LMP-specifické T-buňky pro pacienty s relapsem EBV-pozitivního lymfomu (ALCI)

ALASCER (část 1 ze 2)

Vytvoříme autologní (nebo syngenní) nebo alogenní LMP2A-specifické cytotoxické T-buňky a adoptivně je přeneseme pacientům s relabujícím EBV-pozitivním Hodgkinovým nebo non-Hodgkinovým lymfomem nebo lymfoepiteliomem.

Pro iniciaci LMP-specifické CTL linie budou PBMC transdukovány adenovirovým vektorem (Ad5f35-pp65) exprimujícím LMP2 antigen, v poměru virové částice (vp) k buňce 30 000:1. U krevních vzorků od normálních dárců může být transdukována monocytární frakce PBMC a bude exprimovat a prezentovat LMP2 peptidové epitopy LMP2-specifické T buněčné frakci PBMC. Tento krok bude vyžadovat 20 až 40 x 106 PBMC z přibližně 40 ml krve.

Když je k reaktivaci LMP2-specifických T buněčných prekurzorů vyžadován silnější stimul (tj. od pacientů PBMC), pak vyrobíme APC dendritických buněk kultivací monocytů odvozených od PBMC s cytokiny (GM-CSF, IL-4) a následnou transdukcí s Ad5f35-LMP2 (poměr vp:buňka 30 000:1) a zrání s TNF-a a PGE1. Tyto zralé, transdukované dendritické buňky budou použity ke stimulaci T buněk odvozených z PBMC. V tomto případě budou dendritické buňky připraveny z přibližně 40 ml krve a T buňky budou získány z 20 až 40 ml krve

K expanzi LMP2-specifických T buněk použijeme EBV-transformované B lymfoblastoidní buněčné linie (EBV-LCL) transdukované Ad5f35-LMP2 (vp:LCL poměr 100 000:1). Tato transdukce umožňuje EBV-LCL prezentovat LMP2 peptidy T buňkám. EBV-LCL jsou odvozeny z PBMC-B lymfocytů infekcí laboratorním kmenem viru Epstein-Barr (EBV) klinického stupně. K vytvoření EBV-LCL je zapotřebí asi 5 x 106 PBMC nebo 5 až 10 ml krve

Na konci období kultivace CTL bude frekvence LMP2 specifických CTL určena pomocí tetramerových činidel, pokud jsou k dispozici.

Transdukce s genem rezistence na neomycin (volitelné – na základě preference pacienta a dostupnosti vektoru). Zavedené CTL budou transdukovány retrovirovými vektory řady LN.

Pacienti budou vyšetřeni na klinice a každé dva týdny budou podávány 2-4 dávky CTL. Pacienti budou sledováni na klinickou toxicitu pomocí NCI Common Toxicity Criteria Scale (verze 2.0 umístěná na http://ctep.cancer.gov). Kromě toho určíme kinetiku přežití CTL sledováním přítomnosti markerového genu v periferní krvi u pacientů, kteří dostávají označené buňky. Budeme také analyzovat imunologické parametry včetně fenotypu a CTL frekvencí pomocí tetramerových studií u pacientů s HLA typy, kde jsou taková činidla dostupná. Funkční analýzy budou provedeny pomocí cytotoxicity nebo testů ELISPOT/ELISA. Budou porovnány hladiny EBV DNA v periferní krvi před a po infuzi. Časové období 8 týdnů bude představovat dobu pro sledování klinické bezpečnosti. Pokud pacienti měli částečnou odpověď nebo mají stabilní onemocnění, budou mít nárok na podání až 6 dalších dávek CTL, z nichž každá bude obsahovat stejný počet jako jejich druhá injekce.

ALCI (část 2 ze 2)

Toto je 2. část studie ALASCER. ALCI odráží modifikaci ve výrobním procesu pro obohacení CTL produktu o buňky rozpoznávající LMP1 i LMP2 antigen. Změna ve výrobě potřebná k obohacení o LMP2a i LMP1 spočívá pouze v nahrazení vektoru Ad5f35LMP1/2 od ALCI za dříve použitý vektor Ad5f35LMP2 používaný k transdukci buněk prezentujících antigen používaných ex vivo ke stimulaci T buněk během výrobního procesu v našich laboratořích GMP. .

