LMP-specifikke T-celler til patienter med recidiverende EBV-positivt lymfom (ALCI)

ALASCER (del 1 af 2)

Vi vil generere autologe (eller syngene) eller allogene LMP2A-specifikke cytotoksiske T-celler og adoptivt overføre dem til patienter med recidiverende EBV-positivt Hodgkins eller non-Hodgkins lymfom eller lymfepitheliom.

For at initiere den LMP-specifikke CTL-linje vil PBMC blive transduceret med en adenovirusvektor (Ad5f35-pp65), der udtrykker LMP2-antigenet, ved et viral partikel (vp) til celleforhold på 30.000:1. For blodprøver fra normale donorer kan monocytfraktionen af ​​PBMC transduceres og vil udtrykke og præsentere LMP2-peptidepitoper til den LMP2-specifikke T-cellefraktion af PBMC. Dette trin vil kræve 20 til 40 x 106 PBMC fra ca. 40 ml blod.

Når der kræves en stærkere stimulus for at reaktivere LMP2-specifikke T-celleprækursorer (dvs. fra patienters PBMC), så vil vi lave dendritiske celle APC'er ved dyrkning af PBMC-afledte monocytter med cytokiner (GM-CSF, IL-4) efterfulgt af transduktion med Ad5f35-LMP2 (vp:celleforhold på 30000:1) og modning med TNF-a og PGE1. Disse modne, transducerede dendritiske celler vil blive brugt til at stimulere PBMC-afledte T-celler. I dette tilfælde vil dendritiske celler blive fremstillet ud fra ca. 40 ml blod, og T-cellerne vil blive afledt fra 20 til 40 ml blod

For at udvide de LMP2-specifikke T-celler vil vi bruge EBV-transformerede B-lymfoblastoide cellelinjer (EBV-LCL'er) transduceret med Ad5f35-LMP2 (vp:LCL-forhold på 100.000:1). Denne transduktion gør det muligt for EBV-LCL'erne at præsentere LMP2-peptider til T-cellerne. EBV-LCL'er er afledt af PBMC-B-lymfocytter ved infektion med en laboratoriestamme af Epstein-Barr-virus (EBV) af klinisk kvalitet. Omkring 5 x 106 PBMC eller 5 til 10 ml blod er påkrævet for at generere EBV-LCL

Ved afslutningen af ​​CTL-dyrkningsperioden vil frekvensen af ​​LMP2-specifik CTL blive bestemt ved brug af tetramerreagenser, hvis de er tilgængelige.

Transduktion med neomycinresistensgenet (valgfrit - baseret på patientens præference og vektorens tilgængelighed). Etablerede CTL'er vil blive transduceret med de retrovirale vektorer fra LN-serien.

Patienterne vil blive evalueret i klinikken, og 2-4 doser CTL vil blive administreret hver anden uge. Patienter vil blive overvåget for klinisk toksicitet af NCI Common Toxicity Criteria Scale (Version 2.0 placeret på http://ctep.cancer.gov). Derudover vil vi bestemme kinetikken for CTL-overlevelse ved at overvåge tilstedeværelsen af ​​markørgenet i perifert blod hos patienter, der modtager markerede celler. Vi vil også analysere immunologiske parametre, herunder fænotype og CTL-frekvenser, ved hjælp af tetramerundersøgelser hos patienter, der har HLA-typer, hvor sådanne reagenser er tilgængelige. Funktionelle analyser vil blive udført ved cytotoksicitet eller ELISPOT/ELISA-assays. Niveauerne af EBV DNA i perifert blod før og efter infusion vil blive sammenlignet. En tidsperiode på 8 uger vil udgøre tiden til klinisk sikkerhedsmonitorering. Hvis patienter har haft et delvist respons eller har stabil sygdom, vil de være berettiget til at modtage op til 6 yderligere doser af CTL'er, som hver vil bestå af det samme antal som deres anden injektion.

