Convalida della diagnostica basata sulle uova e dei marcatori molecolari per la diffusione della resistenza antielmintica (StarwormsWP1)

Background Gli elminti trasmessi dal suolo (STH) sono un gruppo di vermi parassiti che infettano milioni di bambini nei paesi subtropicali e tropicali, causando malnutrizione, arresto della crescita, ritardo mentale e deficit cognitivi. Per controllare la morbilità dovuta a questi vermi, vengono implementati programmi di sverminazione nelle scuole, in cui vengono somministrati farmaci antielmintici ai bambini senza diagnosi preventiva. La continua lotta contro questi vermi è aiutata dalla Dichiarazione di Londra sulle malattie tropicali trascurate, che aiuta a sostenere ed espandere il programma globale di donazione di farmaci, determinando una crescita senza precedenti dei programmi di sverminazione. per illustrare, negli ultimi quattro anni la copertura della somministrazione di farmaci di massa (MDA) è raddoppiata dal 30 al 60% e sono in corso sforzi globali per raggiungere il traguardo del 75% entro il 2020.

Minacce Mentre il lodevole obiettivo a lungo termine è quello di eliminare gli STH come problema di salute pubblica entro il 2020, e infine dichiarare aree geografiche mirate libere da infezioni, questo alto grado di pressione sui farmaci rende i programmi di vermifugo vulnerabili allo sviluppo della resistenza antielmintica perché i programmi fare affidamento su un solo farmaco con efficacia a volte subottimale e non c'è disponibilità di farmaci alternativi.

Sfide

Al momento non esiste un sistema di sorveglianza per monitorare l'emergere e la diffusione della resistenza antielmintica. Non è chiaro fino a che punto l'efficacia dei farmaci possa essere diminuita e se la resistenza antielmintica sia già presente. Tuttavia, lo sviluppo di un tale sistema non è semplice. I programmi di sverminazione in genere operano in contesti con risorse limitate e i gestori dei programmi richiedono una certa flessibilità per ridurre al minimo le risorse finanziarie e tecniche, garantendo al contempo una valutazione affidabile dell'efficacia del farmaco. Gli ostacoli più importanti per monitorare a livello globale i modelli di modifica dell'efficacia dei farmaci e la diffusione della resistenza antielmintica sono i seguenti:

• la carenza di laboratori diagnostici con personale esperto per eseguire le indagini e analizzare e riportare i dati ottenuti
• l'assenza di un sistema di garanzia della qualità che garantisca risultati verificabili
• la mancanza di orientamento nella progettazione delle indagini man mano che i programmi progrediscono
• la mancanza di dati a sostegno della validità dei marcatori molecolari per rilevare la resistenza antielmintica negli STH umani
• la mancanza di strumenti sensibili e point-of-care che consentano il rilevamento di basse frequenze di resistenza antielmintica Obiettivo principale Questo progetto mira a rafforzare il monitoraggio e la sorveglianza dell'efficacia dei farmaci e della resistenza antielmintica nei programmi STH. Pertanto, sosterrà i programmi di sverminazione nella loro ricerca per eliminare gli STH come problema di salute pubblica entro il 2020.

Gli obiettivi specifici della prima parte del progetto sono la validazione di strumenti diagnostici per monitorare l'efficacia dei farmaci e la diffusione della resistenza antielmintica e la validazione di marcatori molecolari per la resistenza al benzimidazolo.

Protocollo di studio Questo studio sarà condotto in quattro diversi siti in Africa (Etiopia e Tanzania), Asia (PDR del Laos) e America Latina (Brasile). La selezione di questi siti si basa sulla loro esperienza nella valutazione dell'efficacia dei farmaci e sulla valutazione delle prestazioni degli strumenti diagnostici, sulla disponibilità di strutture diagnostiche ben attrezzate e di personale qualificato e sulla loro storia nazionale di MDA.

Lo studio si concentrerà sui bambini in età scolare (dai 5 ai 14 anni). Al basale verrà chiesto ai soggetti di fornire un campione di feci recente (entro 4 ore) di almeno 9 grammi. Tutti i campioni di feci verranno processati utilizzando il FECPAKG2, uno striscio spesso Kato-Katz duplicato (la tecnica di conteggio delle uova fecali (FEC) più comunemente applicata) e Mini-Flotac (una nuova tecnica che ha una sensibilità almeno uguale a quella di Kato- Katz). A tutti i bambini che forniscono un campione di feci verrà fornita una singola dose orale di ALB 400 mg sotto supervisione. Da quattordici a 21 giorni dopo il trattamento, verrà raccolto un secondo campione di feci da tutti i bambini che si sono dimostrati positivi per qualsiasi specie STH al basale per determinare le FEC.

Ad ogni campionamento, 2x 1 grammo di feci vengono conservati in un conservante per l'analisi molecolare a valle. Le feci immagazzinate verranno spedite in Belgio per l'estrazione del DNA e l'analisi qPCR. Un sottoinsieme dei campioni sarà analizzato mediante Pyrosequencing per valutare i polimorfismi a singolo nucleotide nel gene della b-tubulina.

Sarà inoltre eseguito il pooling dei campioni memorizzati per confrontarli con i valori ottenuti dall'analisi dei singoli campioni.

Trattamento dei dati I dati verranno prima registrati su apposite schede di registrazione dello studio. Questi risultati verranno quindi inseriti nei file Excel progettati su misura da due diversi addetti all'inserimento dati per ridurre al minimo gli errori nei dati dovuti all'inserimento errato dei dati.

Gestione degli studiGli studi nei diversi siti saranno organizzati e supportati dall'Università I membri del team di progetto si recheranno in ogni singolo sito di sperimentazione per addestrare il personale locale nelle diverse tecniche coprologiche e per fargli conoscere il protocollo ei documenti della sperimentazione.