鼻のマイクロバイオームと病気におけるその重要性

仮説

次の帰無仮説が提案されています。

1. 嗅覚障害のある患者の鼻のマイクロバイオームは、正常な嗅覚を持つ健康な人と変わらない
2. 鼻の微生物叢には季節変動がありません
3. 鼻粘膜の免疫学的状況は特定の微生物叢と相関しない
4. 鼻腔内グルココルチコイドもデュピルマブおよびメポリズマブも、CRSwNP 患者の鼻微生物叢と局所免疫因子には影響を与えません。 材料と方法 デザイン: 症例対照研究および縦断的コホート研究。

人口:

1. 60 人の健康な対照: 嗅覚が正常で、副鼻腔疾患、上気道アレルギーがなく、鼻腔内投薬を行っていない
2. 新型コロナウイルス以外の嗅覚障害患者60人
3. 急性期の新型コロナウイルス感染症陽性患者15名
4. 嗅覚障害が12週間以上続く新型コロナウイルス感染症患者60人
5. 鼻腔内グルココルチコイドを開始するCRS患者60人
6. CRS患者15名が生物学的治療を開始

包含基準

- 18歳以上

除外基準

• 生検グループには積極的な抗凝固療法
• 凝固系の病気
• 過去 3 か月以内に抗生物質を服用した
• 過去 3 か月以内の他の免疫調節薬
• 自己免疫疾患または免疫不全

募集: 母集団 1、5、および 6 は、デンマークの地域病院ゴドストラップの耳鼻咽喉科で鼻鼻手術を受ける患者の中から募集されます。 母集団 2 と 4 は、デンマークのオーフス大学臨床医学科フレーバー研究所、およびデンマークのゴッドストラップ地域病院フレーバー、バランス、睡眠大学クリニックから登録されています。 集団 3 は、オーフス大学病院とゴッドストラップ地域病院の長期にわたる新型コロナウイルス感染症診療所で募集されています。 母集団 1 にはスタッフと大学生が供給されます。

臨床検査、測定および情報: すべての参加者について、病歴、薬の使用、上気道の内視鏡検査を含む他覚的耳、鼻、および喉の検査、鼻鼻アウトカム検査-22[9]、大うつ病に関する情報が取得されます。インベントリ[10,11]、ミニメンタルステータス[12]、スニッフィンスティック[13]、および味覚検査。

マイクロバイオームサンプル: 16S および 18S リボソーム RNA をターゲットとする次世代シークエンシングを使用したマイクロバイオーム分析のために、鼻腔および口腔咽頭からのスワブが収集されます。 マイクロバイオームの特性評価は、16S/18S アンプリコンベースのメタゲノミクスによって実行され、データは、アルファ/ベータ多様性の決定/視覚化および主座標分析 (PCoA) のためのさまざまなバイオインフォマティクス ツールによって分析されます。

鼻腔内免疫因子: 鼻生検 (3x3x3 mm) は組織学的に特徴づけられ、Vision 10X Genomics プラットフォーム上の空間トランスクリプトミクスを使用して分析されます。 鼻分泌物は 6 本の綿棒を使って収集され、サイトカインのプロファイルを特徴付けるために使用されます。 45 のサイトカインおよびケモカインを含む広範な Luminex ベースのパネル (Invitrogen、サイトカイン/ケモカイン/成長因子コンビニエンス 45-Plex Human ProcartaPlex™ パネル 1) が使用され、サンプルは 2 回実行されます。 このパネルには、CRS に関与することが知られており、IL-4、IL-13、IL-5 などの生物学的治療の標的となるサイトカインが含まれています。

鼻ステロイド使用に関するデータ: 鼻腔内グルココルチコイドの投与を開始している患者は治療開始時に含まれ、追跡調査は 24 週間後に行われます。

統計: アルファが 5%、検出力が 80% である場合、細菌の発生が集団間で 30% 異なると仮定すると、各グループの集団サイズは 42 人の参加者となるはずです。 20％の脱落者を考慮に入れて、研究者らは60人の患者をグループ1～4に含めることを目指している。 グループ 5 と 6 に関する研究は探索的で仮説生成的なものであり、検出力の計算は行われていません。 さらに、生物学的治療の基準を満たす患者はわずかです。したがって、研究者らは、12～18か月以内に生物学的治療を開始するすべての患者を対象とする予定である。

実現可能性: このプロジェクトは申請者間の共同作業です。教授、上級コンサルタント、DMSc、テレーズ・オヴェセン、オーフス大学フレーバー研究所およびゴッドストラップ地域病院フレーバークリニック。およびスタテンス血清研究所 (SSI) のシニア コンサルタント、DMSc、Kurt Fuursted 氏。 フレーバー研究所はデンマーク全土から患者を受け入れており、2015 年以来、約 3,000 人の患者がこのユニットを受診し、嗅覚障害に関する 50 以上の研究がフレーバー クリニックおよび研究所から発表されています。 2016 年以来、日常的な臨床マイクロバイオーム診断である 16S/18S アンプリコンに基づくメタゲノミクスが SSI で実施されており、この分野では臨床と生物情報学の両方の専門知識が SSI によって提供されます。 このプロジェクトは、MOMA に所蔵されている CellX イニシアティブとの連携をさらに活用しています。CellX イニシアチブは、単一細胞オミックスの専門知識とインフラストラクチャーを提供する国家的イニシアチブです。 全体として、研究者は、必要な患者数と、すべての検査方法、機器、および必要なインフラストラクチャに関する確かで広範な経験の両方を保証しています。

研究 1 および 2 の規制要件は整備されており、患者の登録とマイクロバイオームサンプルの収集はすでに始まっています。

倫理: 嗅覚や味覚の検査、マイクロバイオームや免疫因子のサンプリングは、危険、不快感、痛みを引き起こすものではありません。 すべての調査では GDPR が遵守され、データは法的要件に従ってコンピューターに保存されます。 この研究はヘルシンキ宣言を満たしており、地元の倫理委員会によって承認されています。 1-10-72-213-21）。 鼻生検については、耳鼻咽喉科外来での日常的な検査です。 局所麻酔下で中鼻甲介から生検を採取し、大きさは 3x3x3 mm です。 生検を取得する許可を求める追加の申請書が地域の倫理委員会に送信されます。 血液疾患のある患者や抗凝固療法中の患者は除外されるため、出血のリスクは非常に低くなります。

デンマーク、コペンハーゲンのスタテン血清研究所細菌・寄生虫・真菌部門では、鼻腔からの綿棒を使用してマイクロバイオームを評価し、16Sおよび18SリボソームRNAを標的とする次世代シークエンシングを使用して分析する予定です。

鼻生検 (3x3x3 mm) は組織学的に特徴づけられ、Vision 10X Genomics プラットフォーム上の空間トランスクリプトミクスを使用して分析されます。 鼻分泌物は 6 本の綿棒を使って収集され、サイトカインのプロファイルを特徴付けるために使用されます。