LMP-specifieke T-cellen voor patiënten met recidiverend EBV-positief lymfoom (ALCI)

ALASCER (Deel 1 van 2)

We zullen autologe (of syngene) of allogene LMP2A-specifieke cytotoxische T-cellen genereren en deze adoptief overdragen aan patiënten met gerecidiveerd EBV-positief Hodgkin- of non-Hodgkin-lymfoom of -lymfoepithelioom.

Om de LMP-specifieke CTL-lijn te initiëren, zal PBMC worden getransduceerd met een adenovirusvector (Ad5f35-pp65) die het LMP2-antigeen tot expressie brengt, bij een verhouding van viraal deeltje (vp) tot cel van 30.000:1. Voor bloedmonsters van normale donoren kan de monocytfractie van PBMC worden getransduceerd en zal LMP2-peptide-epitopen tot expressie brengen en presenteren aan de LMP2-specifieke T-celfractie van de PBMC. Deze stap vereist 20 tot 40 x 106 PBMC uit ongeveer 40 ml bloed.

Wanneer een sterkere stimulus nodig is om LMP2-specifieke T-celprecursoren te reactiveren (d.w.z. van patiënten PBMC), dan zullen we dendritische cel-APC's maken door PBMC-afgeleide monocyten te kweken met cytokines (GM-CSF, IL-4) gevolgd door transductie met Ad5f35-LMP2 (vp:celverhouding van 30000:1) en rijping met TNF-a en PGE1. Deze volgroeide, getransduceerde dendritische cellen zullen worden gebruikt om van PBMC afgeleide T-cellen te stimuleren. In dit geval worden dendritische cellen bereid uit ongeveer 40 ml bloed en de T-cellen worden afgeleid uit 20 tot 40 ml bloed

Om de LMP2-specifieke T-cellen uit te breiden, zullen we EBV-getransformeerde B-lymfoblastoïde cellijnen (EBV-LCL's) gebruiken die zijn getransduceerd met Ad5f35-LMP2 (vp:LCL-verhouding van 100.000:1). Door deze transductie kunnen de EBV-LCL's LMP2-peptiden aan de T-cellen presenteren. EBV-LCL's zijn afgeleid van PBMC-B-lymfocyten door infectie met een laboratoriumstam van klinische kwaliteit van het Epstein-Barr-virus (EBV). Er is ongeveer 5 x 106 PBMC of 5 tot 10 ml bloed nodig om de EBV-LCL te genereren

Aan het einde van de CTL-kweekperiode zal de frequentie van LMP2-specifieke CTL worden bepaald met behulp van tetrameerreagentia, indien beschikbaar.

Transductie met het neomycineresistentiegen (optioneel - op basis van de voorkeur van de patiënt en de beschikbaarheid van de vector). Gevestigde CTL's zullen worden getransduceerd met de retrovirale vectoren van de LN-serie.

Patiënten zullen in de kliniek worden geëvalueerd en om de twee weken zullen 2-4 doses CTL worden toegediend. Patiënten zullen worden gecontroleerd op klinische toxiciteit door de NCI Common Toxicity Criteria Scale (versie 2.0 op http://ctep.cancer.gov). Daarnaast zullen we de kinetiek van CTL-overleving bepalen door de aanwezigheid van het merkergen in perifeer bloed te monitoren bij patiënten die gemarkeerde cellen ontvangen. We zullen ook immunologische parameters analyseren, waaronder fenotype en CTL-frequenties, door middel van tetrameerstudies bij patiënten met HLA-types waar dergelijke reagentia beschikbaar zijn. Functionele analyses zullen uitgevoerd worden door middel van cytotoxiciteit of ELISPOT/ELISA assays. De niveaus van EBV-DNA in perifeer bloed voor en na infusie zullen worden vergeleken. Een periode van 8 weken vormt de tijd voor klinische veiligheidsbewaking. Als patiënten een gedeeltelijke respons hebben gehad of een stabiele ziekte hebben, komen ze in aanmerking voor het ontvangen van maximaal 6 extra doses CTL's, die elk uit hetzelfde aantal zullen bestaan ​​als hun tweede injectie.

ALCI (Deel 2 van 2)

Dit is het 2e deel van de ALASCER-studie. ALCI weerspiegelde modificatie in het fabricageproces om het CTL-product te verrijken voor cellen die zowel het LMP1- als het LMP2-antigeen herkennen. De wijziging in de productie die nodig is om zowel LMP2a als LMP1 te verrijken, is uitsluitend om ALCI's Ad5f35LMP1/2-vector te vervangen door de eerder gebruikte Ad5f35LMP2-vector die wordt gebruikt om de antigeenpresenterende cellen te transduceren die ex vivo worden gebruikt om de T-cellen te stimuleren tijdens het productieproces in onze GMP-laboratoria .

