프로바이오틱스가 장내 세균수 및 면역 조절에 미치는 영향

일부 임상 매개변수는 다음에 따라 평가되었습니다. 1차 결과(설사의 중증도) 및 체중 변화, 식욕 및 일일 섭취량, 팽만감 또는 복부 팽만, 복통 또는 배앓이, 변비, 발열 및 구토를 포함한 2차 결과도 평가되었습니다. .

Lymphoprep으로 분리한 말초 혈액, 생리 식염수로 두 번, 배지에서 한 번 세척하고 배지[RPMI 1640]에 1 x 106/mL의 밀도로 현탁합니다. PBMC는 밀도 구배 원심분리에 의해 혈액 기증자 버피 코트로부터 분리됩니다. PBMC의 농도는 완전 배지에서 ml당 106개 세포로 조정될 것이며, 세포는 24-웰 플레이트로 옮겨질 것이다. 세포 표면 표현형 발현 및 세포내 염색. 세포는 림프구, 단핵구 및 적절한 종 특이적 면역글로불린 G 이소형 대조군에 의해 발현되는 표면 항원에 대한 단클론 항체(MAb) 패널을 사용하여 염색됩니다. FACScan(Becton Dickinson)을 사용하여 세포를 획득하고 Cell Quest 소프트웨어로 분석합니다.

장내 세균의 콜로니화를 평가하기 위해 프로바이오틱스 또는 위약 치료 후 0일(환자가 등록된 날), 3일 및 7일에 각 환자로부터 배설물 샘플을 수집했습니다. 배설물 표본의 무게를 재고, 균질화하고, 연속적으로 희석하고 박테리아 분석을 위해 선택적 한천에 도말했습니다. 배설물 박테리아 수는 log10 CFU/g 배설물로 표현되었습니다.

대변 ​​샘플은 치료 기간 동안 수집되었습니다. IgA 수준은 균질화된 배설물 샘플에서 수행되었습니다. 총 IgA는 염소 항-인간 IgA-HRP 접합체를 사용하여 결정되었습니다. 반응은 테트라메틸 벤지딘(TMB; Zymed Labs.)으로 전개되었고 450nm에서 판독되었다. OD 값은 항인간 IgA로 개발된 표준 곡선과 비교하여 총 IgA의 ng/g 분변으로 변환되었습니다.

대변 ​​샘플을 준비하고 락토페린에 대해 분석했습니다. 락토페린에 특이적인 다클론 항체가 마이크로플레이트에 미리 코팅되어 있습니다. 표준물질과 샘플의 락토페린은 고정된 항체와 락토페린에 특이적인 비오티닐화된 다클론 항체에 의해 끼워져 있으며, 이는 스트렙타비딘-과산화효소 접합체에 의해 인식됩니다. 흡광도는 OD 450 nm에서 읽습니다. 락토페린은 μg/g 대변으로 표현되었습니다.

대변 ​​샘플을 준비하고 칼프로텍틴에 대해 분석했습니다. 상청액을 수집하고 -20°C에서 동결시켰다. 상청액을 해동하고 칼프로텍틴을 정량적 칼프로텍틴 ELISA로 분석하고 OD 450nm에서 판독했습니다. 칼프로텍틴은 μg/g 대변으로 표현되었습니다.