Attività dell'enzima prolidasi nei pazienti con ictus

L'ictus ischemico costituisce circa l'80-85% di tutti i casi di ictus ed è causato dall'interruzione del flusso sanguigno cerebrale a causa di un coagulo di sangue. A causa della produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) e della sua attività metabolita ossidativa, il cervello è altamente sensibile allo stress ossidativo. Questa caratteristica gioca un ruolo importante nella patogenesi delle lesioni cerebrali ischemiche ed emorragiche. La prolidasi, che è un'esopeptidasi citosolica e un membro della famiglia delle metalloproteinasi della matrice (MMP), scinde gli imminodipeptidi dalle estremità carbossi-terminali della prolina o dell'idrossiprolina ed è attivamente coinvolta nel metabolismo del collagene. È stato dimostrato che l'attività cerebrale delle MMP è correlata allo stress nutritivo/ossidativo e aumenta durante la riperfusione. Inoltre, nei pazienti con ictus sono stati segnalati livelli sierici elevati di MMP. I biomarcatori che predicono l'esito e l'insorgenza di ictus ischemico sono di fondamentale importanza per la prevenzione e il trattamento. Tuttavia, l'attività della prolidasi sierica (SPA) non è stata precedentemente valutata nei pazienti con ictus ischemico acuto (AIS) a nostra conoscenza. Pertanto, in questo studio, si mira a indagare se i livelli di SPA nei pazienti con AIS possano essere utilizzati come potenziale marker diagnostico e prognostico. Nello studio, 37 pazienti di età compresa tra 20 e 85 anni che sono stati ricoverati entro 24 ore dall'insorgenza di AIS sono stati valutati in modo prospettico. Il gruppo di controllo era composto da 37 volontari sani di età simile senza alcuna malattia. È stato eseguito un esame fisico completo consistente in un esame neurologico, biochimica del sangue e test emocromocitometrici, elettrocardiografia e radiografia del torace postero-anteriore per tutti i pazienti. I pazienti affetti da AIS sono stati sottoposti a ecocardiografia transtoracica, tomografia computerizzata multistrato (TC) ed ecografia Doppler bilaterale dell'arteria carotideo-vertebrale. I punteggi del National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS), misurati a 24 ore, 48 ore e 28 giorni dopo l'ictus, sono stati utilizzati per determinare la gravità dell'ictus. La classificazione dei sottotipi di ictus ischemico è stata effettuata secondo il Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment ( TOAST), come cardioembolia, aterosclerosi delle grandi arterie, occlusione delle piccole arterie, ictus di altra causa determinata o causa indeterminata. Il metodo di misurazione per SPA è stato definito da Myara et al. Il metodo ottimizzato di Özcan et al. era usato. L'attività prolidasica è stata valutata con metodo spettrofotometrico, misurando i livelli di prolina. In breve, 500 μL di soluzione di pre-incubazione (tampone Tris cloridrato da 50 mmol/L a potenza di idrogeno (pH) 7,8, con 1 mmol/L di glutatione antiossidante endogeno (GSH), 5 mmol/L di cloruro di manganese (II) (MnCl2), e 0,1% Triton X-100) e 100 μL di siero sono stati miscelati; questa miscela è stata quindi pre-incubata per 3 h a 37°C. Un volume di 100 μL di siero pre-incubazione è stato aggiunto a 100 μL 144 mmol/L di soluzione Gly-Pro e questa miscela è stata incubata per 30 minuti a 37°C. Dopo l'incubazione, 1 ml di soluzione di acido tricloroacetico 0,45 mol/L è stato aggiunto rapidamente alla provetta di incubazione e la reazione di incubazione è stata interrotta. Questa miscela è stata centrifugata a 1500 rpm per 5 minuti e sono stati rimossi 500 μL di surnatante.