LMP-spesifikke T-celler for pasienter med residiverende EBV-positivt lymfom (ALCI)

ALASCER (del 1 av 2)

Vi vil generere autologe (eller syngene) eller allogene LMP2A-spesifikke cytotoksiske T-celler og adoptivt overføre dem til pasienter med residiverende EBV-positivt Hodgkins eller non-Hodgkins lymfom eller lymfepitelom.

For å initiere den LMP-spesifikke CTL-linjen, vil PBMC bli transdusert med en adenovirusvektor (Ad5f35-pp65) som uttrykker LMP2-antigenet, i et viral partikkel (vp) til celleforhold på 30 000:1. For blodprøver fra normale givere, kan monocyttfraksjonen av PBMC transduseres og vil uttrykke og presentere LMP2-peptidepitoper til den LMP2-spesifikke T-cellefraksjonen av PBMC. Dette trinnet vil kreve 20 til 40 x 106 PBMC fra omtrent 40 ml blod.

Når det kreves en sterkere stimulus for å reaktivere LMP2-spesifikke T-celleforløpere (dvs. fra pasienter PBMC), vil vi lage dendritiske celle-APCer ved kultur av PBMC-avledede monocytter med cytokiner (GM-CSF, IL-4) etterfulgt av transduksjon med Ad5f35-LMP2 (vp:celleforhold på 30000:1) og modning med TNF-a og PGE1. Disse modne, transduserte dendrittiske cellene vil bli brukt til å stimulere PBMC-avledede T-celler. I dette tilfellet vil dendrittiske celler bli tilberedt fra omtrent 40 ml blod og T-cellene vil være avledet fra 20 til 40 ml blod

For å utvide de LMP2-spesifikke T-cellene vil vi bruke EBV-transformerte B-lymfoblastoidcellelinjer (EBV-LCLs) transdusert med Ad5f35-LMP2 (vp:LCL-forhold på 100 000:1). Denne transduksjonen lar EBV-LCL-ene presentere LMP2-peptider til T-cellene. EBV-LCL-er er avledet fra PBMC-B-lymfocytter ved infeksjon med en laboratoriestamme av Epstein-Barr-virus (EBV) av klinisk kvalitet. Omtrent 5 x 106 PBMC, eller 5 til 10 ml blod er nødvendig for å generere EBV-LCL

Ved slutten av CTL-kulturperioden vil frekvensen av LMP2-spesifikke CTL bli bestemt ved å bruke tetramerreagenser hvis tilgjengelig.

Transduksjon med neomycinresistensgenet (valgfritt - basert på pasientens preferanser og tilgjengeligheten av vektoren). Etablerte CTL-er vil bli transdusert med de retrovirale vektorene i LN-serien.

Pasientene vil bli evaluert i klinikken og 2-4 doser CTL vil bli administrert hver annen uke. Pasienter vil bli overvåket for klinisk toksisitet av NCI Common Toxicity Criteria Scale (versjon 2.0 på http://ctep.cancer.gov). I tillegg vil vi bestemme kinetikken til CTL-overlevelse ved å overvåke tilstedeværelsen av markørgenet i perifert blod hos pasienter som mottar markerte celler. Vi vil også analysere immunologiske parametere inkludert fenotype og CTL-frekvenser ved tetramerstudier hos pasienter som har HLA-typer der slike reagenser er tilgjengelige. Funksjonelle analyser vil bli utført ved cytotoksisitet eller ELISPOT/ELISA-analyser. Nivåene av EBV DNA i perifert blod før og etter infusjon vil bli sammenlignet. En tidsperiode på 8 uker vil utgjøre tiden for klinisk sikkerhetsovervåking. Hvis pasienter har hatt en delvis respons eller har stabil sykdom, vil de være kvalifisert til å motta opptil 6 ytterligere doser CTL, som hver vil bestå av samme antall som deres andre injeksjon.

