Células T específicas de LMP para pacientes com linfoma positivo para EBV recidivante (ALCI)

ALASCER (Parte 1 de 2)

Iremos gerar células T citotóxicas específicas de LMP2A autólogas (ou singênicas) e alogênicas e transferi-las adotivamente para pacientes com recidiva de Hodgkin positivo para EBV ou linfoma não-Hodgkin ou linfoepitelioma.

Para iniciar a linha CTL específica de LMP, PBMC será transduzida com um vetor de adenovírus (Ad5f35-pp65) expressando o antígeno LMP2, em uma proporção de partícula viral (vp) para célula de 30.000:1. Para amostras de sangue de doadores normais, a fração de monócitos de PBMC pode ser transduzida e expressará e apresentará epítopos de peptídeo LMP2 para a fração de células T específica de LMP2 de PBMC. Esta etapa exigirá de 20 a 40 x 106 PBMC de cerca de 40 mL de sangue.

Quando um estímulo mais forte é necessário para reativar os precursores de células T específicos de LMP2 (ou seja, de pacientes PBMC), então faremos APCs de células dendríticas por cultura de monócitos derivados de PBMC com citocinas (GM-CSF, IL-4) seguido de transdução com Ad5f35-LMP2 (razão vp:célula de 30000:1) e maturação com TNF-a e PGE1. Essas células dendríticas transduzidas maduras serão usadas para estimular células T derivadas de PBMC. Neste caso, as células dendríticas serão preparadas a partir de cerca de 40 mL de sangue e as células T serão derivadas de 20 a 40 mL de sangue

Para expandir as células T específicas de LMP2, usaremos linhagens de células linfoblastóides B transformadas por EBV (EBV-LCLs) transduzidas com Ad5f35-LMP2 (relação vp:LCL de 100.000:1). Essa transdução permite que os EBV-LCLs apresentem peptídeos LMP2 às células T. EBV-LCLs são derivados de linfócitos PBMC-B por infecção com uma cepa de laboratório de grau clínico do vírus Epstein-Barr (EBV). Cerca de 5 x 106 PBMC, ou 5 a 10 mL de sangue são necessários para gerar o EBV-LCL

No final do período de cultura de CTL, a frequência de CTL específico de LMP2 será determinada usando reagentes tetrâmeros, se disponíveis.

Transdução com o Gene de Resistência à Neomicina (opcional - baseado na preferência do paciente e disponibilidade do vetor). CTLs estabelecidos serão transduzidos com os vetores retrovirais da série LN.

Os pacientes serão avaliados na clínica e 2-4 doses de CTL serão administradas a cada duas semanas. Os pacientes serão monitorados quanto à toxicidade clínica pela NCI Common Toxicity Criteria Scale (versão 2.0 localizada em http://ctep.cancer.gov). Além disso, determinaremos a cinética de sobrevivência de CTL monitorando a presença do gene marcador no sangue periférico em pacientes que recebem células marcadas. Também analisaremos parâmetros imunológicos incluindo fenótipo e freqüências de CTL por estudos de tetrâmeros em pacientes que possuem tipos de HLA onde tais reagentes estão disponíveis. As análises funcionais serão feitas por citotoxicidade ou ensaios ELISPOT/ELISA. Os níveis de DNA do EBV no sangue periférico antes e após a infusão serão comparados. Um período de tempo de 8 semanas constituirá o tempo para monitoramento de segurança clínica. Se os pacientes tiveram uma resposta parcial ou têm doença estável, eles serão elegíveis para receber até 6 doses adicionais de CTLs, cada uma das quais consistirá no mesmo número de sua segunda injeção.

