Cellules T spécifiques aux LMP pour les patients atteints d'un lymphome positif à l'EBV en rechute (ALCI)

ALASCER (Partie 1 de 2)

Nous générerons des lymphocytes T cytotoxiques autologues (ou syngéniques) ou allogéniques spécifiques de LMP2A et les transférerons de manière adoptive à des patients atteints d'un lymphome hodgkinien ou non hodgkinien ou d'un lymphoépithéliome EBV positif en rechute.

Pour initier la lignée CTL spécifique de LMP, les PBMC seront transduits avec un vecteur adénoviral (Ad5f35-pp65) exprimant l'antigène LMP2, à un rapport particule virale (vp) sur cellule de 30 000:1. Pour les échantillons de sang provenant de donneurs normaux, la fraction de monocytes de PBMC peut être transduite et exprimera et présentera des épitopes peptidiques LMP2 à la fraction de lymphocytes T spécifiques de LMP2 des PBMC. Cette étape nécessitera 20 à 40 x 106 PBMC à partir d'environ 40 mL de sang.

Lorsqu'un stimulus plus fort est nécessaire pour réactiver les précurseurs des cellules T spécifiques de LMP2 (c'est-à-dire des patients PBMC), nous fabriquerons des APC de cellules dendritiques par culture de monocytes dérivés de PBMC avec des cytokines (GM-CSF, IL-4) suivie d'une transduction avec Ad5f35-LMP2 (rapport vp:cellule de 30000:1) et maturation avec TNF-a et PGE1. Ces cellules dendritiques matures et transduites seront utilisées pour stimuler les cellules T dérivées des PBMC. Dans ce cas, les cellules dendritiques seront préparées à partir d'environ 40 mL de sang et les lymphocytes T seront dérivés de 20 à 40 mL de sang

Pour développer les lymphocytes T spécifiques de LMP2, nous utiliserons des lignées cellulaires lymphoblastoïdes B transformées par EBV (EBV-LCL) transduites avec Ad5f35-LMP2 (rapport vp: LCL de 100 000: 1). Cette transduction permet aux EBV-LCL de présenter les peptides LMP2 aux lymphocytes T. Les EBV-LCL sont dérivés de lymphocytes PBMC-B par infection avec une souche de laboratoire de qualité clinique du virus d'Epstein-Barr (EBV). Environ 5 x 106 PBMC, ou 5 à 10 mL de sang sont nécessaires pour générer l'EBV-LCL

À la fin de la période de culture des CTL, la fréquence des CTL spécifiques de LMP2 sera déterminée à l'aide de réactifs tétramères si disponibles.

Transduction avec le gène de résistance à la néomycine (facultatif - basé sur la préférence du patient et la disponibilité du vecteur). Les CTL établis seront transduits avec les vecteurs rétroviraux de la série LN.

Les patients seront évalués à la clinique et 2 à 4 doses de CTL seront administrées toutes les deux semaines d'intervalle. Les patients seront surveillés pour la toxicité clinique par le NCI Common Toxicity Criteria Scale (Version 2.0 situé à http://ctep.cancer.gov). De plus, nous déterminerons la cinétique de survie des CTL en surveillant la présence du gène marqueur dans le sang périphérique chez les patients qui reçoivent des cellules marquées. Nous analyserons également les paramètres immunologiques, y compris le phénotype et les fréquences CTL par des études de tétramères chez des patients qui ont des types HLA où de tels réactifs sont disponibles. Les analyses fonctionnelles seront faites par cytotoxicité ou tests ELISPOT/ELISA. Les niveaux d'ADN d'EBV dans le sang périphérique avant et après la perfusion seront comparés. Un délai de 8 semaines constituera le temps du suivi clinique de la sécurité. Si les patients ont eu une réponse partielle ou ont une maladie stable, ils seront éligibles pour recevoir jusqu'à 6 doses supplémentaires de CTL, dont chacune consistera en le même nombre que leur deuxième injection.

ALCI (Partie 2 de 2)

Il s'agit de la 2e partie de l'étude ALASCER. L'ALCI a reflété la modification du processus de fabrication pour enrichir le produit CTL pour les cellules reconnaissant l'antigène LMP1 ainsi que l'antigène LMP2. Le changement de fabrication requis pour enrichir à la fois pour LMP2a et LMP1 consiste uniquement à remplacer le vecteur Ad5f35LMP1/2 d'ALCI par le vecteur Ad5f35LMP2 précédemment utilisé pour transduire les cellules présentatrices d'antigène utilisées ex vivo pour stimuler les cellules T pendant le processus de fabrication dans nos laboratoires GMP .

