Trikafta/Kaftrio és Pseudomonas Aeruginosa (Kaf-Pseudo)

20 cisztás fibrózisban szenvedő (≥12 éves) egyént veszünk fel, akik krónikusan fertőzöttek P. aeruginosa-val (amelynek meghatározása szerint legalább 50%-ban vagy több köpettenyészetben volt pozitív P. aeruginosa az előző évben), és homozigóta az F508del-re. mutáció (F508del/F508del) vagy heterozigóta az F508del mutációra, és minimális funkciómutációval rendelkezik a másik allélban (F508del/minimális funkció), a klinikai gyakorlat szerint Trikafta/Kaftrio-kezelésre jelöltek. A P. aeruginosa törzseket a terápia megkezdése előtt (T0) és 12 (T12m) és 18 (T18m) hónapos Trikafta/Kaftrio-kezelés után gyűjtik ki a köpetből. Jelenleg néhány beteg már megkezdte a Trikafta/Kaftrio kezelést. A T0 és néhányuk esetében a T12m és T18m törzseket már eltávolították ezekből a betegekből más vizsgálatok céljából. Ezekről a törzsekről még nem ismert, hogy különböző időpontokban (T0, T12m és T18m) klonálisak-e. Ezek közül a betegek közül a várható 20 (összesen 20 prospektív és retrospektív között) csak azokat a betegeket fogjuk beszámítani, akiknél T0, T12m és T18m közötti klonális törzseket azonosítanak, és tájékoztatáson alapuló beleegyezéssel kérik engedélyüket a törzsek felhasználására és adataikra. Ha a retrospektív betegek száma elegendő a várt szám (összesen 20 beteg) eléréséhez, további betegeket nem vesznek fel prospektívan.

Azokat a betegeket, akiknek a klinikai gyakorlatnak megfelelően Trikafta/Kaftrio-terápiát írnak fel, rutinlátogatásokon veszik fel. A Trikafta/Kaftrio kezelés felírására vonatkozó döntés a jelenlegi klinikai gyakorlat szerint teljesen független attól a döntéstől, hogy a beteget bevonják ebbe a vizsgálatba. A vizsgálatban előirányzott diagnosztikai és értékelési eljárások, valamint nyomon követési látogatások egybeesnek az egyes betegek számára a résztvevő központokban érvényben lévő szabványos működési eljárások szerint programozottakkal.

A visszamenőleges betegek esetében a rutinellenőrzés során be kell gyűjteni a tájékozott beleegyező nyilatkozatot, és az alkalmassági kritériumok igazolását követően a terápia megkezdése előtt elvégzett vizittel kapcsolatos adatokat (T0), és ha már rendelkezésre állnak, a a terápia kezdetétől számított 12. és 18. hónapban végzett vizit (T12m és T18m) összegyűjtésre kerül. A három vizit során a légúti mintákból kinyert P. aeruginosa elemzésre kerül. Abban az esetben, ha nem állnak rendelkezésre adatok, az adatokat és a mintákat a megfelelő rutin utánkövetések során (12 és/vagy 18 hónapos korban) gyűjtik.

A leendő betegek esetében a felvételi vizit a terápia megkezdése előtti rutinlátogatás (T0) során történik, amelyet a terápia kezdetétől számított 12. és 18. hónapban a klinikai gyakorlatra tervezett vizitek követnek (T12m és T18m).

A T0, T12m és T18m időpontban a páciens légútjaiból gyűjtött köpetmintákat a jelenlévő baktériumfajták értékelésére szolgáló standard eljárások szerint kezelik. A P. aeruginosa törzseket minimális gátlókoncentrációs teszteknek vetjük alá, hogy megvizsgáljuk a standard antibiotikumokkal szembeni érzékenységüket, és Multi-locus Sequence Typing segítségével elemezzük klonalitásukat.

Az egyes betegek törzseit, amelyek T0, T12m és T18m között klonálisak, azonnal -80°C-on tárolva, az Ospedale San Raffaele-be szállítják, ahol a szakirodalomban validált módszerekkel elemzik őket a projekt céljaira. . Elemezzük i) a P. aeruginosa törzsek fenotípusait (különösen pilus motilitás, flagellum motilitás, proteázok és piocianin szekréció és mukoiditás) a szakirodalomban validált mikrobiológiai módszerekkel, ii) a törzsek RNS-expressziós profilját. szekvenálás, iii) a génváltozatok jelenléte a törzsek teljes genomjának szekvenálásával, iv) és virulenciájuk a cisztás fibrózis transzmembrán konduktancia szabályozó fehérje expressziójára gyakorolt ​​hatás mérésével a cisztás fibrózis bronchiális epiteliális sejtvonalakban.

A végső cél az lesz, hogy i) a Kaftrio-kezelést követően a T0-ban izolált P. aeruginosa törzsek, valamint a T12m és T18m után izolált P. aeruginosa törzsek fenotípusai közötti különbségek értékelése; ii) a T0 és a T12m és T18m időpontban izolált P. aeruginosa törzsek antibiotikum-érzékenységében mutatkozó különbségek értékelése; iii) értékelje a T0-nál és a T12m-nél és T18m-nél izolált P. aeruginosa törzsek expressziós profiljának különbségeit, és korrelálja azokat a légzésfunkció FEV1-ként (%) mért különbségével; iv) értékeli a génvariánsok jelenlétét a T0-nál és a T12m-nél és T18m-nél izolált törzsek között, és korrelálja azokat a légzésfunkció FEV1-ként (%) mért különbségével; v) annak meghatározása, hogy a Kaftrio-kezelés által kiváltott bakteriális fenotípusok változásai összefüggésbe hozhatók-e a P. aeruginosa alacsonyabb anti-CFTR aktivitásával.