ALCI (Parte 2 de 2)

Esta é a 2ª parte do estudo ALASCER. A ALCI refletiu a modificação no processo de fabricação para enriquecer o produto CTL para células que reconhecem o antígeno LMP1 e LMP2. A mudança na fabricação necessária para enriquecer LMP2a e LMP1 é apenas para substituir o vetor Ad5f35LMP1/2 da ALCI pelo vetor Ad5f35LMP2 usado anteriormente, usado para transduzir as células apresentadoras de antígeno usadas ex vivo para estimular as células T durante o processo de fabricação em nossos laboratórios GMP .

Inicialmente, usamos o vetor AD5f35LMP2 e agora usamos o vetor Ad5f35LMP1/2 para gerar CTL específico de LMP. Nossos dados preliminares indicam que esses dois vetores são idênticos e produzem enriquecimento semelhante de CTL específico de LMP2. Ao usar o vetor Ad5f35LMP1/2 em vez do vetor Ad5f35 que codifica LMP2 sozinho, devemos enriquecer melhor os clones de células T reconhecendo ambos os antígenos LMP expressos pelas células malignas na doença de Hodgkin e no linfoma não-Hodgkin. Nossas estratégias de análise incluem planos para realizar comparações entre esses tipos de vetores.

Como o produto ALASCER, o produto ALCI continuou a ser uma linha CTL específica para antígenos EBV, mas enriquecida para células T que reconhecem LMP1 e LMP2. O produto ALASCER já contém algumas células T específicas de LMP1 junto com células T específicas para outros antígenos de EBV e a única alteração foi enriquecida para essas células. Portanto, o vetor adenoviral ALCI Ad5f35 LMP1/2 é um reagente auxiliar no processo de fabricação usado apenas para transduzir células apresentadoras de antígeno usadas como células estimuladoras e não é infundido no produto final. Este vetor completou o teste e foi aprovado para uso sob ALASCER IND (#6387).

Além disso, o design do protocolo ALASCER foi alterado para permitir a adição de um braço separado ao estudo, dependendo do vetor usado para o processo de fabricação e os dados são analisados ​​separadamente

Tanto no ALASCER quanto no ALCI, as células serão então descongeladas e injetadas no paciente durante 10 minutos. Inicialmente, duas doses de células T serão dadas com duas semanas de intervalo. Se após a segunda infusão houver uma redução no tamanho do linfoma na tomografia computadorizada ou ressonância magnética avaliada por um radiologista, o paciente pode receber até seis doses adicionais de células T, se desejar. Este é um estudo de escalonamento de dose, o que significa que, para alguns pacientes, a segunda dose pode ser maior que a primeira. Todos os tratamentos serão administrados pelo Centro de Terapia Celular e Genética do Hospital Infantil do Texas ou do Hospital Metodista.

O paciente será acompanhado após as injeções. Eles serão vistos na clínica ou serão contatados por uma enfermeira pesquisadora anualmente por 5 anos. Para saber mais sobre como as células T estão trabalhando no corpo do paciente, serão coletados 20-40 mL extras (4-8 colheres de chá) de sangue antes de cada infusão e, em seguida, 4 horas após cada infusão (opcional) e 3- 4 dias após cada infusão (opcional) e depois semanalmente por 2 semanas após cada infusão (total de 9 vezes). Duas semanas após a última infusão, o sangue será coletado novamente e depois a cada 3 meses por 1 ano, depois uma vez por ano por 5 anos. Os investigadores usarão esse sangue para ver quanto tempo duram as células T e para observar a resposta imune ao câncer do paciente.

ALCI (coorte de expansão)

Uma vez concluída a fase de segurança de escalonamento de dose do estudo (ou seja, uma vez que pelo menos 3 pacientes tenham sido tratados no nível de dose 3 e nenhum DLT relacionado ao tratamento tenha ocorrido), planejamos tratar pacientes adicionais no nível de dose 1 para avaliar a resposta imunológica em pacientes que recebem CTL que foram gerados usando DC amadurecido com as citocinas de maturação adicionais (IL-1b e IL-6) na presença de IL-15. Trataremos mais 30, 16 e 16 pacientes nos Grupos A, B e C, respectivamente.