Saliva e vesículas extracelulares para doenças neurodegenerativas (MINERVA)
Novo método para o diagnóstico de doenças neurodegenerativas com base em perfis bioquímicos de saliva
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Antecedentes: As doenças neurodegenerativas (NDDs) são um grupo diverso de distúrbios que afetam de maneira variável indivíduos, com muitas distinções sutis e velocidades diferentes entre indivíduos e síndromes. A evolução do DND envolve cognição, comportamento e domínios motores da avaliação clínica que resultam em comprometimentos funcionais e sociais ao longo da vida com altos custos econômicos e sociais. Os fatores fisiopatológicos bioquímicos ocorrem muito mais cedo do que a aparência dos sintomas, tornando a identificação de indivíduos com doença pré -clínica a base para o diagnóstico precoce, necessário para uma terapia eficaz.
A definição clínica de NDDs é basicamente insuficiente, mas os sinais moleculares do cérebro podem levar à identificação de um biomarcador que pode ser medido periodicamente de maneira não invasiva. Portanto, é necessário um biomarcador específico da doença.
A possibilidade de identificar marcadores específicos para NDDs na saliva surgiu recentemente. As vesículas de saliva e extracelador salivar (SEVs) são veículos para moléculas associadas a danos neuronais e neuroinflamação. Seu isolamento permite um enriquecimento das moléculas envolvidas nos mecanismos patogenéticos dos NDDs, melhorando sua quantificação.
A espectroscopia Raman (RS) é um método útil para a caracterização bioquímica exaustiva da saliva e seu componente vesicular, sem procedimentos de coloração e rotulagem, altamente informativos, rápidos e sustentáveis. De uma maneira rápida, sensível e não destrutiva, o RS fornece um espectro que pode ser usado como uma "impressão digital" altamente específica para a amostra selecionada (por exemplo, Saliva, sangue, EV) representando o próprio biomarcador diagnóstico.
O estudo de SR da saliva já demonstrou a possibilidade de perfil de pacientes com patologias progressivas com boa precisão e, especificamente, de distinguir indivíduos que sofrem de NDDs, sem investigação mais aprofundada da capacidade de distinguir o NDDs em um estágio inicial, a verificação da possibilidade de monitorar a progressão, nem a investigação da biomática.
A espectroscopia Raman é proposta como um método confiável para a caracterização bioquímica rápida e exaustiva do componente salivar e vesicular presente na amostra, sem a necessidade de coloração ou procedimentos de rotulagem.
OBJECTIVES: The objective of this project is the validation of a Raman molecular fingerprint for the considered exerimental groups, leading to the identification of a complex biomarker useful for 1) the early identification, 2) phenotyping and 3) molecular profiling of subjects with NDDs, leading to the prompt identification of tailored therapeutic strategies, including optimal pharmacological and rehabilitation therapies for each subject, with a significant impact on patients' quality of Vida e, no futuro, com a maior probabilidade de diminuir a progressão dos NDDs com terapias eficazes ideais. Em nível nacional, a intervenção personalizada precoce pode reduzir os tempos e custos de gerenciamento do paciente.
Tamanho da amostra: o tamanho da amostra foi calculado com gotas g (tamanho médio do efeito f = 0,25, Poder estatístico 85%, A = 0,05, para teste estatístico da ANOVA Omnibus com 5 grupos experimentais AD, PD, ATP, PPD, MCI, taxa de abandono de cerca de 10%). O número mínimo de sujeitos a serem envolvidos é 242. Considerando a diferente incidência dos NDDs considerados, a distribuição não é igual entre os grupos.
Coleta de dados: os dados demográficos, clínicos e de pesquisa serão pseudonimizados e armazenados em um banco de dados RedCap personalizado. O diagnóstico de NDDs (AD, DP, ATPD, PPD ou MCI), dados demográficos (idade, sexo), história clínica e comorbidades (escala de classificação de doenças cumulativas) serão armazenadas. A saliva será coletada usando um protocolo otimizado.