Původně jsme použili vektor AD5f35LMP2 a nyní používáme vektor Ad5f35LMP1/2 ke generování LMP-specifických CTL. Naše předběžná data ukazují, že tyto dva vektory jsou identické a produkují podobné obohacení LMP2 specifických CTL. Použitím vektoru Ad5f35LMP1/2 namísto vektoru Ad5f35 kódujícího samotný LMP2 bychom měli lépe obohatit klony T buněk rozpoznávající oba antigeny LMP exprimované maligními buňkami u Hodgkinovy ​​choroby a non-Hodgkinova lymfomu. Naše analytické strategie zahrnují plány na provádění srovnání mezi těmito typy vektorů.

Stejně jako produkt ALASCER byl produkt ALCI nadále linií CTL specifickou pro antigeny EBV, ale obohacenou o T buňky rozpoznávající LMP1 i LMP2. Produkt ALASCER již obsahuje některé T buňky specifické pro LMP1 spolu s T buňkami specifickými pro jiné antigeny EBV a jedinou změnou bylo obohacení o tyto buňky. Proto je adenovirový vektor ALCI Ad5f35 LMP1/2 pomocným činidlem ve výrobním procesu používaným pouze k transdukci buněk prezentujících antigen použitých jako stimulátorové buňky a není infundován do konečného produktu. Tento vektor dokončil testování a byl schválen pro použití pod ALASCER IND (#6387).

Navíc byl upraven návrh protokolu ALASCER, aby bylo možné do studie přidat samostatné rameno v závislosti na vektoru použitém pro výrobní proces a data jsou analyzována samostatně.

V ALASCER i ALCI budou buňky poté rozmraženy a injikovány pacientovi po dobu 10 minut. Zpočátku budou podány dvě dávky T buněk s odstupem dvou týdnů. Pokud po druhé infuzi dojde ke zmenšení velikosti lymfomu na CT nebo MRI skenování, jak to posoudil radiolog, může pacient dostat až šest dalších dávek T buněk, pokud si to pacient přeje. Toto je studie s eskalací dávky, což znamená, že u některých pacientů může být druhá dávka větší než první. Všechny léčebné postupy bude poskytovat Centrum pro buněčnou a genovou terapii v Texaské dětské nemocnici nebo Metodistické nemocnici.

Po injekcích bude pacient sledován. Budou buď vidět na klinice, nebo budou kontaktováni výzkumnou sestrou ročně po dobu 5 let. Chcete-li se dozvědět více o tom, jak T buňky fungují v těle pacienta, bude odebráno dalších 20-40 ml (4-8 čajových lžiček) krve před každou infuzí a poté 4 hodiny po každé infuzi (volitelné) a 3- 4 dny po každé infuzi (volitelné) a poté jednou týdně po dobu 2 týdnů po každé infuzi (celkem 9krát). Dva týdny po poslední infuzi bude následně znovu odebrána krev a dále každé 3 měsíce po dobu 1 roku, poté jednou ročně po dobu 5 let. Vyšetřovatelé použijí tuto krev, aby zjistili, jak dlouho T buňky vydrží, a aby se podívali na imunitní odpověď na rakovinu pacienta.

ALCI (kohorta rozšíření)

Jakmile je dokončena bezpečnostní fáze studie se zvyšováním dávky (tj. jakmile byli alespoň 3 pacienti léčeni dávkou 3 a nevyskytla se žádná DLT související s léčbou), plánujeme léčit další pacienty dávkou 1, abychom vyhodnotili imunologickou odpověď u pacientů, kteří dostávají CTL, které byly vytvořeny pomocí DC vyzrálých s další maturační cytokiny (IL-lb a IL-6) v přítomnosti IL-15. Ošetříme dalších 30, 16 a 16 pacientů ve skupinách A, B a C, v tomto pořadí.