PED/PEA-15 タンパク質、PCOS、肥満、インスリン感受性指数、メトホルミン、経口避妊薬

科目：

20人の肥満PCOS女性（年齢：24.7±18歳、BMI：30±2.4kg/m2）が、ナポリのフェデリコ2世大学分子臨床内分泌腫瘍学部の内分泌病棟に連続して入院し、この臨床研究。 PCOSの診断は、PCOSの診断基準に従って行われた。研究登録時に、患者はインスリン感受性に従って2つの治療群に無作為に割り付けられた。 OCP グループ、10 人の患者 (BMI 29.7±1.5 kg/m2) に、エチニルエストラジオール 30 μg とドロスピレノン 30 mg を月 21 日投与しました。 MET グループの患者 10 人（BMI 30.4±3.1 kg/m2）には、メトホルミン 1250 mg を 1 日 3 回投与しました。 追跡期間は6か月でした。 対照グループは、年齢が一致した10人の健康な女性ボランティアで構成されました。

方法:

すべての PCOS 女性は無排卵であったため、プロゲステロン負荷試験 (100 mg の天然プロゲステロンを筋肉内投与、Prontogest、Amsa、ローマ、イタリア) を受けました。これにより、すべての PCOS 女性に子宮出血が誘発されました。 2 型糖尿病または異常な耐糖能の存在を除外するために、経口耐糖能検査 (OGTT) が実施され、OGTT に対する正常な耐糖能反応が「糖尿病の診断と分類に関する専門家委員会の報告書」に従って定義されました。 '。

すべての人体計測は、被験者が薄着のみを着用し、靴を履いていない状態で行われました。 各女性の体重と身長を測定して、BMI [体重 (kg) を身長の二乗 (m2) で割ったもの、kg/m2] を計算しました。 身長は壁に取り付けられたスタジオメーターを使用して最も近いcm単位で測定されました。 体重 (BW) は、校正された平均台スケールを使用して 50 g 単位で測定されました。

患者には標準化された面接が行われ、肥満の期間、食事パターン、喫煙習慣、運動に関する情報が得られた。 特に、被験者には毎日の身体活動量（運動なし、週あたり 2 ～ 3 時間以下、週あたり 2 ～ 3 時間以上）を記録するよう依頼されました。 入院前の食物摂取と食歴は、コンピュータ支援面接（Winfood 1.5、Medimatica srl、Martinsicuro、イタリア）を使用して熟練した栄養士によって評価されました。 すべてのPCOS女性は標準カロリーの食事を受けました。

アッセイ:

血液サンプルは、患者を安静姿勢で一晩絶食させた後、08:00 から 09:00 の間に肘前静脈から採取しました。 OGTT は 75 g のブドウ糖を使用して実行されました。 血漿グルコースおよびインスリンの測定のために、血液サンプルを0、30、60、90、120分に採取した。 空腹時血漿グルコース (FPG) レベルは、OGTT 直後にグルコース オキシダーゼ法によって測定されました。 空腹時血漿インスリン (FPI) サンプルを直ちに遠心分離し、血漿を分離し、アッセイまで -20℃ で保存しました。 ＦＰＩは、市販のキット（Ｉｍｍｕｎｏｌｉｔｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ、ロサンゼルス、カリフォルニア州）を使用した固相化学発光酵素イムノアッセイによって測定した。 1/HOMA-IR、QUICKI、ISIを計算しました。

PED/PEA-15 タンパク質は、6% デキストランによる分離後、10 ～ 12 ml の新たに収集した未凝固全血から得られた白血球 (WBC) 溶解物において、ウェスタンブロット分析を使用して測定されました。 ウェスタンブロット分析のために、WBCをTAT緩衝液中4℃で可溶化し、500gで20分間遠心分離し、上清画分を使用するまで-20℃で保存した。 50μgの溶解物タンパク質をLaemmli緩衝液中で100℃で加熱した。 タンパク質を15% SDS-PAGEで分離し、その後0・45 mm Immobileon-P膜(Millipore、Bedfort、MA)に転写した。 フィルターを1:2000希釈のPED/PEA-15抗血清でプローブし、増強された化学発光およびオートラジオグラフィーによって明らかにした。 タンパク質バンドはレーザー濃度測定法によって定量化され、ピクセルのパーセンテージ (任意の単位)​​ として表されました。