Coleta de amostra: no Recrutamento (T0), pelo menos 60 minutos após a ingestão de alimentos e/ou bebidas, a saliva será coletada usando tubos de salivette (Starstedt®). Após 12 meses (T12), os indivíduos serão solicitados a uma segunda amostra de saliva. Parâmetros pré-analíticos, hábito dietético e de fumar serão registrados. As amostras serão congeladas até que sejam usadas.
Avaliação biomolecular da amostra: A tecnologia SIMOA será usada para quantificar marcadores relacionados ao NDDS: ASYN para PD, ATP e PPD, Aβ1-42 para AD e MCI, NFL como biomarcadores gerais de danos neurológicos em todos os grupos.
Isolamento e caracterização de EV: a saliva será usada para o isolamento de VEs por cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) e por ultracentrifugação.
O isolamento efetivo será verificado com o DOT blot para marcadores de proteínas, análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) para distribuição de tamanho e microscopia eletrônica de transmissão para morfologia.
Análise Raman: os espectros de EV derivados de salivar e saliva serão adquiridos usando um microscópio Aramis Raman (Horiba Jobin-Yvon, França) equipado com uma fonte de luz a laser operando a 785 nm e 532 nm (Carlomagno et al., Frontiers, 2021; mangolini et al.
Processamento de dados: os espectros adquiridos serão corrigidos e normalizados da linha de base, para homogeneizar o conjunto de dados usando o labspec6 (ou seja, linha de base, normalização). A análise multivariada será usada para criar um modelo de classificação para AD, PD, ATPD, PPD e MCI em T0, obtendo a dispersão das variáveis canônicas. A precisão, especificidade e sensibilidade da saliva e SEV Rs serão calculadas após a validação cruzada de licença (LOOCV). A curva ROC será calculada. Os dados obtidos a partir do perfil molecular dos pacientes com NDDs e dos bancos de dados Raman serão usados para interpretar a variação espectral nos diferentes grupos experimentais.
A correlação entre dados biomoleculares e clínicos de Raman será realizada para avaliar a capacidade da plataforma Raman de estratificar pacientes em diferentes estágios da doença.
As alterações na impressão digital RS entre T0 e T12 serão investigadas (estudo longitudinal) e correlacionadas com as alterações nos escores da escala clínica.
Tipo de estudo
Inscrição (Estimado)
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Alice Gualerzi, PhD
- Número de telefone: +390240308533
- E-mail: agualerzi@dongnocchi.it
Estude backup de contato
- Nome: Pietro Arcuri, MD
- Número de telefone: +390240308833
- E-mail: parcuri@dongnocchi.it
Locais de estudo
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Firenze, Itália
- Recrutamento
- Azienda Ospedaliero Universitaria Careggi Firenze
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Contato:
- Silvia Ramat, MD, PhD
- E-mail: silvia.ramat@unifi.it
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Investigador principal:
- Silvia Ramat
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Milan, Itália, 20148
- Recrutamento
- IRCCS S. Maria Nascente, Fondazione Don Carlo Gnocchi ONLUS
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Subinvestigador:
- Silvia Picciolini, PhD
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Investigador principal:
- Alice Gualerzi, PhD
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Subinvestigador:
- Marzia Bedoni, PhD
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Contato:
- Alice Gualerzi, PhD
- E-mail: agualerzi@dongnocchi.it
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Investigador principal:
- Pietro Arcuri, MD
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Subinvestigador:
- Francesca Lea Saibene, PhD
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Subinvestigador:
- Luana Forleo
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Subinvestigador:
- Aurora Mangolini
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Subinvestigador:
- Anna Salvatore
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Subinvestigador:
- Angelo Bellinvia
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Subinvestigador:
- Sarah Feroldi
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Milano, Itália
- Recrutamento
- IRCCS Istituto Neurologico "Carlo Besta"
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Contato:
- Gemma Lombardi
- E-mail: gemma.lombardi@istituto-besta.it
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Investigador principal:
- Giuseppe Di Fede
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Subinvestigador:
- Gemma Lombardi
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Parma, Itália
- Recrutamento
- Centro S. Maria ai Servi, Fondazione Don Carlo Gnocchi Onlus
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Contato:
- Valerio Brambilla, MD
- E-mail: vbrambilla@dongnocchi.it
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Subinvestigador:
- Beatrice Rizzi, MD
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Subinvestigador:
- Lorenzo Brambilla, MD
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Investigador principal:
- Valerio Brambilla, MD
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FI
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Florence, FI, Itália
- Recrutamento
- IRCCS Don Gnocchi, Fondazione Don Gnocchi
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Contato:
- Francesca Cecchi, MD
- Número de telefone: +390557393922
- E-mail: fcecchi@dongnocchi.it
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Investigador principal:
- Francesca Cecchi, MD
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Subinvestigador:
- Cristina Polito
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Subinvestigador:
- Alessio Faralli
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Adulto
- Adulto mais velho
Aceita Voluntários Saudáveis
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critérios de inclusão:
- AD: Critérios padrão para demência devido a DA com demonstração neuroquímica da DA.