ALCI (del 2 av 2)

Dette er den andre delen av ALASCER-studien. ALCI reflekterte modifikasjon i produksjonsprosessen for å berike CTL-produktet for celler som gjenkjenner LMP1 så vel som LMP2-antigenet. Endringen i produksjonen som kreves for å anrike for både LMP2a og LMP1, er utelukkende å erstatte ALCIs Ad5f35LMP1/2 vektor med den tidligere brukte Ad5f35LMP2 vektoren som brukes til å transdusere de antigenpresenterende cellene brukt ex vivo for å stimulere T-cellene under produksjonsprosessen i våre GMP-laboratorier .

Vi brukte først AD5f35LMP2-vektoren og bruker nå Ad5f35LMP1/2-vektoren for å generere LMP-spesifikk CTL. Våre foreløpige data indikerer at disse to vektorene er identiske og produserer lignende anrikning av LMP2-spesifikk CTL. Ved å bruke Ad5f35LMP1/2-vektoren i stedet for Ad5f35-vektoren som koder for LMP2 alene, bør vi bedre berike T-cellekloner som gjenkjenner begge LMP-antigenene uttrykt av de ondartede cellene i Hodgkins sykdom og non-Hodgkins lymfom. Våre analysestrategier inkluderer planer om å utføre sammenligninger mellom disse vektortypene.

I likhet med ALASCER-produktet fortsatte ALCI-produktet å være en CTL-linje spesifikk for EBV-antigener, men beriket for T-celler som gjenkjenner LMP1 så vel som LMP2. ALASCER-produktet inneholder allerede noen LMP1-spesifikke T-celler sammen med T-cellespesifikke for andre EBV-antigener, og den eneste endringen var berikelse for disse cellene. Derfor er ALCI Ad5f35 LMP1/2 adenoviral vektor en hjelpereagens i produksjonsprosessen som kun brukes til å transdusere antigenpresenterende celler som brukes som stimulatorceller og infunderes ikke i sluttproduktet. Denne vektoren fullførte testing og ble godkjent for bruk under ALASCER IND (#6387).

I tillegg ble ALASCER-protokolldesignet endret for å tillate tillegg av en separat arm til studien avhengig av vektoren som ble brukt for produksjonsprosessen, og dataene analyseres separat

I både ALASCER & ALCI vil cellene deretter tines og injiseres i pasienten i løpet av 10 minutter. I første omgang vil det gis to doser T-celler med to ukers mellomrom. Dersom det etter andre infusjon er en reduksjon i størrelsen på lymfomet på CT- eller MR-skanning som vurderes av en radiolog, kan pasienten få inntil seks ekstra doser av T-cellene dersom pasienten ønsker det. Dette er en doseeskaleringsstudie som betyr at for noen pasienter kan den andre dosen være større enn den første. Alle behandlingene vil bli gitt av Center for Cell and Gen Therapy ved Texas Children's Hospital eller Methodist Hospital.

Pasienten vil bli fulgt etter injeksjonene. De vil enten bli sett på klinikken eller vil bli kontaktet av en forskningssykepleier årlig i 5 år. For å lære mer om måten T-cellene fungerer på i pasientens kropp, vil det tas 20-40 ml (4-8 teskjeer) blod før hver infusjon, og deretter 4 timer etter hver infusjon (valgfritt) og 3- 4 dager etter hver infusjon (valgfritt) og deretter ukentlig i 2 uker etter hver infusjon (totalt 9 ganger). To uker etter siste infusjon vil det deretter tas blod igjen og deretter hver 3. måned i 1 år, deretter en gang i året i 5 år. Etterforskerne vil bruke dette blodet til å se hvor lenge T-cellene varer og for å se på immunresponsen på pasientens kreft.

ALCI (Ekspansjonskohort)

Når sikkerhetsfasen for doseøkning av studien er fullført (dvs. når minst 3 pasienter har blitt behandlet på dosenivå 3 og ingen behandlingsrelatert DLT har forekommet), planlegger vi å behandle ytterligere pasienter på dosenivå 1 for å evaluere den immunologiske responsen hos pasienter som mottar CTL som er generert ved bruk av DC modnet med de ytterligere modningscytokinene (IL-1b og IL-6) i nærvær av IL-15. Vi vil behandle ytterligere 30, 16 og 16 pasienter i henholdsvis gruppe A, B og C.