Nous avons initialement utilisé le vecteur AD5f35LMP2 et utilisons maintenant le vecteur Ad5f35LMP1/2 pour générer des CTL spécifiques au LMP. Nos données préliminaires indiquent que ces deux vecteurs sont identiques et produisent un enrichissement similaire de CTL spécifiques de LMP2. En utilisant le vecteur Ad5f35LMP1/2 au lieu du vecteur Ad5f35 codant LMP2 seul, nous devrions mieux enrichir les clones de lymphocytes T reconnaissant à la fois les antigènes LMP exprimés par les cellules malignes dans la maladie de Hodgkin et le lymphome non hodgkinien. Nos stratégies d'analyse incluent des plans pour effectuer des comparaisons entre ces types de vecteurs.

Comme le produit ALASCER, le produit ALCI est resté une lignée CTL spécifique des antigènes EBV mais enrichie en lymphocytes T reconnaissant aussi bien LMP1 que LMP2. Le produit ALASCER contient déjà des cellules T spécifiques de LMP1 ainsi que des cellules T spécifiques d'autres antigènes EBV et le seul changement a été l'enrichissement de ces cellules. Par conséquent, le vecteur adénoviral ALCI Ad5f35 LMP1/2 est un réactif auxiliaire dans le processus de fabrication utilisé uniquement pour la transduction des cellules présentant l'antigène utilisées comme cellules stimulatrices et n'est pas infusé dans le produit final. Ce vecteur a terminé les tests et a été approuvé pour une utilisation sous ALASCER IND (#6387).

De plus, la conception du protocole ALASCER a été modifiée pour permettre l'ajout d'un bras séparé à l'étude en fonction du vecteur utilisé pour le processus de fabrication et les données sont analysées séparément

Dans ALASCER et ALCI, les cellules seront ensuite décongelées et injectées au patient pendant 10 minutes. Initialement, deux doses de lymphocytes T seront administrées à deux semaines d'intervalle. Si après la deuxième perfusion, il y a une réduction de la taille du lymphome au scanner ou à l'IRM telle qu'évaluée par un radiologue, le patient peut recevoir jusqu'à six doses supplémentaires de lymphocytes T s'il le souhaite. Il s'agit d'une étude d'escalade de dose, ce qui signifie que pour certains patients, la deuxième dose peut être supérieure à la première. Tous les traitements seront administrés par le Center for Cell and Gene Therapy du Texas Children's Hospital ou le Methodist Hospital.

Le patient sera suivi après les injections. Ils seront soit vus en clinique, soit contactés par une infirmière de recherche annuellement pendant 5 ans. Pour en savoir plus sur le fonctionnement des lymphocytes T dans le corps du patient, 20 à 40 ml (4 à 8 cuillères à thé) de sang supplémentaires seront prélevés avant chaque perfusion, puis 4 heures après chaque perfusion (facultatif) et 3- 4 jours après chaque perfusion (facultatif) puis une fois par semaine pendant 2 semaines après chaque perfusion (9 fois au total). Deux semaines après la dernière perfusion, le sang sera ensuite repris puis tous les 3 mois pendant 1 an, puis une fois par an pendant 5 ans. Les enquêteurs utiliseront ce sang pour voir combien de temps durent les cellules T et pour examiner la réponse immunitaire au cancer du patient.

ALCI (cohorte d'expansion)

Une fois la phase de sécurité d'escalade de dose de l'étude terminée (c'est-à-dire une fois qu'au moins 3 patients ont été traités au niveau de dose 3 et qu'aucun DLT lié au traitement ne s'est produit), nous prévoyons de traiter des patients supplémentaires au niveau de dose 1 pour évaluer la réponse immunologique chez les patients qui reçoivent des CTL qui ont été générés à l'aide de DC maturées avec les cytokines de maturation supplémentaires (IL-1b et IL-6) en présence d'IL-15. Nous traiterons respectivement 30, 16 et 16 patients supplémentaires des groupes A, B et C.