LMP-specifika T-celler för patienter med återfallande EBV-positivt lymfom (ALCI)

ALASCER (del 1 av 2)

Vi kommer att generera autologa (eller syngena) eller allogena LMP2A-specifika cytotoxiska T-celler och adoptivt överföra dem till patienter med recidiverande EBV-positivt Hodgkins eller non-Hodgkins lymfom eller lymfepitelom.

För att initiera den LMP-specifika CTL-linjen kommer PBMC att transduceras med en adenovirusvektor (Ad5f35-pp65) som uttrycker LMP2-antigenet, vid ett förhållande mellan viral partikel (vp) och cell på 30 000:1. För blodprover från normala donatorer kan monocytfraktionen av PBMC transduceras och kommer att uttrycka och presentera LMP2-peptidepitoper till den LMP2-specifika T-cellsfraktionen av PBMC. Detta steg kräver 20 till 40 x 106 PBMC från cirka 40 ml blod.

När en starkare stimulans krävs för att återaktivera LMP2-specifika T-cellprekursorer (dvs från patienters PBMC), kommer vi att göra dendritiska cell-APC:er genom odling av PBMC-härledda monocyter med cytokiner (GM-CSF, IL-4) följt av transduktion med Ad5f35-LMP2 (vp:cellförhållande på 30000:1) och mognad med TNF-a och PGE1. Dessa mogna, transducerade dendritiska celler kommer att användas för att stimulera PBMC-härledda T-celler. I detta fall kommer dendritiska celler att framställas från cirka 40 ml blod och T-cellerna kommer att härledas från 20 till 40 ml blod

För att expandera de LMP2-specifika T-cellerna kommer vi att använda EBV-transformerade B-lymfoblastoidcellinjer (EBV-LCL) transducerade med Ad5f35-LMP2 (vp:LCL-förhållande på 100 000:1). Denna transduktion tillåter EBV-LCL att presentera LMP2-peptider för T-cellerna. EBV-LCL härrör från PBMC-B-lymfocyter genom infektion med en laboratoriestam av klinisk kvalitet av Epstein-Barr-virus (EBV). Cirka 5 x 106 PBMC, eller 5 till 10 ml blod krävs för att generera EBV-LCL

I slutet av CTL-odlingsperioden kommer frekvensen av LMP2-specifik CTL att bestämmas med hjälp av tetramerreagenser om tillgängliga.

Transduktion med neomycinresistensgenen (valfritt - baserat på patientens preferenser och vektorns tillgänglighet). Etablerade CTL kommer att transduceras med de retrovirala vektorerna i LN-serien.

Patienterna kommer att utvärderas på kliniken och 2-4 doser av CTL kommer att administreras med två veckors mellanrum. Patienterna kommer att övervakas med avseende på klinisk toxicitet av NCI Common Toxicity Criteria Scale (version 2.0 finns på http://ctep.cancer.gov). Dessutom kommer vi att bestämma kinetiken för CTL-överlevnad genom att övervaka närvaron av markörgenen i perifert blod hos patienter som får markerade celler. Vi kommer också att analysera immunologiska parametrar inklusive fenotyp och CTL-frekvenser genom tetramerstudier hos patienter som har HLA-typer där sådana reagenser finns tillgängliga. Funktionella analyser kommer att göras med cytotoxicitet eller ELISPOT/ELISA-analyser. Nivåerna av EBV-DNA i perifert blod före och efter infusion kommer att jämföras. En tidsperiod på 8 veckor kommer att utgöra tiden för klinisk säkerhetsövervakning. Om patienter har fått ett partiellt svar eller har stabil sjukdom kommer de att vara berättigade att få upp till 6 ytterligare doser av CTL, som var och en kommer att bestå av samma antal som deras andra injektion.

