Effetto dell'assunzione dietetica di concentrati di alimenti integrali essiccati (Juice Plus) sugli esiti clinici dopo la terapia parodontale: uno studio pilota (BHAM-NSA-05-01)

Questo sarà uno studio longitudinale, randomizzato, stratificato (per età), in doppio cieco, a 3 bracci sulla terapia parodontale non chirurgica. I 3 bracci saranno:

1. Daily Juice Plus+ con 2 capsule di verdura, 2 di frutta e 2 di bacche (gruppo di test 1)
2. Daily Juice Plus+ con 2 capsule di verdura e 2 di frutta e 2 di placebo (gruppo di test 2)
3. Placebo quotidiano sotto forma di 6 capsule (gruppo di controllo)

I volontari riceveranno una terapia parodontale non chirurgica standard da un singolo operatore (igienista dello studio) e le misure dei risultati saranno valutate al basale, 3, 6 e 9 mesi dopo la terapia. Le capsule verranno assunte con il cibo due volte al giorno (3 capsule al mattino e 3 capsule al pomeriggio).

60 pazienti non fumatori con parodontite cronica moderata/grave saranno reclutati dalle cliniche parodontali ambulatoriali del Birmingham's Dental Hospital. I soggetti avranno un'età compresa tra 30 e 60 anni, maschi o femmine. La parodontite cronica (CP) sarà definita come la presenza di 2 o più siti per quadrante con tasche o perdita di attacco interprossimale > 6 mm e 1/3 di perdita ossea radiografica.

Saranno applicati i seguenti criteri di esclusione:

• Pazienti con malattia aggressiva
• Pazienti con disabilità fisica o mentale
• Donne incinte
• Pazienti la cui storia medica può metterli a rischio di complicanze da terapia parodontale (ad es. necessità di copertura antibiotica, soggetti warfarinizzati)
• Pazienti che assumono farmaci antimicrobici o antinfiammatori a lungo termine
• Pazienti incapaci di deglutire le capsule di Juice Plus+
• Pazienti impossibilitati a fornire il consenso informato
• Attuali fumatori
• Pazienti che assumono regolarmente integratori vitaminici

Misure di esito Le misure di esito primarie della guarigione saranno l'aumento del livello di attacco e la riduzione della profondità di sondaggio della tasca a 3 mesi. Inoltre, la riduzione della percentuale di siti sanguinanti al sondaggio (BOP - misurata dicotomicamente a 4 siti per dente) dai tessuti marginali e il rossore gengivale valutato visivamente (Modified Gingival Index-MGI) saranno utilizzati come misura primaria dell'infiammazione tissutale.

Le misure di esito secondarie saranno la riduzione della percentuale di siti con placca rivelata (PS - misurata dicotomicamente a 4 siti per dente), la riduzione del volume del liquido crevicolare gengivale (GCF), l'aumento del GCF e del TAOC plasmatico.

Le misure di sondaggio saranno eseguite in duplicato con una sonda a forza costante (UNC PC15) e dove sorgono differenze tra le misure duplicate superiori a 1 mm, verrà presa una terza misura. Verrà registrata la media delle due misure più vicine. Le misure medie dell'attaccamento al sondaggio e della profondità della tasca per soggetto saranno calcolate ad ogni punto di esame (basale, 3, 6 e 9 mesi dopo la terapia).

I punteggi di sanguinamento e placca saranno espressi come medie per soggetto in ogni punto di esame e punteggi MGI come % siti con codici 0, 1, 2 e 3 per soggetto.

Campioni I campioni GCF saranno raccolti (30s) utilizzando strisce Periopaper dagli aspetti mesio-buccali di 3 profondi (>6 mm) e 3 superficiali (

I campioni di sangue (2 x 7 ml) saranno raccolti in provette Vacutainer™ per plasma. Il plasma impoverito di piastrine sarà preparato mediante centrifugazione a 1000g per 30 minuti (4C). Il plasma sarà aliquotato in fiale criogeniche e metà sarà congelata sotto azoto liquido fino al dosaggio del TOAC. La restante metà verrà aliquotata in due fiale criogeniche da 1,5 ml e conservata a -80°C per un uso futuro (ad es. saggio per l'attività dei carotenoidi). Tutti i campioni saranno conservati al buio e al riparo dalla luce solare diretta in tutte le fasi della manipolazione.

Saggio chemiluminescente potenziato (ECL) per la capacità antiossidante totale (TAOC) Il saggio ECL per la capacità AO totale (TAOC) è stato sviluppato dal nostro gruppo 12 e si basa sull'ossidazione catalizzata dalla perossidasi di rafano del luminolo mediante perossido di idrogeno. Per quantificare l'emissione luminosa viene utilizzato un luminometro BioOrbit 1250 (Labtech International, Sussex, Regno Unito), interfacciato con un software per PC che consente la registrazione/visualizzazione simultanea di un massimo di 5000 punti dati in un periodo massimo di 1 ora. Il potenziatore, p-iodofenolo, non è più disponibile in commercio ma viene sintetizzato "in casa". Le capacità antiossidanti dei campioni di prova saranno derivate da curve standard prodotte utilizzando l'analogo idrosolubile della vitamina E, l'acido 6-idrossi-2,5,7,8, tetrametilcroman-2-carbossilico (Trolox; intervallo di dosaggio: 0,0625-1,6 nanomoli) che verrà eseguito prima e dopo i campioni di prova ei risultati espressi come concentrazione (µM Trolox equivalenti/L; Teq/L).

