益生菌对肠道菌群和免疫调节的影响

根据以下内容评估了一些临床参数：主要结果（腹泻的严重程度）和次要结果，包括体重变化、食欲和每日摄入量、腹胀或腹胀、腹痛或绞痛、便秘、发烧和呕吐。 .

通过 Lymphoprep 分离的外周血，在生理盐水中洗涤两次，在培养基中洗涤一次，然后悬浮在培养基 [RPMI 1640] 中，达到 1 x 106/mL 的密度。 通过密度梯度离心从献血者血沉棕黄层中分离出 PBMC。 将PBMC的浓度调至完全培养基中106个细胞/ml，将细胞转移至24孔板。细胞表面表型表达和细胞内染色。 细胞将使用一组针对淋巴细胞、单核细胞和适当的物种特异性免疫球蛋白 G 同种型对照表达的表面抗原的单克隆抗体 (MAb) 进行染色。 将使用 FACScan (Becton Dickinson) 获取细胞并使用 Cell Quest 软件进行分析。

为了评估肠道细菌的定植情况，在益生菌或安慰剂治疗后的第 0 天（患者入组当天）、第 3 天和第 7 天收集每位患者的粪便样本。 将粪便标本称重、匀浆、连续稀释并铺在选择性琼脂上用于细菌分析。 粪便细菌计数表示为 log10 CFU/g 粪便。

在处理期间收集粪便样品。 IgA 水平是在均质化的粪便样本上进行的。 使用山羊抗人 IgA-HRP 偶联物测定总 IgA。 反应用四甲基联苯胺（TMB；Zymed Labs.）展开并在 450 nm 处读数。 通过与用抗人 IgA 绘制的标准曲线进行比较，OD 值被转换为总 IgA 的 ng/g 粪便。

制备粪便样品并分析乳铁蛋白。 乳铁蛋白特异性多克隆抗体已预先包被到微孔板上。 标准品和样品中的乳铁蛋白被固定化抗体和乳铁蛋白特异的生物素化多克隆抗体夹在中间，乳铁蛋白可被链霉亲和素-过氧化物酶偶联物识别。 在 OD 450 nm 处读取吸光度。 乳铁蛋白表示为 μg/g 粪便。

制备粪便样品并分析钙卫蛋白。 收集上清液并冷冻于-20℃。 解冻上清液并用定量钙卫蛋白 ELISA 分析钙卫蛋白并在 OD 450 nm 处读数。 钙卫蛋白表示为μg/g粪便。