재발된 EBV 양성 림프종 환자를 위한 LMP 특이 T 세포 (ALCI)

ALASCER(2부 중 1부)

우리는 자가(또는 동계) 또는 동종이계 LMP2A 특이적 세포독성 T 세포를 생성하고 이를 재발된 EBV 양성 호지킨 또는 비호지킨 림프종 또는 림프상피종 환자에게 양자로 옮길 것입니다.

LMP 특이적 CTL 라인을 시작하기 위해 PBMC는 바이러스 입자(vp) 대 세포 비율이 30,000:1인 LMP2 항원을 발현하는 아데노바이러스 벡터(Ad5f35-pp65)로 형질도입됩니다. 정상 공여자의 혈액 샘플의 경우, PBMC의 단핵구 분획이 형질도입될 수 있으며 PBMC의 LMP2 특이적 T 세포 분획에 LMP2 펩티드 에피토프를 발현 및 제시할 것입니다. 이 단계에서는 약 40mL의 혈액에서 20~40 x 106 PBMC가 필요합니다.

LMP2-특이적 T 세포 전구체(즉, 환자 PBMC로부터)를 재활성화하기 위해 더 강한 자극이 필요할 때, PBMC 유래 단핵구를 사이토카인(GM-CSF, IL-4)과 함께 배양하여 수지상 세포 APC를 만든 다음 Ad5f35-LMP2(vp:30000:1의 세포 비율) 및 TNF-a 및 PGE1에 의한 성숙. 이러한 성숙한 형질도입 수지상 세포는 PBMC 유래 T 세포를 자극하는 데 사용될 것입니다. 이 경우, 수지상 세포는 약 40mL의 혈액에서 준비되고 T 세포는 20~40mL의 혈액에서 파생됩니다.

LMP2 특이적 T 세포를 확장하기 위해 Ad5f35-LMP2(vp:LCL 비율 100,000:1)로 형질도입된 EBV-형질전환 B 림프모구 세포주(EBV-LCL)를 사용합니다. 이 형질도입을 통해 EBV-LCL은 T 세포에 LMP2 펩티드를 제시할 수 있습니다. EBV-LCL은 PBMC-B 림프구에서 임상 등급의 실험실용 Epstein-Barr 바이러스(EBV) 균주로 감염되어 파생됩니다. EBV-LCL을 생성하려면 약 5 x 106 PBMC 또는 5~10mL의 혈액이 필요합니다.

CTL 배양 기간이 끝나면 가능한 경우 테트라머 시약을 사용하여 LMP2 특정 CTL의 빈도를 결정합니다.

네오마이신 저항성 유전자를 사용한 형질도입(선택 사항 - 환자 선호도 및 벡터 가용성에 따라). 확립된 CTL은 LN 시리즈의 레트로바이러스 벡터로 변환됩니다.

환자는 클리닉에서 평가되고 CTL의 2-4 용량은 2주 간격으로 투여됩니다. NCI Common Toxicity Criteria Scale(http://ctep.cancer.gov에 있는 버전 2.0)에 의해 임상 독성에 대해 환자를 모니터링합니다. 또한 표지된 세포를 받은 환자의 말초 혈액에서 마커 유전자의 존재를 모니터링하여 CTL 생존의 동역학을 결정할 것입니다. 우리는 또한 그러한 시약을 사용할 수 있는 HLA 유형을 가진 환자의 테트라머 연구를 통해 표현형 및 CTL 빈도를 포함한 면역학적 매개변수를 분석할 것입니다. 기능적 분석은 세포독성 또는 ELISPOT/ELISA 분석으로 수행됩니다. 주입 전후의 말초 혈액 내 EBV DNA 수준을 비교할 것입니다. 8주의 기간은 임상 안전성 모니터링을 위한 시간을 구성합니다. 환자가 부분 반응을 보이거나 안정적인 질병을 가지고 있는 경우 최대 6회까지 CTL을 추가로 투여받을 수 있으며 각 용량은 두 번째 주사와 동일한 수로 구성됩니다.

ALCI(2/2부)

이것은 ALASCER 연구의 두 번째 부분입니다. ALCI는 LMP1 및 LMP2 항원을 인식하는 세포를 위한 CTL 제품을 풍부하게 하기 위해 제조 공정에서 수정을 반영했습니다. LMP2a 및 LMP1 모두를 풍부하게 하는 데 필요한 제조 변경은 ALCI의 Ad5f35LMP1/2 벡터를 이전에 사용된 Ad5f35LMP2 벡터로 대체하는 것입니다. 이는 GMP 실험실에서 제조 공정 중에 T 세포를 자극하기 위해 생체 외에서 사용되는 항원 제시 세포를 형질도입하는 데 사용됩니다. .

