Evaluatie van antimicrobiële fotodynamische therapie als aanvulling op parodontale behandeling bij rokers

MATERIALEN EN METHODES

Toestemming om te zoeken - Alle patiënten ontvangen gedetailleerde informatie over het experiment (doelen, voordelen, risico's en ongemakken) in overeenstemming met een toestemmingsformulier in dit onderzoek. Alle procedures zijn onderworpen aan de goedkeuring van de Ethische Commissie (CEP) van de Ribeirão Preto Dental School (FORP), Universiteit van São Paulo (USP).

Berekening van de steekproefomvang - De steekproefomvang werd bepaald om 80% vermogen te bieden om een ​​significant verschil van 1 mm (d) te herkennen tussen groepen met een betrouwbaarheidsinterval van 95% (a = 0,05) en standaarddeviatie (s) van 1,0 mm. Gezien de veranderingen in het gemiddelde klinische hechtingsniveau (CAL) als de primaire uitkomstvariabele en [Za (1,96) + Zb (0,84)]2 = 7,84. De grootteberekening was gebaseerd op de volgende formule: n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2. Er waren dus in totaal 16 patiënten nodig. Het aantal patiënten dat aan deze studie deelnam, was echter 20, rekening houdend met het feit dat sommige patiënten verloren zouden kunnen gaan tijdens de follow-up.

Experimenteel ontwerp - De geselecteerde proefpersonen krijgen specifieke instructies voor mondhygiëne en supragingivale schilfering in alle tanden, zeven dagen voor aanvang van de interventies. Het onderzoekstype is een gesplitste mond met twee paar contralaterale uni-worteltanden met proximale parodontale locaties met een sondediepte ≥ 5 mm voor de klinische, microbiologische en immunologische beoordeling. Een computerprogramma zal een tabel met willekeurige getallen genereren, elk van de geselecteerde tandheelkundige paren krijgt de volgende behandelingen: SRP of SRP + verschillende aPDT-episodes. De klinische, immunologische en microbiologische parameters zullen worden geëvalueerd bij baseline (pre-interventie) en na voltooiing van niet-chirurgische parodontale therapie. De parodontale klinische onderzoeken (pre en post-interventie) zullen worden uitgevoerd door een enkele getrainde en gekalibreerde examinator, die de experimentele groepen van deze studie niet kende. Examinatoren zijn ook blind om de immunologische en microbiologische analyses te bestuderen. SRP-procedures en het gebruik van het aPDT-protocol moeten voor deze doeleinden worden uitgevoerd door een andere getrainde operator.

Bij elke patiënt zal een afdruk met alginaat worden gemaakt om de modellen van de tandbogen te verkrijgen en een geleideplaat op acetaat met referentiegroeven te ontwikkelen om het inbrengen en de helling van de gecomputeriseerde parodontale sonde te standaardiseren (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, VS). De zichtbare plaque-index van elke patiënt zal dichotoom worden beoordeeld (O'Leary et al., 1972) en bepaald door het percentage tandoppervlakken met plaque. Op 6 locaties van elke tand (mesio-buccaal, buccaal, distobuccaal, mesio-linguaal, linguaal en disto-linguaal) zullen klinische parodontale parameters worden beoordeeld: sondediepte (mm) die zal worden gemeten vanaf de tandvleesrand tot de bodem van de pocket; relatief klinisch bevestigingsniveau (mm) dat wordt gemeten vanaf de occlusale plaatgeleider tot de bodem van de pocket; Bloeding bij sondering, dichotoom beoordeeld (Ainamo, Bay, 1976), de aanwezigheid van bloeding wordt als positief beschouwd wanneer deze wordt gepresenteerd binnen 20 seconden na het inbrengen van de sonde voor het meten van de sonderingsdiepte. Deze klinische parameters en de plaque-index van elke patiënt worden bij baseline (pre-interventieperiode) en +30 en +90 dagen na de niet-chirurgische parodontale therapie geregistreerd.

Kalibratie examinator - De Kappa-index wordt gebruikt om de kalibratie van de examinator te evalueren voor het verzamelen van klinische parodontale parameters om de overeenstemming tussen de examinator te meten. Volgens de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) voor diagnostische criteria moet de aanvaardbare index Kappa-overeenkomst groter zijn dan of gelijk zijn aan 0,85 (WHO, 1997). Dit overeenkomstniveau wordt gebruikt voor de kalibratie van de examinator in dit project. Er zullen tien patiënten worden geselecteerd, ten minste twee paar contralaterale tanden uni-wortels met sondediepte ≥ 5 mm in de proximale plaatsen. Elke patiënt wordt twee keer gescand met een gecomputeriseerde parodontale sonde (Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, VS) met een interval van 48 uur tussen het eerste en tweede onderzoek om de intra-examinatorbetrouwbaarheid te verkrijgen, die zal worden gemeten door de Kappa te bepalen inhoudsopgave.

