Endometriosi e disbiosi peritoneale

L'obiettivo principale del progetto è analizzare il microbioma intestinale, peritoneale e uterino in donne sottoposte a laparoscopia per endometriosi (braccio 1) o infertilità idiopatica (braccio 2). Obiettivi dettagliati sono: i) analisi della correlazione tra la composizione del microbioma intestinale, peritoneale e uterino con lo stadio dell'endometriosi secondo ASRM, ii) confronto qualitativo del microbioma intestinale e peritoneale con il microbioma della cavità uterina nelle donne con endometriosi vs .infertilità idiopatica, iii) analisi della correlazione tra la composizione del microbioma intestinale, peritoneale e uterino con l'intensità del dolore e l'infertilità, iv) confrontando la qualità della vita in entrambi i bracci e valutandone la correlazione con il microbioma locale. La qualità della vita sarà valutata in entrambi i bracci utilizzando il questionario SF-36 e quindi confrontata. Il questionario auto-riportato SF-36 copre otto domini di salute: funzionamento fisico (10 item), dolore corporeo (2 item), limitazioni di ruolo dovute a problemi di salute fisica (4 item), limitazioni di ruolo dovute a problemi personali o emotivi (4 item ), benessere emotivo (5 voci), funzionamento sociale (2 voci), energia/affaticamento (4 voci) e percezioni generali sulla salute (5 voci). I punteggi per ogni dominio vanno da 0 a 100, con un punteggio più alto che definisce uno stato di salute più favorevole. Il gruppo di studio sarà composto da donne in età fertile, sottoposte a trattamento chirurgico per endometriosi pelvica o infertilità idiopatica. Prima dell'intervento verrà prelevato un campione di feci per l'esame del microbioma intestinale. Durante la laparoscopia programmata, oltre alla procedura pianificata, che è lo scopo del ricovero, verrà eseguita una biopsia di aspirazione endometriale e verrà raccolto fluido dalla cavità peritoneale e/o fluido dalla cisti ovarica per l'analisi del microbioma locale. I materiali biologici (feci, fluido cistico peritoneale/ovarico, aspirato endometriale) saranno protetti e quindi sottoposti ad analisi molecolare utilizzando il metodo Next Generation Sequencing (NGS). Le fasi comprenderanno: i) isolamento del DNA batterico da materiale biologico, ii) preparazione delle librerie per il sequenziamento, inclusa l'esecuzione delle metodiche PCR e nested-PCR su isolati di DNA batterico dai campioni di materiale biologico testati, iii) purificazione di prodotti di amplificazione, indicizzazione, validazione della concentrazione di ampliconi, pooling e denaturazione delle librerie, iv) standardizzazione e ottimizzazione della procedura per l'isolamento del DNA metagenomico batterico da materiali biologici da intestino, cavità peritoneale, cavità uterina e tessuti endometriali, v) standardizzazione del metodo nested-PCR su isolati di DNA batterico dai materiali biologici testati, vi) invio di campioni per il sequenziamento. I dati di sequenziamento saranno sottoposti ad analisi bioinformatica per ottenere profili batterici (la composizione percentuale della popolazione batterica locale per phyla e generi). L'obiettivo è quello di caratterizzare il microbioma dell'intestino, del peritoneo e della cavità uterina nelle donne sottoposte a trattamento chirurgico per endometriosi o diagnostica invasiva per infertilità idiopatica, e confrontare le popolazioni batteriche presenti in queste sedi, che possono anche fornire informazioni sull'origine dei batteri nella cavità peritoneale.