우리는 처음에 AD5f35LMP2 벡터를 사용했고 지금은 Ad5f35LMP1/2 벡터를 사용하여 LMP 특정 CTL을 생성합니다. 우리의 예비 데이터는 이 두 벡터가 동일하고 유사한 LMP2 특정 CTL 농축을 생성함을 나타냅니다. LMP2만을 암호화하는 Ad5f35 벡터 대신 Ad5f35LMP1/2 벡터를 사용함으로써 호지킨병과 비호지킨 림프종에서 악성 세포에 의해 발현되는 LMP 항원을 모두 인식하는 T 세포 클론을 더욱 풍부하게 만들 수 있습니다. 우리의 분석 전략에는 이러한 벡터 유형 간의 비교를 수행할 계획이 포함됩니다.

ALASCER 제품과 마찬가지로 ALCI 제품은 계속해서 EBV 항원에 특이적인 CTL 계열이지만 LMP1과 LMP2를 인식하는 T 세포가 풍부합니다. ALASCER 제품에는 이미 다른 EBV 항원에 특이적인 T 세포와 함께 일부 LMP1 특이 T 세포가 포함되어 있으며 유일한 변경 사항은 이러한 세포에 대한 강화입니다. 따라서 ALCI Ad5f35 LMP1/2 adenoviral vector는 자극 세포로 사용되는 항원 제시 세포를 형질도입하는 데만 사용되는 제조 공정의 보조 시약이며 최종 제품에는 주입되지 않습니다. 이 벡터는 테스트를 완료했으며 ALASCER IND(#6387)에서 사용하도록 승인되었습니다.

또한 ALASCER 프로토콜 디자인은 제조 공정에 사용되는 벡터에 따라 연구에 별도의 팔을 추가할 수 있도록 수정되었으며 데이터는 별도로 분석됩니다.

ALASCER 및 ALCI 모두에서 세포는 해동되어 10분에 걸쳐 환자에게 주입됩니다. 처음에는 T 세포를 2주 간격으로 2회 투여합니다. 두 번째 주입 후 방사선 전문의가 평가한 CT 또는 MRI 스캔에서 림프종의 크기가 감소한 경우 환자는 환자가 원하는 경우 T 세포를 최대 6회 추가로 투여받을 수 있습니다. 이것은 일부 환자의 경우 두 번째 용량이 첫 번째 용량보다 클 수 있음을 의미하는 용량 증량 연구입니다. 모든 치료는 텍사스 어린이 병원 또는 감리교 병원의 세포 및 유전자 치료 센터에서 제공됩니다.

주사 후 환자를 추적할 것입니다. 그들은 클리닉에서 보거나 5년 동안 매년 연구 간호사의 연락을 받을 것입니다. T 세포가 환자의 체내에서 작동하는 방식에 대해 자세히 알아보기 위해 각 주입 전에 추가로 20-40mL(4-8티스푼)의 혈액을 채취하고 각 주입 후 4시간(선택 사항) 및 3- 각 주입 후 4일(선택 사항) 및 각 주입 후 2주 동안 매주(총 9회). 마지막 주입 후 2주 후에 다시 혈액을 채취한 다음 1년 동안 3개월마다, 그리고 5년 동안 1년에 한 번씩 혈액을 채취합니다. 연구자들은 이 혈액을 사용하여 T 세포가 얼마나 오래 지속되는지 확인하고 환자의 암에 대한 면역 반응을 살펴봅니다.

ALCI(확장 코호트)

연구의 용량 증량 안전성 단계가 완료되면(즉, 최소 3명의 환자가 용량 수준 3에서 치료를 받았고 치료 관련 DLT가 발생하지 않은 경우), 우리는 성숙된 DC를 사용하여 생성된 CTL을 받은 환자의 면역학적 반응을 평가하기 위해 용량 수준 1에서 추가 환자를 치료할 계획입니다. IL-15의 존재 하에 추가적인 성숙 사이토카인(IL-1b 및 IL-6). A, B, C 그룹에서 각각 30명, 16명, 16명의 환자를 추가로 치료할 예정이다.