem anderen für diese Zwecke geschulten Bediener durchgeführt werden.

Bei jedem Patienten wird ein Abdruck mit Alginat durchgeführt, um die Modelle der Zahnbögen zu erhalten, und es wird eine Führungsplatte auf Acetat mit Referenzrillen entwickelt, um das Einsetzen und die Neigung einer computergestützten parodontalen Sonde zu standardisieren (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, USA). Der sichtbare Plaque-Index jedes Patienten wird dichotom bewertet (O'Leary et al., 1972) und anhand des Prozentsatzes der Zahnoberflächen mit Plaque bestimmt. An 6 Stellen jedes Zahns (mesio-bukkal, bukkal, distobukkal, mesio-lingual, lingual und disto-lingual) werden klinische parodontale Parameter beurteilt: Sondierungstiefe (mm), die vom Zahnfleischrand bis zum Taschenboden gemessen wird; relatives klinisches Befestigungsniveau (mm), das von der okklusalen Plattenführung bis zum Taschenboden gemessen wird; Blutung bei Sondierung, dichotom bewertet (Ainamo, Bay, 1976). Das Vorliegen einer Blutung gilt als positiv, wenn sie innerhalb von 20 Sekunden nach dem Einführen der Sonde zur Messung der Sondierungstiefe vorliegt. Diese klinischen Parameter und der Plaque-Index jedes Patienten werden zu Studienbeginn (Zeitraum vor dem Eingriff) sowie +30 und +90 Tage nach der nicht-chirurgischen Parodontaltherapie erfasst.

Prüferkalibrierung – Der Kappa-Index wird zur Bewertung der Prüferkalibrierung für die Erfassung klinischer parodontaler Parameter verwendet, um die Übereinstimmung zwischen Prüfern zu messen. Nach Angaben der Weltgesundheitsorganisation (WHO) für diagnostische Kriterien muss die akzeptable Index-Kappa-Übereinstimmung größer oder gleich 0,85 sein (WHO, 1997). Dieses Übereinstimmungsniveau wird zur Kalibrierung des Prüfers in diesem Projekt verwendet. Zehn Patienten werden ausgewählt, mindestens zwei Paare kontralateraler Zähne mit einer Wurzel und einer Sondentiefe von ≥5 mm an den proximalen Stellen. Jeder Patient wird zweimal mit einer computergestützten parodontalen Sonde (Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, USA) gescannt, mit einem 48-Stunden-Intervall zwischen der ersten und zweiten Untersuchung, um die Intra-Untersucher-Zuverlässigkeit zu erhalten, die durch Bestimmung des Kappa gemessen wird Index.

Immunologische Analyse – Zu Studienbeginn und an den Tagen +14, +30 und +90 werden nach der nicht-chirurgischen Parodontaltherapie GCF-Proben von ausgewählten Zähnen entnommen. Die supragingivale Plaque dieser Elemente wird entfernt und die Stellen werden sanft mit Luftstrahlen getrocknet und anschließend mit sterilen Watterollen isoliert. Die GCF-Proben werden mesial und distal mithilfe von Periopaper-Streifen (Oralflow Inc., Amityville, NY, USA) entnommen. Die Streifen werden 30 Sekunden lang vorsichtig am Rand des Zahnfleischsulcus platziert. Die Menge der absorbierten Zahnfleischflüssigkeit wird mit einem elektronischen Messgerät für die Feuchtmasse Periotron (Oralflow Inc., Amityville, NY) bestimmt. Die Streifen werden in sterile Eppendorf-Fläschchen gegeben, die zur späteren Quantifizierung der Zytokine (pg/ml) TNF-α, IL-1β und IL-10 bei einer Temperatur von 80 °C gelagert werden. Die Zytokinspiegel werden mit einem 3-Plex-Kit Millipore (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) 100TM und dem Luminex-System (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, USA) bestimmt.

Speichel-Cotinin-Analyse – Cotinin ist ein Metabolit von Nikotin, der die Überwachung der Nikotinexposition des Patienten ermöglicht (McGuire et al., 1989). Der Cotininspiegel wird zu Studienbeginn durch immunenzymatische Analyse (ELISA) (Salimetrics Inc., State College, PA, USA) unter Verwendung eines Kits zur quantitativen Analyse von Cotinin im Speichel gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt.

