复发性 EBV 阳性淋巴瘤患者的 LMP 特异性 T 细胞 (ALCI)

ALASCER（第 1 部分，共 2 部分）

我们将生成自体（或同基因）或同种异体 LMP2A 特异性细胞毒性 T 细胞，并将它们过继转移至复发性 EBV 阳性霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤或淋巴上皮瘤患者。

为了启动 LMP 特异性 CTL 系，PBMC 将用表达 LMP2 抗原的腺病毒载体 (Ad5f35-pp65) 进行转导，病毒颗粒 (vp) 与细胞的比例为 30,000:1。 对于来自正常供体的血液样本，可以转导 PBMC 的单核细胞部分，并将表达 LMP2 肽表位并将其呈递给 PBMC 的 LMP2 特异性 T 细胞部分。 此步骤需要从大约 40 mL 的血液中提取 20 至 40 x 106 PBMC。

当需要更强的刺激来重新激活 LMP2 特异性 T 细胞前体（即来自患者 PBMC）时，我们将通过用细胞因子（GM-CSF、IL-4）培养 PBMC 衍生的单核细胞，然后转导来制备树突状细胞 APC Ad5f35-LMP2（vp:细胞比为 30000:1）并与 TNF-a 和 PGE1 一起成熟。 这些成熟的转导树突细胞将用于刺激 PBMC 衍生的 T 细胞。 在这种情况下，树突细胞将从约 40 mL 的血液中制备，而 T 细胞将从 20 至 40 mL 的血液中提取

为了扩展 LMP2 特异性 T 细胞，我们将使用 EBV 转化的 B 淋巴母细胞样细胞系 (EBV-LCL)，其转导有 Ad5f35-LMP2（vp:LCL 比率为 100,000:1）。 这种转导允许 EBV-LCL 将 LMP2 肽呈递给 T 细胞。 EBV-LCL 来源于 PBMC-B 淋巴细胞，通过感染临床级别的 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 实验室株。 生成 EBV-LCL 需要大约 5 x 106 PBMC，或 5 到 10 mL 的血液

在 CTL 培养期结束时，如果可用，将使用四聚体试剂确定 LMP2 特定 CTL 的频率。

使用新霉素抗性基因进行转导（可选——基于患者的偏好和载体的可用性）。 已建立的 CTL 将用 LN 系列的逆转录病毒载体转导。

患者将在诊所接受评估，每两周将给予 2-4 剂 CTL。 将通过 NCI Common Toxicity Criteria Scale（位于 http://ctep.cancer.gov 的 2.0 版）监测患者的临床毒性。 此外，我们将通过监测接受标记细胞的患者外周血中标记基因的存在来确定 CTL 存活的动力学。 我们还将通过对具有 HLA 类型的患者进行四聚体研究来分析免疫学参数，包括表型和 CTL 频率，而此类试剂是可用的。 将通过细胞毒性或 ELISPOT/ELISA 测定进行功能分析。 将比较输注前后外周血中的 EBV DNA 水平。 8周的时间段将构成临床安全监测的时间。 如果患者有部分反应或病情稳定，他们将有资格再接受最多 6 剂 CTL，每剂的剂量与第二次注射的剂量相同。

ALCI（第 2 部分，共 2 部分）

这是 ALASCER 研究的第二部分。 ALCI 反映了制造过程中的修改，以丰富识别 LMP1 和 LMP2 抗原的细胞的 CTL 产品。 LMP2a 和 LMP1 富集所需的生产变化仅仅是用 ALCI 的 Ad5f35LMP1/2 载体替代以前使用的 Ad5f35LMP2 载体，该载体用于转导抗原呈递细胞，在我们的 GMP 实验室的生产过程中离体刺激 T 细胞.

我们最初使用 AD5f35LMP2 向量，现在使用 Ad5f35LMP1/2 向量来生成 LMP 特异性 CTL。 我们的初步数据表明这两个载体是相同的并且产生相似的 LMP2 特异性 CTL 富集。 通过使用 Ad5f35LMP1/2 载体而不是单独编码 LMP2 的 Ad5f35 载体，我们应该更好地富集识别霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤中恶性细胞表达的 LMP 抗原的 T 细胞克隆。 我们的分析策略包括在这些向量类型之间进行比较的计划。

与 ALASCER 产品一样，ALCI 产品仍然是 EBV 抗原特异性的 CTL 系，但富含识别 LMP1 和 LMP2 的 T 细胞。 ALASCER 产品已经含有一些 LMP1 特异性 T 细胞以及对其他 EBV 抗原具有特异性的 T 细胞，唯一的变化是富集了这些细胞。 因此，ALCI Ad5f35 LMP1/2 腺病毒载体是制造过程中的一种辅助试剂，仅用于转导用作刺激细胞的抗原呈递细胞，不会输注到最终产品中。 该载体已完成测试并获准在 ALASCER IND (#6387) 下使用。

此外，对 ALASCER 方案设计进行了修改，以允许根据制造过程中使用的载体向研究中添加单独的手臂，并单独分析数据

在 ALASCER 和 ALCI 中，细胞将被解冻并在 10 分钟内注射到患者体内。 最初，将间隔两周给予两剂 T 细胞。 如果在第二次输注后，放射科医师评估 CT 或 MRI 扫描显示淋巴瘤的大小有所减小，则患者可以根据需要接受最多六剂额外的 T 细胞。 这是一项剂量递增研究，这意味着对于某些患者而言，第二次剂量可能大于第一次剂量。 所有治疗都将由德克萨斯儿童医院或卫理公会医院的细胞和基因治疗中心提供。

注射后将对患者进行随访。 他们要么在诊所就诊，要么每年由研究护士联系 5 年。 要详细了解 T 细胞在患者体内的工作方式，每次输注前将额外采集 20-40 毫升（4-8 茶匙）血液，然后在每次输注后 4 小时（可选）和 3-每次输注后 4 天（可选），然后每周一次，每次输注后 2 周（共 9 次）。 最后一次输注后两周，将再次采血，然后每 3 个月一次，持续 1 年，然后每年一次，持续 5 年。 研究人员将使用这种血液来观察 T 细胞的持续时间，并观察患者对癌症的免疫反应。

ALCI（扩展队列）

一旦研究的剂量递增安全阶段完成（即 一旦至少 3 名患者接受了剂量水平 3 的治疗并且没有发生与治疗相关的 DLT），我们计划以剂量水平 1 治疗更多患者，以评估接受使用 DC 成熟的 DC 产生的 CTL 的患者的免疫反应在 IL-15 存在的情况下，额外的成熟细胞因子（IL-1b 和 IL-6）。 我们将分别治疗 A、B 和 C 组的另外 30、16 和 16 名患者。