Probioottien vaikutus suoliston bakteeripopulaatioon ja immuunimodulaatioon
Vaihe 4 Probioottien tutkimus suoliston bakteeripopulaatiosta ja immuunimodulaatiosta
Tasapaino immunogeenisten ja tolerogeenisten aktiivisuuksien välillä ihmisen immuunijärjestelmässä riippuu voimakkaasti mikroflooran aiheuttamista pro- ja anti-inflammatorisista vaikutuksista. Probiootit ovat tärkeitä mikroflooran komponentteja. Eri probioottikannusten ja immuunijärjestelmän solujen vuorovaikutukset ovat suurelta osin tuntemattomia.
On monia mekanismeja, joilla probiootit parantavat suoliston terveyttä, mukaan lukien immuniteetin stimulointi, kilpailu rajoitetuista ravintoaineista, epiteelin ja limakalvon kiinnittymisen estäminen, epiteelin tunkeutumisen estäminen ja antimikrobisten aineiden tuotanto.
Ulosteen immunoglobuliini A(IgA), laktoferriini ja kalprotektiini määritettiin entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA) ja niitä verrattiin eri ryhmissä. Myös muita kliinisiä oireita tai merkkejä, kuten kuumetta, oksentelua, ripulia, vatsakipua, vatsan turvotusta, päivittäistä saantia ja ruumiinpainoa, arvioitiin.
Tutkimuksemme ensimmäisenä tavoitteena on arvioida probioottien ja niiden valmistustuotteiden roolia suoliston bakteeripopulaation palautumisessa. Tutkimuksemme toisena tavoitteena on määrittää probioottien immunomoduloivat tai anti-inflammatoriset vaikutukset isäntään (ihmiseen). Pyrimme ymmärtämään probiootteja ja suoliston mikro-organismien ja isäntävuorovaikutuksia sekä limakalvojen immuunivasteita probiooteille suolistossa.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Joitakin kliinisiä parametreja arvioitiin seuraavien perusteella: primääritulos (ripulin vaikeusaste) ja toissijainen lopputulos, mukaan lukien painonmuutos, ruokahalu ja päivittäinen saanti, turvotus tai vatsan turvotus, vatsakipu tai koliikki, ummetus, kuume ja oksentelu. .
Perifeerinen veri eristettiin Lymphoprepilla, pestiin kahdesti normaalissa suolaliuoksessa ja kerran elatusaineessa ja suspendoitiin elatusaineeseen [RPMI 1640] tiheyteen 1 x 106/ml. PBMC:t eristetään verenluovuttajien buffy coatista tiheysgradienttisentrifugoinnilla. PBMC:iden konsentraatio säädetään arvoon 106 solua/ml täydellisessä elatusaineessa, ja solut siirretään 24-kuoppaisille levyille. Solupinnan fenotyypin ilmentyminen ja solunsisäinen värjäytyminen. Solut värjätään käyttämällä monoklonaalisten vasta-aineiden (MAb) paneelia, joka on suunnattu lymfosyyttien, monosyyttien ja asianmukaisten lajispesifisten immunoglobuliini G-isotyyppikontrollien ilmentämiä pinta-antigeenejä vastaan. Solut hankitaan käyttämällä FACScania (Becton Dickinson) ja analysoidaan Cell Quest -ohjelmistolla.
Suolistobakteerien kolonisaation arvioimiseksi jokaiselta potilaalta kerättiin ulostenäytteet päivänä 0 (päivä, jolloin potilaat otettiin mukaan), päivänä 3 ja päivänä 7 probiootti- tai plasebohoidon jälkeen. Ulostenäytteet punnittiin, homogenisoitiin ja sarjalaimennettiin ja maljattiin valikoivalle agarille bakteerien analysointia varten. Ulostebakteerien määrä ilmaistiin log10 CFU/g ulostetta.
Ulostenäytteet kerättiin hoitojakson aikana. IgA-tasot mitattiin homogenoiduista ulostenäytteistä. Kokonais-IgA määritettiin käyttämällä vuohen anti-ihmis-IgA-HRP-konjugaattia. Reaktio kehitettiin tetrametyylibentsidiinillä (TMB; Zymed Labs.) ja luettiin 450 nm:ssä. OD-arvot muunnettiin kokonais-IgA:n ng/g ulosteiksi verrattuna anti-ihmis-IgA:lla kehitettyyn standardikäyrään.
Ulostenäytteet valmistettiin ja niistä analysoitiin laktoferriini. Laktoferriinille spesifinen polyklonaalinen vasta-aine on esipäällystetty mikrolevylle. Laktoferriini on standardeissa ja näytteissä immobilisoidun vasta-aineen ja laktoferriinille spesifisen biotinyloidun polyklonaalisen vasta-aineen välissä, jonka streptavidiini-peroksidaasikonjugaatti tunnistaa. Absorbanssi luetaan OD 450 nm:ssä. Laktoferriini ilmaistiin μg/g ulostetta.
Ulostenäytteet valmistettiin ja niistä analysoitiin kalprotektiini. Supernatantti kerättiin ja jäädytettiin -20 °C:ssa. Supernatantit sulatettiin ja kalprotektiini analysoitiin kvantitatiivisella kalprotektiini-ELISA:lla ja luettiin OD 450 nm:ssä. Kalprotektiini ilmaistiin μg/g ulostetta.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Odotettu)
Vaihe
- Vaihe 4
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Taoyuan, Taiwan, 333
- Chang Gung Memorial Hospital
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Ripuli
- ummetus
Poissulkemiskriteerit:
- Shokki
- Sepsis
- Aiempi GI-leikkaushistoria
- Immuunipuutos
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Hoito
- Jako: Satunnaistettu
- Inventiomalli: Crossover-tehtävä
- Naamiointi: Kaksinkertainen
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: 97-0549B
|
probiootit (antibiophilus (Lactobacillus casei), bio-kolme) 4 x 10^8 CFU/päivä
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Aikaikkuna |
|---|---|
|
Ripulin kesto, ulosteiden määrä, suolen tai sytokiinin bakteeriviljelmä
Aikaikkuna: 4 viikon sisällä
|
4 viikon sisällä
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
painonmuutos, ruokahalu ja päiväsaanti, ulosteen IgA-, laktoferriini- ja kalprotektiinitasot
Aikaikkuna: Kahden ensimmäisen viikon aikana
|
Toissijaiset seuraukset mukaan lukien painonmuutos, ruokahalu ja päivittäinen saanti, turvotus tai vatsan turvotus, vatsakipu tai koliikki, ummetus, kuume ja oksentelu arvioitiin myös.
IgA-tasot ja bakteeriviljelmä suoritettiin homogenoiduilla ulostenäytteillä.
Ulosteen laktoferriini- ja kalprotektiinitasot mitattiin ulostenäytteillä.
|
Kahden ensimmäisen viikon aikana
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Tutkijat
- Päätutkija: Chien-Chang Chen, MD, Pediatric Department, Chang Gung Memorial Hospital, Taiwan
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvio)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Arvio)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 97-0549B
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .