Az orr mikrobióma és jelentősége a betegségekben

Hipotézisek

A következő nullhipotéziseket javasoljuk:

1. A szaglászavarban szenvedő betegek orr-mikrobiomája nem különbözik a normál szaglású egészséges egyénekétől
2. Nem fordul elő szezonális ingadozás az orr mikrobiomában
3. Az orrnyálkahártya immunológiai képe nem korrelál a specifikus mikrobiomákkal
4. Sem az intranazális glükokortikoidok, sem a dupilumab és a mepolizumab nem befolyásolja a CRSwNP-ben szenvedő betegek orr-mikrobiómát és helyi immunfaktorait Anyagok és módszerek Tervezés: Eset-kontroll vizsgálat és longitudinális kohorsz vizsgálat.

Populációk:

1. 60 egészséges kontroll: normál szaglás és orr-orr-betegség hiánya, felső légúti allergiák és nincs intranazális gyógyszer
2. 60 nem COVID-19 beteg szaglászavarban szenved
3. 15 COVID-19 pozitív beteg az akut fázisban
4. 60 hosszan tartó COVID-19-beteg, akiknek szaglási zavara több mint 12 hétig fennáll
5. 60 CRS-ben szenvedő beteg intranazális glükokortikoid kezelését kezdeményezte
6. 15 CRS-ben szenvedő beteg kezdi a biológiai kezelést

Bevételi kritériumok

- 18 évnél idősebb

Kizárási kritériumok

• A biopsziás csoportok számára aktív véralvadásgátló kezelés
• A véralvadási rendszer betegségei
• Antibiotikumok az elmúlt három hónapban
• Egyéb immunmoduláló gyógyszerek az elmúlt három hónapban
• Autoimmun betegség vagy immunhiány

Toborzás: Az 1., 5. és 6. populációt a dániai Gødstrup Regionális Kórház fül-orr-gégészeti osztályának orr-orrműtéten áteső betegek körében toborozzák. A 2. és 4. populáció a dán Aarhusi Egyetem Klinikai Orvostudományi Tanszékének Flavor Institute-járól és a dániai Gødstrup Regionális Kórház íz-, egyensúly- és alvási egyetemi klinikájáról iratkozott be. A 3. lakosságot az Aarhusi Egyetemi Kórház és a Gødstrup Regionális Kórház hosszú COVID-19 klinikáira toborozzák. Az 1. lakosságot személyzettel és egyetemi hallgatókkal látják el.

Klinikai vizsgálatok, mérések és információk: Minden résztvevő tájékoztatást kap az anamnézisről, a gyógyszerhasználatról, az objektív fül-, orr- és torokvizsgálatról, beleértve a felső légutak endoszkópiáját, a Sino-Nasal Outcome Test-22[9], a major depressziót. Inventory[10,11], Mini Mental Status[12], Sniffin' Sticks[13] és ízvizsgálat.

Mikrobióma minták: Az orrüregből és a szájgaratból vett tamponokat a mikrobiom elemzéshez a következő generációs szekvenálás segítségével, amely a 16S és 18S riboszomális RNS-t célozza meg. A mikrobiom jellemzését 16S/18S amplikon alapú metagenomika végzi, az adatokat pedig különféle bioinformatikai eszközökkel elemzik az alfa/béta diverzitás meghatározására/vizualizálására, valamint főkoordináta-analízisre (PCoA).

Intranazális immuntényezők: Az orrbiopsziákat (3x3x3 mm) szövettanilag jellemezzük és térbeli transzkriptomika segítségével elemezzük a Vision 10X Genomics platformon. Az orrváladékot hat tampon segítségével gyűjtik össze, és a citokinprofil jellemzésére használják. Egy 45 citokint és kemokint tartalmazó, széles Luminex-alapú panelt (Invitrogen, Cyto-kine/Chemokin/Growth Factor Convenience 45-Plex Human ProcartaPlex™ Panel 1) fogunk alkalmazni, és a mintákat két párhuzamosban futtatjuk. A panel olyan citokineket tartalmaz, amelyekről ismert, hogy szerepet játszanak a CRS-ben, és amelyeket biológiai kezelés céloz, mint például az IL-4, IL-13 és IL-5.