Immunologische analyse - Bij baseline en op dagen +14, +30 en +90, na niet-chirurgische parodontale therapie zullen GCF-monsters van geselecteerde tanden worden verzameld. De supragingivale plaque deze elementen worden verwijderd en de plaatsen worden voorzichtig gedroogd met luchtstralen en vervolgens geïsoleerd met steriele wattenrollen. De GCF-monsters worden verkregen van de mesiale en distale plaatsen tot het gebruik van Periopaper-strips (Oralflow Inc., Amityville, NY, VS). De strips worden gedurende 30 seconden voorzichtig op de rand van de gingivale sulcus geplaatst. De hoeveelheid geabsorbeerd tandvleesvocht wordt bepaald door een elektronische meter van natte massa Periotron (Oralflow Inc., Amityville, NY). De strips worden in steriele eppendorfflesjes geplaatst van het type dat zal worden bewaard bij een temperatuur van 80°C voor latere kwantificering van cytokinen (pg/ml) TNF-a, IL-1β en IL-10. Cytokineniveaus worden bepaald met behulp van een 3-plex kit Millipore (Millipore Corporation, Billerica, MA, VS) 100TM en het Luminex-systeem (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, VS).

Analyse van speekselcotinine - Cotinine is een metaboliet van nicotine waarmee de blootstelling van de patiënt aan nicotine kan worden gevolgd (McGuire et al., 1989). Cotinine-niveaus zullen bij aanvang worden geïdentificeerd door immuno-enzymatische analyse (ELISA) (Salimetrics Inc., State College, PA, VS) met behulp van een kit voor de kwantitatieve analyse van cotinine in speeksel volgens de instructies van de fabrikant.

Microbiologische analyse - Bij baseline en op dagen +30 en +90, na het uitvoeren van niet-chirurgische parodontale therapie, worden subgingivale plaquemonsters van de geselecteerde tanden verzameld in de proximale parodontale pockets (mesiaal en distaal). In elk monster zullen tellingen van 40 subgingivale soorten worden bepaald met behulp van de methode checkerboard DNA-DNA hybridisatie (Birth et al., 2008). Voor het verzamelen van subgingivale plaque worden de plaatsen geïsoleerd met steriele wattenrollen en gedroogd met luchtstralen. De supragingivale plaque wordt voorzichtig verwijderd met een steriele curette. Vervolgens wordt een andere steriele curette gebruikt om subgingivale plaque te verzamelen, beginnend vanaf het diepste gedeelte van de pocket tot aan het coronale gebied. De monsters worden vervoerd in steriele Eppendorf-flesjes en verwerkt in het Dental Molecular Diagnostics Laboratory van de School of Dentistry of Ribeirão Preto-USP

Niet-chirurgische parodontale therapie - 7 dagen voorafgaand aan de niet-chirurgische parodontale therapie ondergaan alle patiënten een volledig periapisch radiografisch onderzoek van de gehele mond. Ze zullen worden gegroepeerd in een mondhygiëneprogramma (OHP) op basis van de specifieke behoeften. In dit programma krijgen patiënten instructies voor effectieve zelfplaque, inclusief informatie over Bass-techniek (Bass, 1954) en interproximale reiniging met flosdraad en interdentale ragers. Ze zullen ook worden aangemoedigd om de tong eenmaal per dag te poetsen en een enkele tandpasta te krijgen die gedurende de hele experimentele periode moet worden gebruikt (Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brazilië). Na afronding van dit programma voor mondhygiëne zullen patiënten worden onderworpen aan een evaluatie van de eerder beschreven klinische parodontale parameters, en zullen er ook subgingivale plaque- en GCF-monsters worden genomen op geselecteerde locaties (baseline - pre-interventieperiode). Kort daarna krijgt supragingivale schilfering en polijsten met een coronaire rubberen cups in alle tanden in de mondholte.

Niet-chirurgische parodontale therapie wordt gestart 7 dagen na de uitvoering van de OHP en de initiële supragingivale schilfering. De behandeling zal worden uitgevoerd door een persoon die bekwaam is in parodontologie, met een interval van 24 uur door schalen (supragingivaal en subgingivaal) en wortelplaning van alle tanden met parodontitis, met behulp van de hand (Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) en ultrasone gereedschappen. De instrumentatie wordt kwadrant voor kwadrant gehouden, totdat het gebied voldoende is schoongemaakt en de wortels zijn geschaafd, wat zal worden gecontroleerd met behulp van een verkenner. Individuen krijgen tweewekelijks een professionele reiniging tot drie maanden na het einde van de niet-chirurgische parodontale therapie. Bij tweewekelijkse controle en evaluatie zal de medewerking van de patiënt aan het onderzoek worden gecontroleerd, waarbij de toestand van de mondhygiëne wordt geverifieerd.

Statistische analyse - Normaliteit en homoscedasticiteit van de gegevens worden gecontroleerd. De vergelijkingen tussen en binnen de groep in verschillende tijdsintervallen zullen worden bereikt door middel van adequate parametrische of niet-parametrische tests. Voor alle statistische analyses wordt een significantieniveau van 5% gebruikt. Alle berekeningen worden uitgevoerd met behulp van SPSS-software (SPSS, Chicago IL, EUA).