腸内細菌集団と免疫調節に対するプロバイオティクスの効果

いくつかの臨床パラメータは、次のように評価されました：一次結果（下痢の重症度）、および体重変化、食欲と毎日の摂取量、膨満感または腹部膨満、腹痛または疝痛、便秘、発熱、および嘔吐を含む二次結果も評価されました.

Lymphoprep によって分離された末梢血は、生理食塩水で 2 回、培地で 1 回洗浄され、培地 [RPMI 1640] に懸濁されて 1 x 106/mL の密度になりました。 ＰＢＭＣは、密度勾配遠心分離によって献血者バフィーコートから単離される。 PBMCの濃度を完全培地で1mlあたり106細胞に調整し、細胞を24ウェルプレートに移します。細胞表面表現型の発現と細胞内染色。 細胞は、リンパ球、単球、および適切な種特異的免疫グロブリン G アイソタイプ コントロールによって発現される表面抗原に対するモノクローナル抗体 (MAb) のパネルを使用して染色されます。 ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して細胞を取得し、Ｃｅｌｌ Ｑｕｅｓｔソフトウェアで分析する。

腸内細菌のコロニー形成を評価するために、プロバイオティクスまたはプラセボ治療の 0 日目 (患者が登録された日)、3 日目、および 7 日目に各患者から糞便サンプルを採取しました。 糞便標本を秤量し、ホモジナイズし、連続希釈し、細菌の分析のために選択寒天にプレーティングしました。 糞便細菌数は、log10 CFU/g 糞として表されました。

糞便サンプルは、治療期間中に収集されました。 IgA レベルは、ホモジナイズされた糞便サンプルで実行されました。 総ＩｇＡは、ヤギ抗ヒトＩｇＡ－ＨＲＰコンジュゲートを使用して決定した。 反応をテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ；Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｓ．）で展開し、４５０ｎｍで読み取った。 ＯＤ値は、抗ヒトＩｇＡで作成された標準曲線と比較することにより、全ＩｇＡのｎｇ／ｇ糞便に変換された。

便サンプルを調製し、ラクトフェリンについて分析しました。 ラクトフェリンに特異的なポリクローナル抗体がマイクロプレートにプレコートされています。 標準およびサンプル中のラクトフェリンは、固定化された抗体と、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ結合体によって認識されるラクトフェリンに特異的なビオチン化ポリクローナル抗体によって挟まれています。 吸光度は OD 450 nm で読み取ります。 ラクトフェリンは、μg/g 糞として表した。

便サンプルを調製し、カルプロテクチンについて分析した。 上清を回収し、-20℃で凍結しました。 上清を解凍し、カルプロテクチンを定量的カルプロテクチンELISAで分析し、OD 450 nmで読み取った。 カルプロテクチンは、μg/g糞として表した。