Endometriose e Disbiose Peritoneal

O principal objetivo do projeto é analisar o microbioma intestinal, peritoneal e uterino em mulheres submetidas à laparoscopia devido a endometriose (braço 1) ou infertilidade idiopática (braço 2). Os objetivos detalhados são: i) análise da correlação entre a composição do microbioma intestinal, peritoneal e uterino com o estágio da endometriose de acordo com o ASRM, ii) comparação qualitativa do microbioma intestinal e peritoneal com o microbioma da cavidade uterina em mulheres com endometriose vs. .infertilidade idiopática, iii) análise da correlação entre a composição do microbioma intestinal, peritoneal e uterino com a intensidade da dor e infertilidade, iv) comparação da qualidade de vida em ambos os braços e avaliação da sua correlação com o microbioma local. A qualidade de vida será avaliada em ambos os braços usando o questionário SF-36 e, em seguida, comparada. O questionário autorreferido SF-36 abrange oito domínios de saúde: funcionamento físico (10 itens), dor corporal (2 itens), limitações de papel devido a problemas de saúde física (4 itens), limitações de papel devido a problemas pessoais ou emocionais (4 itens ), bem-estar emocional (5 itens), funcionamento social (2 itens), energia/fadiga (4 itens) e percepções gerais de saúde (5 itens). As pontuações para cada domínio variam de 0 a 100, com uma pontuação mais alta definindo um estado de saúde mais favorável. O grupo de estudo será composto por mulheres em idade reprodutiva, submetidas a tratamento cirúrgico devido à endometriose pélvica ou infertilidade idiopática. Antes da cirurgia, uma amostra de fezes será coletada para exame do microbioma intestinal. Durante a laparoscopia programada, além do procedimento planejado, que tem como objetivo a internação, será realizada biópsia aspirativa do endométrio e será coletado líquido da cavidade peritoneal e/ou líquido do cisto ovariano para análise do microbioma local. Os materiais biológicos (fezes, líquido peritoneal/cisto ovariano, aspirado endometrial) serão protegidos e, em seguida, submetidos à análise molecular usando o método de Sequenciamento de Nova Geração (NGS). As etapas incluirão: i) isolamento de DNA bacteriano de materiais biológicos, ii) preparação de bibliotecas para sequenciamento, incluindo a realização dos métodos de PCR e nested-PCR em isolados de DNA bacteriano das amostras testadas de materiais biológicos, iii) purificação de produtos de amplificação, indexação, validação da concentração de amplicons, agrupamento e desnaturação de bibliotecas, iv) padronização e otimização do procedimento para isolamento de DNA metagenômico bacteriano a partir de materiais biológicos de intestino, cavidade peritoneal, cavidade uterina e tecidos endometriais, v) padronização do método nested-PCR em isolados de DNA bacteriano dos materiais biológicos testados, vi) envio de amostras para sequenciamento. Os dados de sequenciamento serão submetidos à análise bioinformática para obtenção de perfis bacterianos (a composição percentual da população bacteriana local por filos e gêneros). O objetivo é caracterizar o microbioma do intestino, peritoneal e cavidade uterina em mulheres submetidas a tratamento cirúrgico para endometriose ou diagnóstico invasivo para infertilidade idiopática, e comparar as populações bacterianas nesses locais, o que também pode fornecer informações sobre a origem das bactérias na cavidade peritoneal.