- PD: Critérios do MDS; estágios de Hoehn e Yahr modificados; Tratamento farmacológico estável (nas últimas 4 semanas).
- ATP: critérios de diagnóstico de consenso atuais para paralisia supranuclear progressiva; Degeneração corticobasal e atrofia do sistema múltiplo.
- DP prodrômica: de acordo com os critérios de diagnóstico por Berg;
- MCI: De acordo com os critérios de diagnóstico de Dubois e Albert.
Critérios de exclusão:
- Para todos os grupos experimentais considerados, serão excluídos indivíduos com doenças crônicas e / ou inflamatórias da cavidade oral, outras doenças sistêmicas, doenças oncológicas ou infecciosas.
- Os pacientes não capazes de fornecer consentimento informado por escrito serão excluídos autonomamente.
- Para pacientes com DP: parkinsonismo vascular, familiar e induzido por drogas, outras causas conhecidas ou suspeitas (metabólico, tumor cerebral etc.) ou quaisquer características sugestivas do ATP; Demência com pontuação correta do teste do MOCA <15
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Doença de Alzheimer (AD)
70 indivíduos.
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1 ml de saliva serão coletados com swabs de salivette.
Os indivíduos passarão por avaliações e amostragem de saliva no tempo de inscrição (T0) e um ano após (T12).
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Doença de Parkinson (DP)
70 indivíduos
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1 ml de saliva serão coletados com swabs de salivette.
Os indivíduos passarão por avaliações e amostragem de saliva no tempo de inscrição (T0) e um ano após (T12).
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Parkinsonismo atípico (ATPD)
42 indivíduos que compreendem pessoas diagnosticadas com atrofia do sistema múltiplo (MSA), paralisia sopranuclear progressiva (PSP) e degeneração corticobasal (CBD).
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1 ml de saliva serão coletados com swabs de salivette.
Os indivíduos passarão por avaliações e amostragem de saliva no tempo de inscrição (T0) e um ano após (T12).
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Fase prodrômica da doença de Parkinson
30 sujeitos
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1 ml de saliva serão coletados com swabs de salivette.
Os indivíduos passarão por avaliações e amostragem de saliva no tempo de inscrição (T0) e um ano após (T12).
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Modle Integridade Cognitiva (MCI)
30 sujeitos
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1 ml de saliva serão coletados com swabs de salivette.
Os indivíduos passarão por avaliações e amostragem de saliva no tempo de inscrição (T0) e um ano após (T12).