We gebruikten aanvankelijk de AD5f35LMP2-vector en gebruiken nu de Ad5f35LMP1/2-vector om LMP-specifieke CTL te genereren. Onze voorlopige gegevens geven aan dat deze twee vectoren identiek zijn en een vergelijkbare verrijking van LMP2-specifieke CTL produceren. Door de Ad5f35LMP1/2-vector te gebruiken in plaats van de Ad5f35-vector die alleen voor LMP2 codeert, zouden we T-celklonen beter kunnen verrijken die beide LMP-antigenen herkennen die tot expressie worden gebracht door de kwaadaardige cellen bij de ziekte van Hodgkin en non-Hodgkin-lymfoom. Onze analysestrategieën omvatten plannen om vergelijkingen uit te voeren tussen deze vectortypen.

Net als het ALASCER-product bleef het ALCI-product een CTL-lijn die specifiek is voor EBV-antigenen, maar verrijkt voor T-cellen die zowel LMP1 als LMP2 herkennen. Het ALASCER-product bevat al enkele LMP1-specifieke T-cellen samen met T-celspecifiek voor andere EBV-antigenen en de enige verandering was verrijken voor deze cellen. Daarom is de ALCI Ad5f35 LMP1/2 adenovirale vector een aanvullend reagens in het fabricageproces dat alleen wordt gebruikt om antigeenpresenterende cellen te transduceren die als stimulatorcellen worden gebruikt en wordt niet geïnfundeerd in het eindproduct. Deze vector is getest en goedgekeurd voor gebruik onder ALASCER IND (#6387).

Bovendien werd het ontwerp van het ALASCER-protocol gewijzigd om de toevoeging van een afzonderlijke arm aan het onderzoek mogelijk te maken, afhankelijk van de vector die voor het fabricageproces wordt gebruikt, en de gegevens worden afzonderlijk geanalyseerd

In zowel ALASCER als ALCI worden de cellen vervolgens ontdooid en gedurende 10 minuten in de patiënt geïnjecteerd. Aanvankelijk zullen twee doses T-cellen met een tussenpoos van twee weken worden gegeven. Als er na de tweede infusie een vermindering van de grootte van het lymfoom op CT- of MRI-scan is, zoals beoordeeld door een radioloog, kan de patiënt tot zes extra doses van de T-cellen krijgen als de patiënt dat wenst. Dit is een dosisescalatieonderzoek, wat betekent dat voor sommige patiënten de tweede dosis groter kan zijn dan de eerste. Alle behandelingen worden gegeven door het Centrum voor Cel- en Gentherapie in het Texas Children's Hospital of het Methodist Hospital.

Na de injecties wordt de patiënt gevolgd. Ze zullen ofwel in de kliniek worden gezien of gedurende 5 jaar jaarlijks worden gecontacteerd door een onderzoeksverpleegkundige. Om meer te weten te komen over de manier waarop de T-cellen in het lichaam van de patiënt werken, wordt voor elke infusie 20-40 ml (4-8 theelepels) extra bloed afgenomen en vervolgens 4 uur na elke infusie (optioneel) en 3- 4 dagen na elke infusie (optioneel) en daarna wekelijks gedurende 2 weken na elke infusie (in totaal 9 keer). Twee weken na het laatste infuus wordt dan opnieuw bloed afgenomen en daarna elke 3 maanden gedurende 1 jaar, daarna eenmaal per jaar gedurende 5 jaar. Onderzoekers zullen dit bloed gebruiken om te zien hoe lang de T-cellen meegaan en om te kijken naar de immuunrespons op de kanker van de patiënt.

ALCI (Uitbreidingscohort)

Zodra de veiligheidsfase van de dosisescalatie van het onderzoek is voltooid (d.w.z. zodra ten minste 3 patiënten zijn behandeld op dosisniveau 3 en er geen behandelingsgerelateerde DLT is opgetreden), zijn we van plan aanvullende patiënten te behandelen op dosisniveau 1 om de immunologische respons te evalueren bij patiënten die CTL krijgen die zijn gegenereerd met behulp van DC gerijpt met de aanvullende rijpingscytokinen (IL-1b en IL-6) in aanwezigheid van IL-15. We zullen nog eens 30, 16 en 16 patiënten behandelen in respectievelijk groep A, B en C.