Prolidase-enzymactiviteit bij patiënten met een beroerte

Ischemische beroerte vormt ongeveer 80-85% van alle gevallen van beroerte en wordt veroorzaakt door de onderbreking van de cerebrale bloedstroom als gevolg van een bloedstolsel. Vanwege de productie van reactieve zuurstofspecies (ROS) en de oxidatieve metabolietactiviteit ervan, zijn de hersenen zeer gevoelig voor oxidatieve stress. Dit kenmerk speelt een belangrijke rol bij de pathogenese van ischemisch en hemorragisch hersenletsel. Prolidase, een cytosolische exopeptidase en lid van de matrix metalloproteïnase (MMP) familie, splitst iminodipeptiden van carboxy-terminale uiteinden van proline of hydroxyproline en is actief betrokken bij het collageenmetabolisme. Er is aangetoond dat MMP-activiteit in de hersenen gecorreleerd is met voedings-/oxidatieve stress en toeneemt tijdens reperfusie. Bovendien zijn bij patiënten met een beroerte verhoogde MMP-serumspiegels gemeld. Biomarkers die de uitkomst en het optreden van een ischemische beroerte voorspellen, zijn van cruciaal belang voor preventie en behandeling. De activiteit van serumprolidase (SPA) is echter niet eerder beoordeeld bij patiënten met een acute ischemische beroerte (AIS), voor zover wij weten. Daarom is het in deze studie bedoeld om te onderzoeken of SPA-niveaus bij AIS-patiënten kunnen worden gebruikt als een potentiële diagnostische en prognostische marker. werden prospectief geëvalueerd. De controlegroep bestond uit 37 gezonde vrijwilligers van vergelijkbare leeftijd zonder enige ziekte. Er werd een uitgebreid lichamelijk onderzoek uitgevoerd, bestaande uit een neurologisch onderzoek, bloedbiochemie en bloedtellingstests, elektrocardiografie en een posterior-anterieure thoraxfoto voor alle patiënten. AIS-patiënten ondergingen transthoracale echocardiografie, multi-slice computertomografie (CT) en bilaterale halsslagader-wervelslagader Doppler-echografie. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS)-scores, gemeten 24 uur, 48 uur en 28 dagen na een beroerte, werden gebruikt om de ernst van de beroerte te bepalen. De classificatie van ischemische beroerte-subtypes werd uitgevoerd volgens de Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment ( TOAST) criteria, zoals cardio-embolie, atherosclerose van de grote slagader, occlusie van de kleine slagader, beroerte met een andere vastgestelde oorzaak of onbepaalde oorzaak. De meetmethode voor SPA werd gedefinieerd door Myara et al. De geoptimaliseerde methode van Özcan et al. was gebruikt. Prolidase-activiteit werd geëvalueerd met een spectrofotometrische methode, door de prolineniveaus te meten. In het kort: 500 μL pre-incubatieoplossing (50 mmol/L Tris-hydrochloridebuffer op waterstofvermogen (pH) 7,8, met 1 mmol/L endogene antioxidant glutathion (GSH), 5 mmol/L mangaan(II)chloride (MnCl2), en 0,1% Triton X-100) en 100 µl serum werden gemengd; dit mengsel werd vervolgens 3 uur voorgeïncubeerd bij 37°C. Een volume van 100 μl pre-incubatieserum werd toegevoegd aan 100 μl 144 mmol/l Gly-Pro-oplossing en dit mengsel werd gedurende 30 minuten bij 37°C geïncubeerd. Na de incubatie werd snel 1 ml 0,45 mol/L trichloorazijnzuuroplossing aan de incubatiebuis toegevoegd en werd de incubatiereactie gestopt. Dit mengsel werd gedurende 5 minuten bij 1500 rpm gecentrifugeerd en 500 μl supernatant werd verwijderd.