再発 EBV 陽性リンパ腫患者に対する LMP 特異的 T 細胞 (ALCI)

アラサー (パート 1/2)

自家（または同系）または同種の LMP2A 特異的細胞傷害性 T 細胞を生成し、再発 EBV 陽性ホジキンまたは非ホジキンリンパ腫またはリンパ上皮腫の患者に養子移入します。

ＬＭＰ特異的ＣＴＬ株を開始するために、ＬＭＰ２抗原を発現するアデノウイルスベクター（Ａｄ５ｆ３５－ｐｐ６５）を、ウイルス粒子（ｖｐ）対細胞比３０，０００：１でＰＢＭＣに形質導入する。 正常なドナーからの血液サンプルの場合、PBMC の単球画分を形質導入すると、LMP2 ペプチド エピトープが発現し、PBMC の LMP2 特異的 T 細胞画分に提示されます。 このステップには、約 40 mL の血液から 20 ～ 40 x 106 の PBMC が必要です。

LMP2 特異的 T 細胞前駆体 (患者の PBMC など) を再活性化するために、より強い刺激が必要な場合は、PBMC 由来の単球をサイトカイン (GM-CSF、IL-4) と共に培養した後、 Ad5f35-LMP2 (vp:細胞比 30000:1) および TNF-α と PGE1 による成熟。 これらの成熟した、形質導入された樹状細胞は、PBMC由来のT細胞を刺激するために使用されます。 この場合、樹状細胞は約 40 mL の血液から調製され、T 細胞は 20 ～ 40 mL の血液から得られます。

LMP2 特異的 T 細胞を拡大するために、Ad5f35-LMP2 (vp:LCL 比 100,000:1) を導入した EBV 形質転換 B リンパ芽球様細胞株 (EBV-LCL) を使用します。 この伝達により、EBV-LCL は LMP2 ペプチドを T 細胞に提示できます。 EBV-LCL は、エプスタイン-バーウイルス (EBV) の臨床グレードの実験室株による感染によって PBMC-B リンパ球に由来します。 EBV-LCL を生成するには、約 5 x 106 PBMC、または 5 ～ 10 mL の血液が必要です。

CTL 培養期間の終わりに、LMP2 特異的 CTL の頻度は、利用可能な場合は四量体試薬を使用して決定されます。

ネオマイシン耐性遺伝子による形質導入 (オプション - 患者の好みとベクターの入手可能性に基づく)。 確立された CTL は、LN シリーズのレトロウイルスベクターで形質導入されます。

患者は診療所で評価され、2週間ごとに2〜4回のCTLが投与されます。 患者は、NCI Common Toxicity Criteria Scale (http://ctep.cancer.gov にあるバージョン 2.0) によって臨床毒性について監視されます。 さらに、標識細胞を投与された患者の末梢血中のマーカー遺伝子の存在をモニタリングすることにより、CTL 生存の速度論を決定します。 また、そのような試薬が利用可能なHLA型を有する患者における四量体研究により、表現型およびCTL頻度を含む免疫学的パラメーターを分析します。 機能分析は、細胞毒性または ELISPOT/ELISA アッセイによって行われます。 注入前後の末梢血中のEBV DNAレベルを比較します。 8週間の期間が臨床安全モニタリングの期間となります。 患者が部分奏効または安定した疾患を有する場合、最大 6 回の CTL の追加投与を受ける資格があり、それぞれの投与は 2 回目の注射と同じ数で構成されます。

ALCI (パート 2/2)

これは ALASCER 研究の第 2 部です。 ALCI は、LMP1 および LMP2 抗原を認識する細胞の CTL 産物を濃縮するための製造プロセスの変更を反映しています。 LMP2a と LMP1 の両方を濃縮するために必要な製造上の変更は、GMP ラボでの製造プロセス中に T 細胞を刺激するために ex vivo で使用される抗原提示細胞を形質導入するために使用される以前に使用された Ad5f35LMP2 ベクターを ALCI の Ad5f35LMP1/2 ベクターに置き換えることのみです。 .

最初は AD5f35LMP2 ベクターを使用していましたが、現在は Ad5f35LMP1/2 ベクターを使用して LMP 固有の CTL を生成しています。 私たちの予備データは、これら 2 つのベクターが同一であり、LMP2 特異的 CTL の同様の濃縮を生成することを示しています。 LMP2 のみをコードする Ad5f35 ベクターの代わりに Ad5f35LMP1/2 ベクターを使用することにより、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫の悪性細胞によって発現される両方の LMP 抗原を認識する T 細胞クローンをより濃縮する必要があります。 当社の分析戦略には、これらのベクター タイプ間の比較を実行する計画が含まれています。

ALASCER 製品と同様に、ALCI 製品は EBV 抗原に特異的な CTL 株であり続けましたが、LMP1 および LMP2 を認識する T 細胞が豊富でした。 ALASCER 製品には、他の EBV 抗原に特異的な T 細胞とともに、いくつかの LMP1 特異的 T 細胞が既に含まれており、唯一の変更はこれらの細胞の濃縮でした。 したがって、ALCI Ad5f35 LMP1/2 アデノウイルスベクターは、刺激細胞として使用される抗原提示細胞を形質導入するためだけに使用される製造プロセスの補助試薬であり、最終製品には注入されません。 このベクターはテストを完了し、ALASCER IND (#6387) の下での使用が承認されました。

さらに、ALASCER プロトコル設計は、製造プロセスに使用されるベクトルに応じて研究に別のアームを追加できるように修正され、データは個別に分析されます。

ALASCER と ALCI の両方で、細胞は解凍され、10 分かけて患者に注入されます。 最初に、T 細胞を 2 週間間隔で 2 回投与します。 2 回目の注入後、CT または MRI スキャンでリンパ腫のサイズが縮小したことが放射線科医によって評価された場合、患者は希望する場合、最大 6 回の T 細胞の追加投与を受けることができます。 これは用量漸増試験であり、一部の患者では 2 回目の投与量が 1 回目よりも多くなる可能性があることを意味します。 すべての治療は、テキサス小児病院またはメソジスト病院の細胞および遺伝子治療センターによって行われます。

患者は注射後に追跡されます。 彼らは診療所で診察を受けるか、研究看護師から 5 年間毎年連絡を受けます。 患者の体内で T 細胞がどのように機能しているかを詳しく知るために、各注入前に 20 ～ 40 mL (小さじ 4 ～ 8 杯) の血液を追加で採取し、各注入の 4 時間後 (任意) に 3-各注入の 4 日後 (任意)、その後毎週、各注入の 2 週間後 (合計 9 回)。 最後の注入から 2 週間後に再度採血し、その後 1 年間は 3 か月ごとに、その後は 5 年間は 1 年に 1 回採血します。 研究者はこの血液を使用して、T 細胞がどれくらい持続するかを調べ、患者のがんに対する免疫反応を調べます。

ALCI（拡大コホート）

試験の用量漸増安全フェーズが完了すると（すなわち、 少なくとも 3 人の患者が用量レベル 3 で治療され、治療に関連する DLT が発生していない場合)、追加の患者を用量レベル 1 で治療し、DC を使用して成熟した DC を使用して生成された CTL を受けた患者の免疫学的応答を評価する予定です。 IL-15の存在下での追加の成熟サイトカイン（IL-1bおよびIL-6）。 グループ A、B、C でそれぞれ 30 人、16 人、16 人の患者を追加で治療します。