Effekt af probiotika på tarmbakteriepopulation og immunmodulation

Nogle kliniske parametre blev evalueret i henhold til følgende: primært resultat (sværhedsgrad af diarré) og sekundært resultat inklusive kropsvægtændring, appetit og dagligt indtag, oppustethed eller abdominal udspilning, mavesmerter eller kolik, forstoppelse, feber og opkastning blev også vurderet .

Perifert blod isoleret med Lymphoprep, vasket to gange i normalt saltvand og én gang i medium og suspenderet i medium [RPMI 1640] til en densitet på 1 x 106/ml. PBMC'er vil blive isoleret fra bloddonor buffy coats ved tæthedsgradientcentrifugering. Koncentrationen af ​​PBMC'er vil blive justeret til 106 celler pr. ml i komplet medium, og cellerne vil blive overført til 24-brønds plader. Celleoverfladefænotypeekspression og intracellulær farvning. Celler vil blive farvet ved hjælp af et panel af monoklonalt antistof (MAb) rettet mod overfladeantigener udtrykt af lymfocytter, monocytter og de passende artsspecifikke immunoglobulin G isotypekontroller. Celler vil blive erhvervet ved hjælp af en FACScan (Becton Dickinson) og analyseret med Cell Quest-software.

For at vurdere koloniseringen af ​​tarmbakterier blev der indsamlet fækale prøver fra hver patient på dag 0 (dagen, hvor patienterne blev indskrevet), dag 3 og dag 7 efter probiotika eller placebobehandling. De fækale prøver blev vejet, homogeniseret og seriefortyndet og udpladet på selektiv agar til analyse af bakterier. Fækalt bakterietal blev udtrykt som log10 CFU/g fæces.

Fækale prøver blev indsamlet under behandlingsperioden. IgA-niveauer blev udført på homogeniserede fækale prøver. Total IgA blev bestemt under anvendelse af gede-anti-humant IgA-HRP-konjugat. Reaktionen blev udviklet med tetramethylbenzidin (TMB; Zymed Labs.) og aflæst ved 450 nm. OD-værdier blev konverteret til ng/g fæces af total IgA ved sammenligning med en standardkurve udviklet med anti-humant IgA.

Afføringsprøverne blev forberedt og analyseret for lactoferrin. Et polyklonalt antistof specifikt for lactoferrin er blevet præcoatet på en mikroplade. Lactoferrin i standarder og prøver er sandwichet af det immobiliserede antistof og et biotinyleret polyklonalt antistof specifikt for lactoferrin, som genkendes af et streptavidin-peroxidase-konjugat. Absorbans aflæses ved OD 450 nm. Lactoferrin blev udtrykt som μg/g fæces.

Afføringsprøverne blev forberedt og analyseret for calprotectin. Supernatanten blev opsamlet og frosset ved -20°C. Supernatanterne blev optøet, og calprotectin blev analyseret med den kvantitative calprotectin ELISA og aflæst ved OD 450 nm. Calprotectin blev udtrykt som μg/g fæces.