Antimikrobisen fotodynaamisen terapian arviointi periodontaalisen hoidon lisänä tupakoitsijoilla

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

Suostumus hakuun - Kaikki potilaat saavat yksityiskohtaista tietoa kokeesta (tavoitteet, hyödyt, riskit ja epämukavuudet) tämän tutkimuksen suostumuslomakkeen mukaisesti. Kaikki toimenpiteet edellyttävät São Paulon yliopiston (USP) Ribeirão Preto Dental Schoolin (FORP) eettisen komitean (CEP) hyväksyntää.

Näytteen koon laskeminen - Näytteen koon määritettiin antamaan 80 %:n teho tunnistaa merkittävä 1 mm:n (d) ero ryhmien välillä 95 %:n luottamusvälillä (a = 0,05) ja 1,0 mm:n standardipoikkeamalla (s). Ottaen huomioon keskimääräisen kliinisen kiinnittymistason (CAL) muutokset ensisijaisena tulosmuuttujana ja [Za (1,96) + Zb (0,84)]2 = 7,84. Kokolaskenta perustui seuraavaan kaavaan: n = {2[(s)2/(d)2]} · (Za + Zb)2. Siksi tarvittiin yhteensä 16 potilasta. Tähän tutkimukseen osallistuneiden potilaiden määrä oli kuitenkin 20, kun otetaan huomioon, että joitain potilaita voitiin menettää seurannan aikana.

Kokeellinen suunnittelu - Valitut koehenkilöt saavat erityisiä suun hygieniaohjeita ja supragingivaalisen hilseilyn kaikkiin hampaisiin seitsemän päivää ennen toimenpiteiden alkamista. Kliinistä, mikrobiologista ja immunologista arviointia varten tutkimustyyppi on jaettu suu, jossa on kaksi paria vastakkaisia ​​yksijuurisia hampaita, joiden proksimaaliset periodontaaliset kohdat ovat ≥ 5 mm. Satunnaislukutaulukko generoidaan tietokoneohjelmalla, jokainen valituista hammaslääkäripareista saa seuraavat hoidot: SRP tai SRP + useita aPDT-jaksoja. Kliiniset, immunologiset ja mikrobiologiset parametrit arvioidaan lähtötilanteessa (ennen interventiota) ja ei-kirurgisen parodontaalihoidon päätyttyä. Kliiniset periodontaaliset tutkimukset (ennen ja jälkeen interventiota) suorittaa yksi koulutettu ja kalibroitu tutkija, joka ei tunne tämän tutkimuksen koeryhmiä. Tutkijat ovat myös sokeita tutkiakseen immunologisia ja mikrobiologisia analyyseja. SRP-menettelyt ja aPDT-protokollan käyttö tulee suorittaa toisen koulutetun käyttäjän toimesta näitä tarkoituksia varten.

Jokaiselle potilaalle tehdään alginaattijäljennös, jotta saadaan mallit hammaskaareista ja kehitetään asetaatille ohjauslevy, jossa on vertailuurat tietokoneistetun parodontaalisen anturin asettamisen ja kallistuksen standardoimiseksi (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, USA). Kunkin potilaan näkyvä plakkiindeksi arvioidaan kaksijakoisesti (O'Leary et ai., 1972) ja määritetään plakin sisältämien hampaiden pintojen prosenttiosuudella. Jokaisen hampaan 6 kohdassa (mesio-bukkaalinen, bukkaalinen, distobukkaalinen, mesiolinguaalinen, linguaalinen ja distolinguaalinen) kliiniset periodontaaliset parametrit arvioidaan: Tutkimussyvyys (mm), joka mitataan ienreunasta taskun pohjaan; suhteellinen kliininen kiinnitystaso (mm), joka mitataan okklusaalilevyn ohjaimesta taskun pohjaan; Verenvuoto koettimessa, arvioituna kaksijakoisesti (Ainamo, Bay, 1976), verenvuodon esiintymistä pidetään positiivisena, kun se esitetään 20 sekunnin kuluessa koettimen asettamisesta mittaussyvyyden mittaamiseksi. Nämä kliiniset parametrit ja kunkin potilaan plakkiindeksi kirjataan lähtötilanteessa (interventiota edeltävä jakso) sekä +30 ja +90 päivää ei-kirurgisen parodontaalihoidon jälkeen.

Tutkijan kalibrointi - Kappa-indeksiä käytetään tutkijan kalibroinnin arvioimiseen kliinisten parodontaaliparametrien keräämiseksi, jotta voidaan mitata tutkijan välinen sopimus. Maailman terveysjärjestön (WHO) diagnostisten kriteerien mukaan hyväksyttävän indeksin Kappa-sopimuksen on oltava suurempi tai yhtä suuri kuin 0,85 (WHO, 1997). Tätä sopimustasoa käytetään tarkastajan kalibrointiin tässä projektissa. Valitaan kymmenen potilasta, vähintään kaksi paria vastakkaisia ​​hampaita yksijuuriltaan, joiden anturin syvyys on ≥5 mm proksimaalisissa kohdissa. Jokainen potilas skannataan kahdesti käyttämällä tietokoneistettua parodontaalianturia (Probe Corporation Florida, Gainesville, FL, USA) 48 tunnin välein ensimmäisen ja toisen tutkimuksen välillä, jotta saadaan aikaan tutkijan sisäinen luotettavuus, joka mitataan määrittämällä Kappa. indeksi.

