Salive et vésicules extracellulaires pour les maladies neurodégénératives (MINERVA)
Nouvelle méthode de diagnostic de maladies neurodégénératives basées sur le profilage biochimique de la salive
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Contexte: Les maladies neurodégénératives (NDD) sont un groupe divers de troubles qui affectent de manière variable les individus, avec de nombreuses distinctions subtiles et différentes vitesses entre les individus et les syndromes. L'évolution des NDD implique la cognition, le comportement et les domaines moteurs de l'évaluation clinique qui entraînent des déficiences fonctionnelles et sociales à vie avec des coûts économiques et sociaux élevés. Les conducteurs physiopathologiques biochimiques se produisent bien plus tôt que les symptômes, ce qui rend l'identification de sujets atteints de maladie préclinique la base d'un diagnostic précoce, nécessaire pour une thérapie efficace.
La définition clinique des NDD est essentiellement insuffisante, mais les signaux moléculaires du cerveau peuvent conduire à l'identification d'un biomarqueur qui peut être mesuré périodiquement de manière non invasive. Par conséquent, un biomarqueur spécifique à la maladie est nécessaire.
La possibilité d'identifier des marqueurs spécifiques pour les NDD dans la salive a récemment émergé. La salive et les vésicules extracellulaires salivaires (SEV) sont des véhicules pour les molécules associées aux dommages neuronaux et à la neuroinflammation. Leur isolement permet un enrichissement des molécules impliquées dans les mécanismes pathogénétiques des NDD, améliorant leur quantification.
La spectroscopie Raman (RS) est une méthode utile pour la caractérisation biochimique exhaustive de la salive et de sa composante vésiculaire, sans procédures de coloration et d'étiquetage, très informative, rapide et durable. D'une manière rapide, sensible et non destructive, RS fournit un spectre qui peut être utilisé comme une "empreinte digitale" très spécifique pour l'échantillon sélectionné (par ex. Salive, sang, ev) représentant le biomarqueur diagnostique lui-même.
L'étude RS de la salive a déjà démontré la possibilité de profilage des patients présentant des pathologies progressives avec une bonne précision et, en particulier, de la distinction des sujets souffrant de NDD, sans étude supplémentaire de la capacité de distinguer la NDDS à un stade précoce, la vérification de la possibilité de surveiller ses différences observées, ni la recherche des mariés biomoléculaires impliqués dans les différences observées.
La spectroscopie Raman est proposée comme une méthode fiable pour la caractérisation biochimique rapide et exhaustive de la composante salivaire et vésiculaire présente dans l'échantillon, sans avoir besoin de procédures de coloration ou d'étiquetage.
OBJECTIVES: The objective of this project is the validation of a Raman molecular fingerprint for the considered exerimental groups, leading to the identification of a complex biomarker useful for 1) the early identification, 2) phenotyping and 3) molecular profiling of subjects with NDDs, leading to the prompt identification of tailored therapeutic strategies, including optimal pharmacological and rehabilitation therapies for each subject, with a significant impact on patients' quality de la vie et, à l'avenir, sur la probabilité accrue de ralentir la progression des NDD avec des thérapies efficaces optimales. Au niveau national, une intervention personnalisée précoce peut réduire les temps et les coûts de gestion des patients.
Taille de l'échantillon: La taille de l'échantillon a été calculée avec G-Power (taille de l'effet moyen F = 0,25, Pouvoir statistique 85%, A = 0,05, pour le test statistique ANOVA Omnibus avec 5 groupes expérimentaux AD, PD, ATP, PPD, MCI, taux d'abandon d'environ 10%). Le nombre minimum de sujets à impliquer est 242. Compte tenu de l'incidence différente des NDD considérés, la distribution n'est pas égale entre les groupes.
Collecte de données: Les données démographiques, cliniques et de recherche seront pseudonymisées et stockées dans une base de données RedCap sur mesure. Les données de Demographic (Ad, PD, ATPD, PPD ou MCI), démographique (âge, sexe), antécédents cliniques et comorbidités (échelle des maladies cumulatives) seront stockées. La salive sera collectée à l'aide d'un protocole optimisé.
Collection d'échantillons: Au recrutement (T0), au moins 60 minutes après la consommation de nourriture et / ou de boissons, la salive sera collectée à l'aide de tubes salivettes (Starstedt®). Après 12 mois (T12), les sujets seront invités à un deuxième échantillon de salive. Les paramètres pré-analytiques, les habitudes alimentaires et le tabagisme seront enregistrés. Les échantillons seront congelés jusqu'à ce qu'ils soient utilisés.