ALCI (del 2 af 2)

Dette er 2. del af ALASCER-undersøgelsen. ALCI afspejlede modifikation i fremstillingsprocessen for at berige CTL-produktet for celler, der genkender LMP1 såvel som LMP2-antigenet. Ændringen i fremstillingen, der kræves for at berige både LMP2a og LMP1, er udelukkende at erstatte ALCIs Ad5f35LMP1/2 vektor med den tidligere brugte Ad5f35LMP2 vektor, der bruges til at transducere de antigenpræsenterende celler, der bruges ex vivo til at stimulere T-cellerne under fremstillingsprocessen i vores GMP-laboratorier .

Vi brugte oprindeligt AD5f35LMP2-vektoren og bruger nu Ad5f35LMP1/2-vektoren til at generere LMP-specifik CTL. Vores foreløbige data indikerer, at disse to vektorer er identiske og producerer lignende berigelse af LMP2-specifik CTL. Ved at bruge Ad5f35LMP1/2-vektoren i stedet for Ad5f35-vektoren, der koder for LMP2 alene, bør vi bedre berige T-cellekloner, der genkender begge LMP-antigener udtrykt af de ondartede celler i Hodgkins sygdom og non-Hodgkins lymfom. Vores analysestrategier omfatter planer om at udføre sammenligninger mellem disse vektortyper.

Ligesom ALASCER-produktet fortsatte ALCI-produktet med at være en CTL-linje, der er specifik for EBV-antigener, men beriget for T-celler, der genkender LMP1 såvel som LMP2. ALASCER-produktet indeholder allerede nogle LMP1-specifikke T-celler sammen med T-celler, der er specifikke for andre EBV-antigener, og den eneste ændring var berigelse for disse celler. Derfor er ALCI Ad5f35 LMP1/2 adenoviral vektor et hjælpereagens i fremstillingsprocessen, der kun bruges til at transducere antigenpræsenterende celler, der bruges som stimulatorceller, og er ikke infunderet i slutproduktet. Denne vektor gennemførte testning og blev godkendt til brug under ALASCER IND (#6387).

Derudover blev ALASCER-protokoldesignet ændret for at give mulighed for tilføjelse af en separat arm til undersøgelsen afhængigt af vektoren, der blev brugt til fremstillingsprocessen, og dataene analyseres separat

I både ALASCER & ALCI vil cellerne derefter blive optøet og injiceret i patienten over 10 minutter. I første omgang vil der blive givet to doser T-celler med to ugers mellemrum. Hvis der efter anden infusion sker en reduktion af lymfomets størrelse på CT- eller MR-skanning vurderet af en radiolog, kan patienten få op til seks yderligere doser af T-cellerne, hvis patienten ønsker det. Dette er et dosiseskaleringsstudie, hvilket betyder, at for nogle patienter kan den anden dosis være større end den første. Alle behandlinger vil blive givet af Center for Celle- og Genterapi på Texas Children's Hospital eller Methodist Hospital.

Patienten vil blive fulgt efter injektionerne. De vil enten blive tilset i klinikken eller vil blive kontaktet af en forskningssygeplejerske årligt i 5 år. For at lære mere om den måde, T-cellerne fungerer på i patientens krop, vil der blive taget ekstra 20-40 ml (4-8 teskefulde) blod før hver infusion og derefter 4 timer efter hver infusion (valgfrit) og 3- 4 dage efter hver infusion (valgfrit) og derefter ugentligt i 2 uger efter hver infusion (i alt 9 gange). To uger efter sidste infusion tages der blod igen og derefter hver 3. måned i 1 år, derefter en gang om året i 5 år. Efterforskere vil bruge dette blod til at se, hvor længe T-cellerne holder, og til at se på immunresponset på patientens cancer.

ALCI (Ekspansionskohorte)

Når dosiseskaleringssikkerhedsfasen af ​​undersøgelsen er afsluttet (dvs. når mindst 3 patienter er blevet behandlet på dosisniveau 3, og der ikke er forekommet behandlingsrelateret DLT), planlægger vi at behandle yderligere patienter på dosisniveau 1 for at evaluere det immunologiske respons hos patienter, der modtager CTL, der er blevet genereret ved hjælp af DC modnet med de yderligere modningscytokiner (IL-1b og IL-6) i nærvær af IL-15. Vi vil behandle yderligere 30, 16 og 16 patienter i henholdsvis gruppe A, B og C.