Immunologinen analyysi - Lähtötilanteessa ja päivinä +14, +30 ja +90, ei-kirurgisen parodontaalihoidon jälkeen kerätään GCF-näytteet valituista hampaista. Supragingivaalinen plakki nämä elementit poistetaan ja kohdat kuivataan varovasti ilmasuihkuilla ja eristetään sen jälkeen steriileillä puuvillarullilla. GCF-näytteet saadaan mesiaalisista ja distaalisista kohdista käyttämällä Periopaper-liuskoja (Oralflow Inc., Amityville, NY, USA). Suikaleet asetetaan varovasti ienrannan reunaan 30 sekunniksi. Imentyneen iennesteen määrä määritetään elektronisella märkämassamittarilla Periotron (Oralflow Inc., Amityville, NY). Liuskat laitetaan steriileihin eppendorf-pulloihin, joiden tyyppiä säilytetään 80 °C:n lämpötilassa sytokiinien (pg/ml) TNF-a:n, IL-1p:n ja IL-10:n myöhempää kvantitointia varten. Sytokiinitasot määritetään käyttämällä 3-plex-sarjaa Millipore (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) 100TM ja Luminex-järjestelmää (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, USA).

Syljen kotiniinianalyysi - Kotiniini on nikotiinin metaboliitti, jonka avulla voidaan seurata potilaan nikotiinialtistusta (McGuire et ai., 1989). Kotiniinitasot tunnistetaan lähtötasolla immunoentsymaattisella analyysillä (ELISA) (Salimetrics Inc., State College, PA, USA) käyttämällä pakkausta kotiniinin kvantitatiiviseen analyysiin syljessä valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Mikrobiologinen analyysi - Lähtötilanteessa ja päivinä +30 ja +90, ei-kirurgisen parodontaalihoidon jälkeen, valituista hampaista otetaan subgingivaaliset plakkinäytteet proksimaalisista parodontaalitaskuista (mesiaalisista ja distaalisista). Jokaisesta näytteestä määritetään 40 subgingivaalisen lajin määrä käyttämällä shakkilaudan DNA-DNA-hybridisaatiomenetelmää (Birth et al., 2008). Subgingivaalisen plakin keräämistä varten kohdat eristetään steriileillä puuvillateloilla ja kuivataan ilmasuihkuilla. Supragingivaalinen plakki poistetaan varovasti steriilillä kyretillä. Myöhemmin toista steriiliä kyrettiä käytetään subgingivaalisen plakin keräämiseen alkaen taskun syvimmästä osasta koronaaliselle alueelle. Näytteet kuljetetaan steriileissä Eppendorf-pulloissa ja käsitellään Ribeirão Preto-USP:n hammaslääketieteen korkeakoulun Dental Molecular Diagnostics Laboratoryssa.

Ei-kirurginen periodontaalinen hoito – 7 päivää ennen ei-kirurgista parodontaalihoitoa kaikille potilaille tehdään täydellinen periapikaalinen koko suun radiografinen tutkimus. Ne ryhmitellään suuhygieniaohjelmaan (OHP) erityistarpeiden mukaan. Tässä ohjelmassa potilaat saavat ohjeet tehokkaasta plakin levittämisestä itseensä, mukaan lukien tietoa Bass-tekniikasta (Bass, 1954) ja interproksimaalisesta puhdistuksesta hammaslangalla ja hammasväliharjoilla. Heitä kannustetaan myös harjaamaan kieli kerran päivässä ja saamaan yhden hampaidenpuhdistusaineen käytettäväksi koko koejakson ajan (Colgate Total, Anakol Ind. Com. Ltda - Kolynos do Brasil - Colgate Palmolive Co., São Bernardo do Campo, SP, Brasil). Tämän suuhygieniaohjelman päätyttyä potilaat alistetaan aiemmin kuvattujen kliinisten parodontaaliparametrien arviointiin, ja heille myös kerätään subgingivaalisia plakkia ja GCF-näytteitä valituista kohdista (perustila - ennen interventiota). Pian sen jälkeen saa supragingivaalisen hilseilyn ja kiillotuksen sepelvaltimon kumikupeilla kaikkiin suuontelon hampaisiin.

Ei-kirurginen parodontaalihoito aloitetaan 7 päivää OHP:n suorittamisen ja ensimmäisen supragingivaalisen hilseilyn jälkeen. Hoidon suorittaa parodontologian ammattilainen 24 tunnin välein hilseilemällä (supragingivaaliset ja subgingivaaliset) ja juuren höyläyksellä kaikki parodontaalisen sairauden hampaat käsin (Curetas Gracey, Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) ja ultraäänityökalut. Instrumentointia pidetään kvadrantti kerrallaan, kunnes alueen riittävä puhdistus ja juurien höyläys tarkistetaan tutkimusmatkailijan avulla. Yksilöt saavat ammattimaisen puhdistuksen kahdesti viikossa enintään kolmen kuukauden ajan ei-kirurgisen parodontaalihoidon päättymisen jälkeen. Kahden viikon välein tehtävässä kontrollissa ja arvioinnissa seurataan potilaiden yhteistyötä tutkimuksessa ja varmistetaan suuhygienian tila.

Tilastollinen analyysi - Tietojen normaaliolo ja homoskedastisuus tarkistetaan. Eri aikavälein tehtävät ryhmien väliset ja sisäiset vertailut saavutetaan riittävillä parametrisilla tai ei-parametrisilla testeillä. Kaikessa tilastollisessa analyysissä käytetään 5 %:n merkitsevyystasoa. Kaikki laskelmat suoritetaan SPSS-ohjelmistolla (SPSS, Chicago IL, EUA).