A nazális szteroidhasználatra vonatkozó adatok: Az intranazális glükokortikoid-kezelést kezdő betegeket a kezelés megkezdésekor veszik figyelembe, és 24 hét után követik nyomon.

Statisztikák: 5%-os alfa és 80%-os hatvány esetén a populáció méretének minden csoportban 42 résztvevőnek kell lennie, feltételezve, hogy a baktériumok előfordulása 30%-kal különbözik a populációk között. A 20%-os lemorzsolódást figyelembe véve a vizsgálók 60 beteget kívánnak besorolni az 1-4. Az 5. és 6. csoportot érintő vizsgálatok feltáró jellegűek és hipotézisgenerálóak, teljesítményszámításokat nem végeztek. Ezenkívül csak néhány beteg felel meg a biológiai kezelés kritériumainak; ezért a vizsgálók minden olyan beteget be kívánnak vonni, aki 12-18 hónapon belül megkezdi a biológiai kezelést.

Megvalósíthatóság: A projekt a pályázó együttműködése; professzor, vezető tanácsadó, DMSc, Therese Ovesen, Flavor Institute, Aarhus University & The Flavor Clinic, Gødstrup Re-gional Hospital; és vezető tanácsadó, DMSc, Kurt Fuursted, Statens Serum Institute (SSI). A Flavor Institute Dánia egész területéről fogad betegeket, és 2015 óta közel 3000 beteg fordult az osztályhoz, és a Flavor Clinic and Institute több mint 50 kutatási tanulmánya jelent meg a szaglási zavarokról. 2016 óta rutin klinikai mikrobiomdiagnosztikát, 16S/18S amplikon alapú metagenomikát végeznek az SSI-nél, és az SSI klinikai és bioinformatikai szakértelmet is biztosít ezen a területen. A projekt tovább hasznosítja a MOMA-nál található CellX kezdeményezéssel való együttműködést, amely nemzeti kezdeményezés, amely szakértelmet és infrastruktúrát biztosít az egycellás omikákhoz. Összességében a vizsgálók garantálják a szükséges számú beteget, valamint az összes vizsgálati módszerrel, berendezéssel és a szükséges infrastruktúrával kapcsolatos szilárd és kiterjedt tapasztalatot.

Az 1. és 2. vizsgálatra vonatkozó szabályozási követelmények érvényben vannak, és a betegek felvétele, valamint a mikrobiomminta gyűjtése már megkezdődött.

Etika: Egyik szag- vagy ízteszt, sem a mikrobiom és az immuntényezők mintavétele nem okoz veszélyt, kényelmetlenséget vagy fájdalmat. A GDPR-t minden tanulmányban betartják, és az adatokat a törvényi előírásoknak megfelelően számítógépeken tárolják. A tanulmány megfelel a helsinki nyilatkozatnak, és a helyi etikai bizottság jóváhagyta (reg.nr. 1-10-72-213-21). Ami az orrbiopsziát illeti, ez rutinmunka a fül-orr-gégészeti szakambulanciákon. A biopsziát a középső turbinátból veszik helyi érzéstelenítésben, mérete 3x3x3 mm. A biopsziák beszerzésének engedélyezése iránti további kérelmet elküldik a helyi etikai bizottságnak. A vérzés kockázata nagyon alacsony, mivel a hematológiai betegségekben szenvedő betegek és az antikoaguláns kezelésben részesülő betegek kizártak.

A mikrobiomot az orrüregből vett tamponok segítségével értékelik, és a 16S és 18S riboszomális RNS-t megcélzó következő generációs szekvenálás segítségével elemzik a Staten Serum Institute Baktériumok, Paraziták és Gombák Tanszékén, Koppenhága, Dánia.

Az orrbiopsziákat (3x3x3 mm) szövettanilag jellemezzük és térbeli transzkriptomika segítségével elemezzük a Vision 10X Genomics platformon. Az orrváladékot hat tampon segítségével gyűjtik össze, és a citokinprofil jellemzésére használják.