Tutti i campioni di ciascun soggetto durante lo studio (n=12: 8 GCF - comprendenti 1 pool da siti profondi e 1 pool da siti poco profondi @ ciascuna delle 4 visite e 4 campioni di plasma) saranno analizzati lo stesso giorno e nello stesso laboratorio condizioni, in duplice copia (totale = 24 per soggetto). Ogni giorno verranno analizzati i campioni di un soggetto del gruppo di test 1, di un soggetto del gruppo di test 2 e di un soggetto di controllo. Tutti i test saranno completati in 10-12 ore di laboratorio al giorno e oltre 20 giorni di laboratorio (72 test al giorno e 36 standard = 108 test al giorno).

I campioni GCF saranno scongelati, eluiti in tampone di corsa per 30 minuti prima dell'analisi, quando aliquote da 100 ul saranno analizzate in duplicato. I campioni di plasma saranno diluiti 1:10 in PBS/BSA running buffer e dosati come aliquote da 20ul in duplicato.

Le calibrazioni verranno eseguite all'inizio, a metà e alla fine di ogni giornata.

Analisi statistica Questo sarà eseguito da uno statistico indipendente nominato da National Safety Associates Inc. Tutte e tre le ipotesi dello studio presumono che due soggetti con lo stesso livello di attacco iniziale e profondità della tasca avrebbero lo stesso livello di attacco finale e profondità della tasca previsti, ad eccezione dell'effetto dei rispettivi trattamenti. Pertanto, le prime due ipotesi saranno studiate utilizzando l'analisi della covarianza, con il valore a 3 mesi del livello di attaccamento o della profondità della tasca come risposta, il valore iniziale come covariata e il trattamento come fattore di studio. L'ipotesi 3 sarà studiata in modo simile, tranne per il fatto che la risposta sarà la misurazione a 9 mesi.

Per testare le ipotesi 1 e 3, il gruppo Placebo sarà confrontato con i due gruppi di trattamento attivo combinati. Per verificare l'ipotesi 2, i due gruppi di trattamento attivo saranno confrontati.

Verranno utilizzati display grafici e modelli di regressione per indagare se la risposta ai trattamenti attivi è correlata all'assunzione di frutta e verdura di un soggetto misurata dai dati della scala analogica visiva.

Gli esiti secondari saranno analizzati in modo simile.

Verranno eseguite sia analisi Intention-To-Treat (ITT) che analisi Per Protocol (PP). Nelle analisi ITT verranno utilizzati i dati di tutti i soggetti, indipendentemente dall'aderenza al trattamento. Nelle analisi PP, i modelli statistici includeranno misure di aderenza.

Tutti i test statistici saranno bilaterali ed eseguiti al livello di significatività 0,05. Le analisi saranno eseguite utilizzando SAS per Windows, versione 8.2 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) e SYSTAT, versione 10.2.01 (SYSTAT Software Inc., Point Richmond, CA, USA).

Dati mancanti: le misure di esito primario sono prese come parte dell'assistenza standard durante la revisione di 9 mesi dei soggetti. Non vi è alcun motivo per cui i dati mancanti siano correlati al trattamento o all'esito. Verificheremo se i dati mancanti sono correlati all'assegnazione del trattamento, ma in caso contrario ci aspettiamo di poter ignorare i valori mancanti nelle analisi perché "mancheranno completamente a caso".

Violazione del codice I codici saranno tenuti sigillati e chiusi a chiave nell'ufficio del PI e non saranno violati fino al completamento dell'analisi statistica.

Calcolo della potenza Poiché si tratta di uno studio pilota, non è possibile eseguire un calcolo della potenza basato sui risultati degli antiossidanti. Tuttavia, utilizzando la misura dell'esito primario della riduzione della profondità della tasca al sondaggio e supponendo che possiamo ottenere ulteriori riduzioni PPD di 0,5 mm (o 0,4 mm) rispetto alla sola terapia non chirurgica attraverso l'integrazione con le capsule Juice Plus+, allora avremo una probabilità dell'80% di trovando una differenza significativa a p

Aderenza del paziente L'aderenza all'assunzione dell'integrazione verrà verificata ad ogni visita durante la terapia attiva e di nuovo alle visite di 3, 6 e 9 mesi. Ai soggetti verrà fornita una scheda dati per registrare i giorni in cui hanno perso l'assunzione di integratori. Inoltre, una fiala criogenica contenente un minimo di 500 ul di plasma verrà archiviata al basale, 3, 6 e 9 mesi dopo la terapia per ciascun soggetto e potrà essere utilizzata per il dosaggio dei carotenoidi per la verifica biochimica dell'aderenza.

Dichiarazione GCP Questo studio sarà condotto in conformità con gli standard internazionali di buona pratica clinica (GCP).

Documentazione e tenuta dei registri Lo sperimentatore conserverà e archivierà tutti i documenti ei dati di origine (grezzi) relativi allo studio per un periodo minimo di 10 anni.

Rapporto sullo studio clinico L'interpretazione dei dati sarà responsabilità congiunta dello sperimentatore e del team dello studio. Una relazione finale sarà redatta per iscritto ed è responsabilità dello stesso gruppo e includerà:-

• adeguate procedure statistiche,
• qualsiasi deviazione dal protocollo;
• conclusioni circa l'efficacia dei trattamenti e il significato di eventuali differenze tra loro.