Mikrobiologische Analyse – Zu Studienbeginn und an den Tagen +30 und +90 werden nach Durchführung einer nicht-chirurgischen Parodontaltherapie subgingivale Plaqueproben der ausgewählten Zähne an den proximalen Parodontaltaschen (mesial und distal) entnommen. Die Anzahl von 40 subgingivalen Arten wird in jeder Probe mithilfe der Methode der Schachbrett-DNA-DNA-Hybridisierung bestimmt (Birth et al., 2008). Zur Sammlung subgingivaler Plaque werden die Stellen mit sterilen Watterollen isoliert und mit Luftstrahlen getrocknet. Die supragingivale Plaque wird vorsichtig mit einer sterilen Kürette entfernt. Anschließend wird eine weitere sterile Kürette verwendet, um subgingivale Plaque zu sammeln, beginnend vom tiefsten Teil der Tasche bis zum koronalen Bereich. Die Proben werden in sterilen Eppendorf-Fläschchen transportiert und im Dental Molecular Diagnostics Laboratory der School of Dentistry of Ribeirão Preto-USP verarbeitet

Nicht-chirurgische Parodontaltherapie – 7 Tage vor der nicht-chirurgischen Parodontaltherapie werden alle Patienten einer vollständigen periapikalen Röntgenuntersuchung des gesamten Mundes unterzogen. Sie werden entsprechend den spezifischen Bedürfnissen in ein Mundhygieneprogramm (OHP) eingeteilt. In diesem Programm erhalten Patienten Anleitungen für eine effektive Selbstplaque-Behandlung, einschließlich Informationen zur Bass-Technik (Bass, 1954) und zur Interdentalreinigung mit Zahnseide und Interdentalbürsten. Sie werden außerdem dazu ermutigt, die Zunge einmal täglich zu putzen und erhalten ein einziges Zahnputzmittel, das während des gesamten Versuchszeitraums verwendet werden kann (Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda – Kolynos do Brasil – Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brasilien). Nach Abschluss dieses Mundhygieneprogramms werden die Patienten einer Bewertung der zuvor beschriebenen klinischen parodontalen Parameter unterzogen und außerdem werden an ausgewählten Stellen subgingivale Plaque- und GCF-Proben entnommen (Basislinie – Zeitraum vor der Intervention). Bald darauf erfolgt eine supragingivale Zahnsteinentfernung und Politur mit koronaren Gummischalen an allen Zähnen der Mundhöhle.

Die nicht-chirurgische Parodontaltherapie wird 7 Tage nach der Durchführung der OHP und der ersten supragingivalen Zahnsteinentfernung eingeleitet. Die Behandlung wird von einem Fachmann für Parodontologie im Abstand von 24 Stunden durch Skalierung (supragingival und subgingival) und Wurzelglättung aller Zähne mit parodontaler Erkrankung mit der Hand durchgeführt (Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA). und Ultraschallwerkzeuge. Die Instrumentierung wird Quadrant für Quadrant durchgeführt, bis eine ausreichende Reinigung des Bereichs und eine Wurzelglättung erreicht sind, die mit Hilfe eines Explorers überprüft wird. Bis zu drei Monate nach Ende der nicht-chirurgischen Parodontaltherapie erhalten Einzelpersonen alle zwei Wochen eine professionelle Reinigung. Bei der zweiwöchentlichen Kontrolle und Bewertung wird die Mitarbeit des Patienten an der Studie überwacht und der Zustand der Mundhygiene überprüft.

Statistische Analyse – Normalität und Homoskedastizität der Daten werden überprüft. Die Vergleiche zwischen und innerhalb der Gruppe in verschiedenen Zeitintervallen werden durch geeignete parametrische oder nichtparametrische Tests erreicht. Für alle statistischen Analysen wird ein Signifikanzniveau von 5 % verwendet. Alle Berechnungen werden mit der SPSS-Software (SPSS, Chicago IL, EUA) durchgeführt.