Prolidaasientsyymiaktiivisuus aivohalvauspotilailla

Iskeeminen aivohalvaus muodostaa noin 80-85 % kaikista aivohalvaustapauksista ja johtuu veritulpan aiheuttamasta aivoverenkierron katkeamisesta. Reaktiivisten happilajien (ROS) tuotannon ja sen oksidatiivisen metaboliittiaktiivisuuden vuoksi aivot ovat erittäin herkkiä oksidatiiviselle stressille. Tällä ominaisuudella on tärkeä rooli iskeemisten ja verenvuotoisten aivovaurioiden patogeneesissä. Prolidaasi, joka on sytosolinen eksopeptidaasi ja matriksin metalloproteinaasien (MMP) perheen jäsen, pilkkoo iminodipeptidejä proliinin tai hydroksiproliinin karboksiterminaalisista päistä ja on aktiivisesti mukana kollageeniaineenvaihdunnassa. On osoitettu, että aivojen MMP-aktiivisuus korreloi ravitsemus-/hapetusstressin kanssa ja lisääntyy reperfuusion aikana. Lisäksi aivohalvauspotilailla on raportoitu kohonneita seerumin MMP-tasoja. Biomarkkerit, jotka ennustavat iskeemisen aivohalvauksen lopputulosta ja esiintymistä, ovat ratkaisevan tärkeitä ennaltaehkäisyssä ja hoidossa. Seerumin prolidaasiaktiivisuutta (SPA) ei ole kuitenkaan tiedossamme aiemmin arvioitu akuuttia iskeemistä aivohalvausta (AIS) sairastavilla potilailla. Siksi tässä tutkimuksessa pyritään tutkimaan, voidaanko AIS-potilaiden SPA-tasoja käyttää mahdollisena diagnostisena ja prognostisena markkerina. Tutkimuksessa oli mukana 37 potilasta iältään 20–85 vuotta, jotka otettiin hoitoon 24 tunnin sisällä AIS-taudin alkamisesta. arvioitiin ennakoivasti. Kontrolliryhmä koostui 37 terveestä, saman ikäisestä vapaaehtoisesta ilman sairautta. Kaikille potilaille tehtiin kattava fyysinen tutkimus, joka sisälsi neurologisen tutkimuksen, veren biokemian ja verenkuvatutkimukset, EKG:n sekä rintakehän posteriorisen ja anteriorisen röntgenkuvan. AIS-potilaille tehtiin transthorakaalinen kaikukardiografia, monileiketietokonetomografia (CT) ja molemminpuolinen kaula- ja nikamavaltimon Doppler-ultraääni. Aivohalvauksen vakavuuden määrittämiseen käytettiin National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS) -pisteitä, jotka mitattiin 24 tuntia, 48 tuntia ja 28 päivää aivohalvauksen jälkeen. Iskeemisen aivohalvauksen alatyyppien luokittelu tehtiin Trial of Org 10172 -tutkimuksen mukaisesti Acute Stroke Treatment -tutkimuksessa ( TOAST) kriteereitä, kuten kardioembolia, suurten valtimoiden ateroskleroosi, pienten valtimoiden tukkeuma, muusta määritetystä syystä johtuva aivohalvaus tai määrittelemätön syy. SPA:n mittausmenetelmän määrittelivät Myara et ai. Özcanin et ai. optimoitu menetelmä. käytettiin. Prolidaasiaktiivisuus arvioitiin spektrofotometrisellä menetelmällä proliinitasoja mittaamalla. Lyhyesti, 500 μl esi-inkubointiliuosta (50 mmol/L Tris-hydrokloridipuskuria vetyteholla (pH) 7,8, jossa on 1 mmol/L endogeenistä antioksidanttia glutationia (GSH), 5 mmol/l mangaani(II)kloridia (MnCl2), ja 0,1 % Triton X-100) ja 100 µl seerumia sekoitettiin; tätä seosta esi-inkuboitiin sitten 3 tuntia 37 °C:ssa. 100 µl:n tilavuus esi-inkubaatioseerumia lisättiin 100 µl:aan 144 mmol/l Gly-Pro-liuosta, ja tätä seosta inkuboitiin 30 minuuttia 37 °C:ssa. Inkuboinnin jälkeen 1 ml 0,45 mol/l trikloorietikkahappoliuosta lisättiin nopeasti inkubointiputkeen ja inkubointireaktio pysäytettiin. Tätä seosta sentrifugoitiin nopeudella 1500 rpm 5 minuuttia ja 500 µl supernatanttia poistettiin.