Effekt av probiotika på tarmbakteriepopulation och immunmodulering

Vissa kliniska parametrar utvärderades enligt följande: primärt utfall (allvarlighetsgraden av diarré) och sekundärt utfall inklusive kroppsviktsförändring, aptit och dagligt intag, uppblåsthet eller utspänd buk, buksmärtor eller kolik, förstoppning, feber och kräkningar. .

Perifert blod isolerat med Lymphoprep, tvättat två gånger i normal koksaltlösning och en gång i medium, och suspenderat i medium [RPMI 1640] till en densitet av 1 x 106/ml. PBMCs kommer att isoleras från blodgivarens buffy coats genom densitetsgradientcentrifugering. Koncentrationen av PBMC kommer att justeras till 106 celler per ml i komplett medium, och cellerna kommer att överföras till 24-brunnars plattor. Cellytfenotypexpression och intracellulär färgning. Celler kommer att färgas med en panel av monoklonal antikropp (MAb) riktad mot ytantigener uttryckta av lymfocyter, monocyter och lämpliga artspecifika immunoglobulin G isotypkontroller. Celler kommer att förvärvas med hjälp av en FACScan (Becton Dickinson) och analyseras med programvaran Cell Quest.

För att bedöma koloniseringen av tarmbakterier, togs fekala prover från varje patient på dag 0 (dagen då patienterna inkluderades), dag 3 och dag 7 efter probiotika eller placebobehandling. De fekala proverna vägdes, homogeniserades och serieutspäddes och ströks ut på selektiv agar för analys av bakterier. Antalet fekala bakterier uttrycktes som log10 CFU/g avföring.

Fekala prover samlades in under behandlingsperioden. IgA-nivåer utfördes på homogeniserade fekala prover. Totalt IgA bestämdes med användning av get-anti-humant IgA-HRP-konjugat. Reaktionen framkallades med tetrametylbensidin (TMB; Zymed Labs.) och avlästes vid 450 nm. OD-värden omvandlades till ng/g feces av totalt IgA genom jämförelse med en standardkurva utvecklad med anti-humant IgA.

Avföringsproverna preparerades och analyserades med avseende på laktoferrin. En polyklonal antikropp specifik för laktoferrin har förbelagts på en mikroplatta. Laktoferrin i standarder och prover är inklämt av den immobiliserade antikroppen och en biotinylerad polyklonal antikropp specifik för laktoferrin, som känns igen av ett streptavidin-peroxidaskonjugat. Absorbansen avläses vid OD 450 nm. Laktoferrin uttrycktes som μg/g avföring.

Avföringsproverna preparerades och analyserades med avseende på kalprotektin. Supernatanten uppsamlades och frystes vid -20°C. Supernatanterna tinades och calprotectin analyserades med den kvantitativa calprotectin ELISA och avlästes vid OD 450 nm. Calprotectin uttrycktes som μg/g avföring.