Échantillon d'évaluation biomoléculaire: la technologie SIMOA sera utilisée pour quantifier les marqueurs liés aux NDD: asyn pour PD, ATP et PPD, Aβ1-42 pour AD et MCI, NFL en tant que biomarqueurs généraux des dommages neurologiques dans tous les groupes.
Isolement et caractérisation de l'EV: la salive sera utilisée pour l'isolement des EV par chromatographie d'exclusion de taille (SEC) et par ultracentrifugation.
L'isolement efficace sera vérifié avec le transfert de points pour les marqueurs protéiques, l'analyse de suivi des nanoparticules (NTA) pour la distribution de taille et la microscopie électronique à transmission pour la morphologie.
Analyse Raman: les spectres EV dérivés des salivaires et de la salive seront acquis à l'aide d'un microscope Aramis Raman (Horiba Jobin-Yvon, France) équipé d'une source de lumière laser opérant à 785 nm et 532 nm (Carlomagno et al., Frontiers, 2021; Mangolini et al., Biology, 2023).
Traitement des données: les spectres acquis seront corrigés et normalisés par un vecteur unitaire, pour homogénéiser l'ensemble de données à l'aide du LabSpec6 (c'est-à-dire la ligne de base, normalisation). Une analyse multivariée sera utilisée pour créer un modèle de classification pour AD, PD, ATPD, PPD et MCI à T0, obtenant la dispersion des variables canoniques. La précision, la spécificité et la sensibilité de la salive et des SEV RS seront calculées après la validation croisée de laisse-un (LOOCV). La courbe ROC sera calculée. Les données obtenues à partir du profilage moléculaire des patients NDDS et des bases de données Raman seront utilisées pour interpréter la variation spectrale des différents groupes expérimentaux.
La corrélation entre les données biomoléculaires et cliniques Raman sera réalisée pour évaluer la capacité de la plate-forme Raman à stratifier les patients à différents stades de la maladie.
Les changements dans l'empreinte digitale RS entre T0 et T12 seront étudiés (étude longitudinale) et corrélés avec les changements dans les scores d'échelle clinique.
Type d'étude
Inscription (Estimé)
Contacts et emplacements
Coordonnées de l'étude
- Nom: Alice Gualerzi, PhD
- Numéro de téléphone: +390240308533
- E-mail: agualerzi@dongnocchi.it
Sauvegarde des contacts de l'étude
- Nom: Pietro Arcuri, MD
- Numéro de téléphone: +390240308833
- E-mail: parcuri@dongnocchi.it
Lieux d'étude
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Firenze, Italie
- Recrutement
- Azienda Ospedaliero Universitaria Careggi Firenze
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Contact:
- Silvia Ramat, MD, PhD
- E-mail: silvia.ramat@unifi.it
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Chercheur principal:
- Silvia Ramat
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Milan, Italie, 20148
- Recrutement
- IRCCS S. Maria Nascente, Fondazione Don Carlo Gnocchi ONLUS
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Sous-enquêteur:
- Silvia Picciolini, PhD
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Chercheur principal:
- Alice Gualerzi, PhD
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Sous-enquêteur:
- Marzia Bedoni, PhD
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Contact:
- Alice Gualerzi, PhD
- E-mail: agualerzi@dongnocchi.it
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Chercheur principal:
- Pietro Arcuri, MD
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Sous-enquêteur:
- Francesca Lea Saibene, PhD
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Sous-enquêteur:
- Luana Forleo
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Sous-enquêteur:
- Aurora Mangolini
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Sous-enquêteur:
- Anna Salvatore
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Sous-enquêteur:
- Angelo Bellinvia
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Sous-enquêteur:
- Sarah Feroldi
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Milano, Italie
- Recrutement
- IRCCS Istituto Neurologico "Carlo Besta"
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Contact:
- Gemma Lombardi
- E-mail: gemma.lombardi@istituto-besta.it
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Chercheur principal:
- Giuseppe Di Fede
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Sous-enquêteur:
- Gemma Lombardi
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Parma, Italie
- Recrutement
- Centro S. Maria ai Servi, Fondazione Don Carlo Gnocchi Onlus
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Contact:
- Valerio Brambilla, MD
- E-mail: vbrambilla@dongnocchi.it
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Sous-enquêteur:
- Beatrice Rizzi, MD
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Sous-enquêteur:
- Lorenzo Brambilla, MD
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Chercheur principal:
- Valerio Brambilla, MD
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FI
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Florence, FI, Italie
- Recrutement
- IRCCS Don Gnocchi, Fondazione Don Gnocchi
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Contact:
- Francesca Cecchi, MD
- Numéro de téléphone: +390557393922
- E-mail: fcecchi@dongnocchi.it
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Chercheur principal:
- Francesca Cecchi, MD
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Sous-enquêteur:
- Cristina Polito
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Sous-enquêteur:
- Alessio Faralli
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
- Adulte
- Adulte plus âgé
Accepte les volontaires sains
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critères d'inclusion:
- AD: Critères standard pour la démence due à la MA avec une démonstration neurochimique AD.
