Cellule T specifiche per LMP per pazienti con linfoma EBV-positivo recidivato (ALCI)

ALASCER (Parte 1 di 2)

Genereremo cellule T citotossiche autologhe (o singeniche) o allogeniche specifiche per LMP2A e le trasferiremo adottivamente a pazienti con linfoma o linfoepitelioma di Hodgkin positivo per EBV recidivante o non-Hodgkins.

Per avviare la linea CTL LMP-specifica, le PBMC saranno trasdotte con un vettore adenovirus (Ad5f35-pp65) che esprime l'antigene LMP2, con un rapporto particella virale (vp)/cellula di 30.000:1. Per i campioni di sangue di donatori normali, la frazione di monociti di PBMC può essere trasdotta ed esprimerà e presenterà epitopi peptidici LMP2 alla frazione di cellule T specifica per LMP2 di PBMC. Questo passaggio richiederà da 20 a 40 x 106 PBMC da circa 40 mL di sangue.

Quando è necessario uno stimolo più forte per riattivare i precursori delle cellule T specifici per LMP2 (cioè da pazienti PBMC), allora produrremo APC di cellule dendritiche mediante coltura di monociti derivati ​​da PBMC con citochine (GM-CSF, IL-4) seguita da trasduzione con Ad5f35-LMP2 (rapporto vp:cell di 30000:1) e maturazione con TNF-a e PGE1. Queste cellule dendritiche mature e trasdotte saranno utilizzate per stimolare le cellule T derivate da PBMC. In questo caso, le cellule dendritiche saranno preparate da circa 40 mL di sangue e le cellule T saranno derivate da 20 a 40 mL di sangue

Per espandere le cellule T specifiche per LMP2 utilizzeremo linee cellulari linfoblastoidi B trasformate da EBV (EBV-LCL) trasdotte con Ad5f35-LMP2 (rapporto vp:LCL di 100.000:1). Questa trasduzione consente agli EBV-LCL di presentare i peptidi LMP2 alle cellule T. Gli EBV-LCL derivano dai linfociti PBMC-B mediante infezione con un ceppo di laboratorio di grado clinico del virus di Epstein-Barr (EBV). Per generare l'EBV-LCL sono necessari circa 5 x 106 PBMC o da 5 a 10 ml di sangue

Al termine del periodo di coltura dei CTL, la frequenza dei CTL specifici per LMP2 sarà determinata utilizzando reagenti tetramerici, se disponibili.

Trasduzione con il gene della resistenza alla neomicina (opzionale - in base alle preferenze del paziente e alla disponibilità del vettore). I CTL stabiliti saranno trasdotti con i vettori retrovirali della serie LN.

I pazienti saranno valutati in clinica e verranno somministrate 2-4 dosi di CTL ogni due settimane l'una dall'altra. I pazienti saranno monitorati per la tossicità clinica dalla scala NCI Common Toxicity Criteria (versione 2.0 disponibile su http://ctep.cancer.gov). Inoltre, determineremo la cinetica della sopravvivenza dei CTL monitorando la presenza del gene marcatore nel sangue periferico nei pazienti che ricevono cellule marcate. Analizzeremo anche parametri immunologici tra cui fenotipo e frequenze CTL mediante studi sul tetramero in pazienti che hanno tipi HLA in cui tali reagenti sono disponibili. Le analisi funzionali saranno effettuate mediante citotossicità o saggi ELISPOT/ELISA. Verranno confrontati i livelli di EBV DNA nel sangue periferico prima e dopo l'infusione. Un periodo di tempo di 8 settimane costituirà il tempo per il monitoraggio della sicurezza clinica. Se i pazienti hanno avuto una risposta parziale o hanno una malattia stabile, saranno idonei a ricevere fino a 6 ulteriori dosi di CTL, ciascuna delle quali sarà composta dallo stesso numero della seconda iniezione.

ALCI (Parte 2 di 2)

Questa è la seconda parte dello studio ALASCER. ALCI rifletteva la modifica nel processo di produzione per arricchire il prodotto CTL per le cellule che riconoscono l'antigene LMP1 e LMP2. Il cambiamento nella produzione richiesto per arricchire sia per LMP2a che per LMP1 è unicamente quello di sostituire il vettore Ad5f35LMP1/2 di ALCI con il vettore Ad5f35LMP2 precedentemente utilizzato utilizzato per trasdurre le cellule presentanti l'antigene utilizzate ex vivo per stimolare le cellule T durante il processo di produzione nei nostri laboratori GMP .

