Identificazione delle cellule regolatorie B mediante citometria a flusso

L'immunoterapia allergenica (AIT) è un trattamento modificante per la malattia per le malattie allergiche che promuove la tolleranza al sistema immunitario, vale a dire riduce le manifestazioni cliniche di allergia ed è l'unico trattamento efficace noto per prevenire l'anafilassi nei pazienti che in precedenza avevano reazioni gravi ai veleni di insetti. AIT induce una varietà di cambiamenti del sistema immunitario per facilitare questo processo, un meccanismo è la produzione di una popolazione di globuli bianchi chiamati cellule b-regolatorie (Bregs). Queste cellule rilasciano una sostanza chimica chiamata Interleukin-10 (IL-10) che inibisce (controlla) la risposta immunitaria allergica. Il successo di AIT è difficile da stabilire/monitorare durante il trattamento. Spesso il successo del trattamento può essere stabilito solo alla fine di un lungo periodo di trattamento (in genere 3 anni) e attualmente i medici si basano sui sintomi del paziente sull'esposizione a ulteriori allergeni. Pertanto è necessario identificare un marcatore (biomarker) che può essere testato durante il trattamento per aiutare i medici a stabilire in un momento precedente, se l'AIT mostra il successo o se è richiesta una modifica al trattamento. Questa ricerca misurerà la produzione di Breg e IL-10 in pazienti prima, in più punti durante e dopo il completamento di AIT, per stabilire se esiste una relazione tra la concentrazione di Breg/IL-10 e il successo o il fallimento di AIT nel controllo dei sintomi del paziente di allergia. La speranza è che la misurazione di Breg possa essere utilizzata in futuro come biomarcatore per l'efficacia dell'AIT e quindi fornire prove del successo AIT prima degli attuali protocolli o stabilire il fallimento di AIT e quindi accelerare un cambiamento nel trattamento. Quest'ultimo probabilmente comporterà il risparmio nel perseguimento di un trattamento che non funziona, ma anche per la comprensione quando il trattamento ha già raggiunto l'efficacia ottimale e può essere fermato.

Obiettivo generale:

Sviluppare un test di citometria a flusso per l'identificazione e la quantificazione delle cellule regolatori B umane per consentire la valutazione del loro potenziale ruolo di biomarcatore di efficacia del trattamento nell'immunoterapia specifica per allergeni.

Obiettivi primari:

1. Identificazione di un biomarcatore che definisce il successo dell'immunoterapia allergene
2. Sviluppo di un nuovo test di citometria a flusso per rilevare e quantificare le cellule b-regolatorie nel sangue intero/sangue periferico mononucleare (PBMC) isolato
3. Determinare gli intervalli di riferimento per la quantificazione delle cellule Breg nei gruppi di test e controllo utilizzando misure parametriche o non parametriche convenzionali, a seconda delle caratteristiche dei dati ottenuti

Obiettivi secondari:

1. Valutazione delle prestazioni dei metodi di citometria a flusso secondo il solito protocollo di laboratorio
2. Confronto della quantificazione delle cellule Breg nel gruppo di controllo versetti il ​​gruppo di test e il gruppo di test ai versetti di base su AIT
3. Confronto della quantificazione delle cellule Breg nei pazienti che ricevono AIT sottocutanei e sublinguali
4. Confronto di anticorpi bloccanti specifici per allergeni (IgG4 specifici per allergeni) nel gruppo di test al basale e in quelli su AIT
5. Valutare la correlazione della quantificazione degli anticorpi di blocco dell'allergene con variazioni delle concentrazioni di cellule regolatori B nel sangue intero