- PD: Critères MDS; étapes de Hoehn et Yahr modifiées; Traitement pharmacologique stable (4 dernières semaines).
- ATP: Critères de diagnostic consensus actuels pour la paralysie supranucléaire progressive; Dégénérescence corticobasale et atrophie multiple du système.
- PD prodromique: selon les critères diagnostiques de Berg;
- MCI: Selon les critères de diagnostic de Dubois et Albert.
Critères d'exclusion:
- Pour tous les groupes expérimentaux considérés, les sujets atteints de maladies chroniques et / ou inflammatoires concomitantes de la cavité buccale, d'autres maladies systémiques, des maladies oncologiques ou infectieuses seront exclues.
- Les patients non en mesure de fournir un consentement éclairé écrit de manière autonome seront exclus.
- Pour les patients atteints de MP: parkinsonisme vasculaire, familier et induit par des médicaments, d'autres causes connues ou suspectées (métabolique, tumeur cérébrale, etc.) ou toute caractéristique suggestive de l'ATP; démence avec test de test moca score correct <15
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
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Maladie d'Alzheimer (AD)
70 sujets.
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1 ml de salive sera collecté avec des écouvillons salivettes.
Les sujets subiront des évaluations et un échantillonnage de salive au temps d'inscription (T0) et un an après (T12).
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La maladie de Parkinson (PD)
70 sujets
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1 ml de salive sera collecté avec des écouvillons salivettes.
Les sujets subiront des évaluations et un échantillonnage de salive au temps d'inscription (T0) et un an après (T12).
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Parkinsonisme atypique (ATPD)
42 sujets comprenant les personnes diagnostiquées avec une atrophie multiple du système (MSA), une paralysie sopranucléaire progressive (PSP) et une dégénérescence corticobasale (CBD).
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1 ml de salive sera collecté avec des écouvillons salivettes.
Les sujets subiront des évaluations et un échantillonnage de salive au temps d'inscription (T0) et un an après (T12).
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Phase prodrome de la maladie de Parkinson
30 sujets
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1 ml de salive sera collecté avec des écouvillons salivettes.
Les sujets subiront des évaluations et un échantillonnage de salive au temps d'inscription (T0) et un an après (T12).
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Affaite cognitive légère (MCI)
30 sujets
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1 ml de salive sera collecté avec des écouvillons salivettes.
Les sujets subiront des évaluations et un échantillonnage de salive au temps d'inscription (T0) et un an après (T12).
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Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Empreinte digitale Salivaire Raman de AD, PD, ATPD, Prodromal PD et MCI
Délai: De l'inscription à l'évaluation de suivi et à la deuxième collection d'échantillons à 12 mois
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Différences dans les spectres Raman de la salive des patients atteints de MA, PD, ATPD, PDROMAL PD et MCI dans la plage spectrale 400-1800 cm-1
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De l'inscription à l'évaluation de suivi et à la deuxième collection d'échantillons à 12 mois
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
|---|---|---|
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Empreinte digitale Raman de Salivaire EV de AD, PD, ATPD, Prodromal PD et MCI
Délai: De l'inscription à l'évaluation de suivi et à la deuxième collection d'échantillons à 12 mois
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Différences dans les spectres Raman de Salive dérivés de patients atteints de patients atteints de MA, PD, ATPD, PDROMAL PD et MCI dans les plages spectrales 600-1800 cm-1 et 2600-3200 cm-1
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De l'inscription à l'évaluation de suivi et à la deuxième collection d'échantillons à 12 mois
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Biomarqueurs salivaires NDD
Délai: De l'inscription à l'évaluation de suivi et la deuxième collection d'échantillons à 12 mois
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Quantification des marqueurs liés aux NDD par la technologie SIMOA:
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De l'inscription à l'évaluation de suivi et la deuxième collection d'échantillons à 12 mois
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Empreinte digitale Raman salivaire après 1 an
Délai: De l'inscription au suivi et au deuxième échantillon à 12 mois
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Changements dans les spectres Raman de la salive entre T0 (inscription) et T12 (1 an après l'inscription) associés à la progression de la maladie.