ALCI (del 2 av 2)

Detta är den andra delen av ALASCER-studien. ALCI återspeglade modifiering i tillverkningsprocessen för att berika CTL-produkten för celler som känner igen LMP1 såväl som LMP2-antigenet. Förändringen i tillverkningen som krävs för att anrika för både LMP2a och LMP1 är enbart att ersätta ALCI:s Ad5f35LMP1/2 vektor med den tidigare använda Ad5f35LMP2 vektorn som används för att transducera de antigenpresenterande cellerna som används ex vivo för att stimulera T-cellerna under tillverkningsprocessen i våra GMP-laboratorier .

Vi använde först AD5f35LMP2-vektorn och använder nu Ad5f35LMP1/2-vektorn för att generera LMP-specifik CTL. Våra preliminära data indikerar att dessa två vektorer är identiska och producerar liknande anrikning av LMP2-specifik CTL. Genom att använda Ad5f35LMP1/2-vektorn istället för Ad5f35-vektorn som kodar för LMP2 enbart, borde vi bättre berika T-cellskloner som känner igen båda LMP-antigenerna som uttrycks av de maligna cellerna i Hodgkins sjukdom och non-Hodgkins lymfom. Våra analysstrategier inkluderar planer på att göra jämförelser mellan dessa vektortyper.

Liksom ALASCER-produkten fortsatte ALCI-produkten att vara en CTL-linje specifik för EBV-antigener men berikad för T-celler som känner igen LMP1 såväl som LMP2. ALASCER-produkten innehåller redan några LMP1-specifika T-celler tillsammans med T-cellspecifika för andra EBV-antigener och den enda förändringen var anrikning för dessa celler. Därför är ALCI Ad5f35 LMP1/2 adenoviral vektor ett hjälpreagens i tillverkningsprocessen som endast används för att transducera antigenpresenterande celler som används som stimulatorceller och infunderas inte i slutprodukten. Denna vektor slutförde testning och godkändes för användning under ALASCER IND (#6387).

Dessutom har ALASCER-protokolldesignen ändrats för att möjliggöra tillägg av en separat arm till studien beroende på vektorn som används för tillverkningsprocessen och data analyseras separat

I både ALASCER & ALCI kommer cellerna sedan att tinas och injiceras i patienten under 10 minuter. Inledningsvis kommer två doser av T-celler att ges med två veckors mellanrum. Om det efter den andra infusionen sker en minskning av lymfomets storlek vid CT- eller MRT-undersökning enligt bedömning av en radiolog, kan patienten få upp till sex extra doser av T-cellerna om patienten så önskar. Detta är en dosökningsstudie som innebär att för vissa patienter kan den andra dosen vara större än den första. Alla behandlingar kommer att ges av Center for Cell and Gen Therapy på Texas Children's Hospital eller Methodist Hospital.

Patienten kommer att följas efter injektionerna. De kommer antingen att ses på kliniken eller kommer att kontaktas av en forskningssköterska årligen i 5 år. För att lära dig mer om hur T-cellerna fungerar i patientens kropp, tas ytterligare 20-40 ml (4-8 teskedar) blod före varje infusion och sedan 4 timmar efter varje infusion (valfritt) och 3- 4 dagar efter varje infusion (valfritt) och sedan varje vecka i 2 veckor efter varje infusion (totalt 9 gånger). Två veckor efter sista infusionen tas sedan blod igen och sedan var 3:e månad i 1 år, sedan en gång per år i 5 år. Utredarna kommer att använda detta blod för att se hur länge T-cellerna håller och för att titta på immunsvaret på patientens cancer.

ALCI (Expansion cohort)

När dosökningssäkerhetsfasen av studien är klar (dvs. när minst 3 patienter har behandlats på dosnivå 3 och ingen behandlingsrelaterad DLT har inträffat), planerar vi att behandla ytterligare patienter på dosnivå 1 för att utvärdera det immunologiska svaret hos patienter som får CTL som har genererats med DC mognat med de ytterligare mognadscytokinerna (IL-lb och IL-6) i närvaro av IL-15. Vi kommer att behandla ytterligare 30, 16 och 16 patienter i grupp A, B respektive C.