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Impressão digital salivar Raman de AD, PD, ATPD, PDD PDROMAL e MCI
Prazo: Desde a inscrição até a avaliação de acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Diferenças nos espectros Raman da saliva de pacientes com DA, DP, ATPD, PDP prodromal e MCI na faixa espectral de 400-1800 cm-1
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Desde a inscrição até a avaliação de acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Impressão digital de Raman de Salivar EV de AD, PD, ATPD, PDD PDROMAL e MCI
Prazo: Desde a inscrição até a avaliação de acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Diferenças nos espectros Raman de EVs derivados de saliva de pacientes com DA, DP, ATPD, PDD PD e MCI nos variações espectrais 600-1800 cm-1 e 2600-3200 cm-1
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Desde a inscrição até a avaliação de acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Biomarcadores Salivares NDD
Prazo: Desde a inscrição até a avaliação de acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Quantificação de marcadores relacionados ao NDDS pela SIMOA Technology:
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Desde a inscrição até a avaliação de acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Impressão digital salivar Raman de pacientes após 1 ano
Prazo: Desde a inscrição até o acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Alterações nos espectros Raman da saliva entre T0 (inscrição) e T12 (1 ano após a inscrição) associados à progressão da doença.
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Desde a inscrição até o acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Impressão digital salivar EV Raman de pacientes após 1 ano
Prazo: Desde a inscrição até o acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Alterações nos espectros Raman dos VEs derivados de saliva entre T0 (inscrição) e T12 (1 ano após a inscrição) associados à progressão da doença.
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Desde a inscrição até o acompanhamento e a segunda coleta de amostras aos 12 meses
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Correlação de dados Raman com avaliação clínica
Prazo: De inscrição ao acompanhamento aos 12 meses
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Correlação entre dados espectrais de saliva e saliva derivada em T0 e T12 e avaliação clínica (escala de classificação de doenças cumulativas/CIRs; índice de barthel modificado/MBI; avaliação cognitiva de Montreal/MOCA; teste de fluência; teste de fluência; Inventário/NPI;
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De inscrição ao acompanhamento aos 12 meses
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Correlação de dados Raman com dados biomoleculares
Prazo: De inscrição ao acompanhamento aos 12 meses
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Correlação entre dados espectrais da saliva e Saliva derivada de EVs em T0 e T12 e quantificação biomolecular de i) Asyn para PD, ATP e PPD; ii) Aβ1-42 para AD e MCI; iii) NFL para todos os assuntos
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De inscrição ao acompanhamento aos 12 meses
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: Alice Gualerzi, PhD, IRCCS Fondazione Don Gnocchi
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Carlomagno C, Bertazioli D, Gualerzi A, Picciolini S, Andrico M, Roda F, Meloni M, Banfi PI, Verde F, Ticozzi N, Silani V, Messina E, Bedoni M. Identification of the Raman Salivary Fingerprint of Parkinson's Disease Through the Spectroscopic- Computational Combinatory Approach. Front Neurosci. 2021 Oct 26;15:704963. doi: 10.3389/fnins.2021.704963. eCollection 2021.
- Mangolini V, Gualerzi A, Picciolini S, Roda F, Del Prete A, Forleo L, Rossetto RA, Bedoni M. Biochemical Characterization of Human Salivary Extracellular Vesicles as a Valuable Source of Biomarkers. Biology (Basel). 2023 Jan 31;12(2):227. doi: 10.3390/biology12020227.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Estimado)
Conclusão do estudo (Estimado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
- Sinucleinopatias
- Doenças Cerebrais
- Doenças do Sistema Nervoso Central
- Doenças do Sistema Nervoso
- Transtornos Mentais, Desordem Mental
- Distúrbios Neurocognitivos
- Distúrbios Cognitivos
- Demência
- Tauopatias
- Distúrbios do Movimento
- Doenças dos Gânglios da Base
- Disfunção cognitiva
- Doença de Alzheimer
- Doença de Parkinson
- Doenças Neurodegenerativas
- Distúrbios parkinsonianos
Outros números de identificação do estudo
- FDG_MINERVA
- CET 97/24 (Outro identificador: CET Lombardia 4)
- FDG 17_17/09/2024 (Outro identificador: IRCCS Fondazione Don Carlo Gnocchi)
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Descrição do plano IPD
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
produto fabricado e exportado dos EUA
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