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De l'inscription au suivi et au deuxième échantillon à 12 mois
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Salivaire EV Raman empreinte digitale des patients après 1 an
Délai: De l'inscription au suivi et au deuxième échantillon à 12 mois
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Les changements dans les spectres Raman de la salive ont dérivé des véhicules électriques entre T0 (inscription) et T12 (1 an après l'inscription) associés à la progression de la maladie.
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De l'inscription au suivi et au deuxième échantillon à 12 mois
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Corrélation des données Raman avec l'évaluation clinique
Délai: De l'inscription au suivi à 12 mois
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Corrélation entre les données spectrales de la salive et des véhicules électriques dérivés de la salive à T0 et T12 et à l'évaluation clinique (échelle de notation des maladies cumulatives / CIRS; Index de Barthel modifié / MBI; Évaluation cognitive de Montréal / MOCA; test de sable; test de fluidité; Test de fabrication de sentiers a et b / tmt-a et b; test de stroph; Inventaire neuropsychiatrique / NPI;
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De l'inscription au suivi à 12 mois
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Corrélation des données Raman avec les données biomoléculaires
Délai: De l'inscription au suivi à 12 mois
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Corrélation entre les données spectrales de salive et de salive dérivées EV à T0 et T12 et quantification biomoléculaire de i) asyn pour PD, ATP et PPD; ii) Aβ1-42 pour AD et MCI; iii) NFL pour tous les sujets
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De l'inscription au suivi à 12 mois
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Collaborateurs
Les enquêteurs
- Chercheur principal: Alice Gualerzi, PhD, IRCCS Fondazione Don Gnocchi
Publications et liens utiles
Publications générales
- Carlomagno C, Bertazioli D, Gualerzi A, Picciolini S, Andrico M, Roda F, Meloni M, Banfi PI, Verde F, Ticozzi N, Silani V, Messina E, Bedoni M. Identification of the Raman Salivary Fingerprint of Parkinson's Disease Through the Spectroscopic- Computational Combinatory Approach. Front Neurosci. 2021 Oct 26;15:704963. doi: 10.3389/fnins.2021.704963. eCollection 2021.
- Mangolini V, Gualerzi A, Picciolini S, Roda F, Del Prete A, Forleo L, Rossetto RA, Bedoni M. Biochemical Characterization of Human Salivary Extracellular Vesicles as a Valuable Source of Biomarkers. Biology (Basel). 2023 Jan 31;12(2):227. doi: 10.3390/biology12020227.
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Estimé)
Achèvement de l'étude (Estimé)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Termes MeSH pertinents supplémentaires
- Synucleinopathies
- Maladies du cerveau
- Maladies du système nerveux central
- Maladies du système nerveux
- Les troubles mentaux
- Troubles neurocognitifs
- Troubles cognitifs
- Démence
- Tauopathies
- Troubles du mouvement
- Maladies des noyaux gris centraux
- Dysfonctionnement cognitif
- Maladie d'Alzheimer
- Maladie de Parkinson
- Maladies neurodégénératives
- Troubles parkinsoniens
Autres numéros d'identification d'étude
- FDG_MINERVA
- CET 97/24 (Autre identifiant: CET Lombardia 4)
- FDG 17_17/09/2024 (Autre identifiant: IRCCS Fondazione Don Carlo Gnocchi)
Plan pour les données individuelles des participants (IPD)
Prévoyez-vous de partager les données individuelles des participants (DPI) ?
Description du régime IPD
Informations sur les médicaments et les dispositifs, documents d'étude
Étudie un produit pharmaceutique réglementé par la FDA américaine
Étudie un produit d'appareil réglementé par la FDA américaine
produit fabriqué et exporté des États-Unis.
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