Inizialmente abbiamo utilizzato il vettore AD5f35LMP2 e ora utilizziamo il vettore Ad5f35LMP1/2 per generare CTL specifici per LMP. I nostri dati preliminari indicano che questi due vettori sono identici e producono un arricchimento simile di CTL specifico per LMP2. Usando il vettore Ad5f35LMP1/2 invece del solo vettore Ad5f35 che codifica LMP2, dovremmo arricchire meglio i cloni di cellule T riconoscendo entrambi gli antigeni LMP espressi dalle cellule maligne nella malattia di Hodgkin e nel linfoma non-Hodgkin. Le nostre strategie di analisi includono piani per eseguire confronti tra questi tipi di vettori.

Come il prodotto ALASCER, il prodotto ALCI ha continuato a essere una linea CTL specifica per gli antigeni EBV ma arricchita per le cellule T che riconoscono LMP1 e LMP2. Il prodotto ALASCER contiene già alcune cellule T specifiche per LMP1 insieme a cellule T specifiche per altri antigeni EBV e l'unico cambiamento è stato l'arricchimento per queste cellule. Pertanto il vettore adenovirale ALCI Ad5f35 LMP1/2 è un reagente ausiliario nel processo di produzione utilizzato solo per trasdurre cellule presentanti l'antigene utilizzate come cellule stimolatrici e non viene infuso nel prodotto finale. Questo vettore ha completato i test ed è stato approvato per l'uso con ALASCER IND (#6387).

Inoltre, il progetto del protocollo ALASCER è stato modificato per consentire l'aggiunta di un braccio separato allo studio a seconda del vettore utilizzato per il processo di produzione e i dati vengono analizzati separatamente

Sia in ALASCER che in ALCI, le cellule verranno quindi scongelate e iniettate nel paziente in 10 minuti. Inizialmente, verranno somministrate due dosi di cellule T a distanza di due settimane. Se dopo la seconda infusione si verifica una riduzione delle dimensioni del linfoma alla TC o alla risonanza magnetica valutata da un radiologo, il paziente può ricevere fino a sei dosi aggiuntive di cellule T se lo desidera. Questo è uno studio di aumento della dose, il che significa che per alcuni pazienti la seconda dose può essere maggiore della prima. Tutti i trattamenti saranno somministrati dal Center for Cell and Gene Therapy presso il Texas Children's Hospital o dal Methodist Hospital.

Il paziente sarà seguito dopo le iniezioni. Saranno visitati in clinica o saranno contattati da un'infermiera ricercatrice ogni anno per 5 anni. Per saperne di più sul modo in cui le cellule T lavorano nel corpo del paziente, verranno prelevati altri 20-40 ml (4-8 cucchiaini da tè) di sangue prima di ogni infusione, quindi 4 ore dopo ogni infusione (facoltativo) e 3- 4 giorni dopo ogni infusione (opzionale) e poi settimanalmente per 2 settimane dopo ogni infusione (per un totale di 9 volte). Due settimane dopo l'ultima infusione, il sangue verrà quindi prelevato nuovamente e poi ogni 3 mesi per 1 anno, poi una volta all'anno per 5 anni. Gli investigatori useranno questo sangue per vedere quanto durano le cellule T e per esaminare la risposta immunitaria al cancro del paziente.

ALCI (coorte di espansione)

Una volta completata la fase di sicurezza dell'aumento della dose dello studio (ad es. una volta che almeno 3 pazienti sono stati trattati al livello di dose 3 e non si è verificata alcuna DLT correlata al trattamento), prevediamo di trattare ulteriori pazienti al livello di dose 1 per valutare la risposta immunologica nei pazienti che ricevono CTL che sono stati generati utilizzando DC maturate con le ulteriori citochine di maturazione (IL-1b e IL-6) in presenza di IL-15. Tratteremo altri 30, 16 e 16 pazienti rispettivamente nei gruppi A, B e C.